本发明专利技术涉及一种利用微波固相合成法合成药物多肽那法瑞林的方法。按照固相合成的方法利用微波反应仪依次连接具有Fmoc保护的氨基酸，获的保护的十肽树脂，其间依次脱去Fmoc保护基团，用DIC/HOBt或DIC/HOAt或BOP/HOBt或BOP/HOAt或HBTU/HOBt或HBTU/HOAt或HATU/HOBt或HATU/HOAt或HCTU/HOBt其中的一种为缩合剂进行接肽反应，得到保护的十肽树脂后，同步进行脱侧链保护基团及切肽，获得那法瑞林粗品，并经C18色谱柱进行分离纯化，获得所述的那法瑞林，然后可再经过冷冻干燥，获得那法瑞林醋酸盐或三氟乙酸盐产品。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种多肽的固相合成法，特别涉及到一种合成那法瑞林的方法。
技术介绍
那法瑞林又名醋酸那法瑞林技术主要应用是为促性腺激素释放激素（GnRH)的类 似物。用于治疗子宫内膜异位症，可消除疼痛、减轻子宫内膜损伤。目前的常规那法瑞林生 产工艺中想要充分耦合一个氨基酸到树脂上时往往需要1个小时到2个小时不等.脱除 fmoc保护基时一般需要20分钟到40分钟.从上述时间数据上我们出来，用常规方法制作 时间太长，也因此造成了该药品的价格居高不下。
技术实现思路
针对上述技术缺陷，本专利解决的技术问题是：解决目前那法瑞林生产工艺的不 便捷及普通固相反应法和液相反应法收率较低，反应效率较低的问题。实现充分耦合一个 氨基酸到树脂上只需3分钟，脱除fmoc保护基时只需要1分钟左右的目的。 为完成上述专利技术目的，本专利技术是这样实现的：以Fmoc-Linker-AM-Resin或 Fmoc-Linker-MBHA-Resin为起始原料，按照固相合成的方法利用微波反应仪依次连接具有 Fmoc保护的氨基酸，获的保护的十肽树脂，其间依次脱去Fmoc保护基团，用DIC/HOBt或 DIC/HOAt 或 B0P/H0Bt 或 B0P/H0At 或 HBTU/HOBt 或 HBTU/HOAt 或 HATU/HOBt 或 HATU/HOAt 或HCTU/HOBt其中的一种为缩合剂进行接肽反应，得到保护的十肽树脂后，同步进行脱侧 链保护基团及切肽，获得那法瑞林粗品，并经C18色谱柱进行分离纯化，获得所说的那法瑞 林，然后可再经过冷冻干燥，获得那法瑞林醋酸盐或三氟乙酸盐产品。 本专利所利用的微波合成的方法，每接入一个氨基酸所耗费的时间比传统方法缩 短了 10倍。合成一条10个氨基酸的多肽只需2. 5小时。传统的方法需要数小时甚至数天 才能在肽链加入一个氨基酸。同时微波也有效的提高了去保护，耦合及切割过程的反应率。 从树脂上切割多肽只需要10 - 15分钟。在2 - 3分钟内，微波就可以辅助完成70% - 80%的去保护及耦合反应。 具体包括以下步骤， 选用 Fmoc-Linker-AM-Resin 或 Fmoc-Linker-MBHA-Resin 为原料与 DCM 混合真空 栗抽干，加入脱帽试剂，用真空栗抽干，重新加入脱帽剂利用微波反应3分钟（30°C - 40°C )，用真空栗抽干，用DMF洗涤3次，无水甲醇洗涤3次，重蒸过的DCM洗涤3次，加入 Fmoc-Gly-OH、HOBt、分析级的DMF、DIC利用微波反应5分钟抽干，用工业级的DMF洗涤3 次，无水甲醇洗涤3次，重蒸过的DCM洗涤3次，抽干； b、制备 Fmoc-Pro -Gly-Linker AM Resin 在步骤1的Fmoc-Gly-Linker AM Resin树脂中，加入脱帽试齐丨」，利用微波30~60°C反 应2分钟，抽干，重新加入脱帽剂30~60°C微波反应3分钟，抽干，洗涤，加入Fmoc-Pro-OH、 HOBt分析级的DMF、DIC微波反应5分钟，抽干，洗涤，抽干，获得Fmoc- Pro-Gly-Linker AM Resin； c、制备Fmoc-Arg(Pbf)-Pr〇-Gly-Linker AM Resin 按第二步工艺，加入 Fmoc-Arg(Pbf)-〇H、HOBt ; d、 制备 Fmoc-Leu-Arg(Pbf)-Pr〇-Gly-Linker AM Resin 重复上一步加入Fmoc-Leu-OH、HOBt ; e、 制备 Fmoc- D_2_Nal -Leu-Arg(Pbf)-Pr〇-Gly-Linker AM Resin 重复上一步加入Fmoc- D-2-Nal-OH、HOBt ; f、 制备完整多肽序列 在步骤 5Fmoc_ D_2_Nal -Leu-Arg(Pbf)-Pr〇-Gly-Linker AM Resin 的基础上按照 2-5 步的步骤依次将剩余的 Fmoc_Tyr(Tbu)-〇H，Fmoc_Ser(Tbu)-〇H，Fmoc_Trp(Boc)-〇H， Fmoc-His (Trt) -OH，4个氨基酸原料接上多肽序列 G、将特殊原料L-Pyroglutamicacid接上多肽序列。重复第2步，加入 L-Pyroglutamicacid、HBTU，获得获得 Pyr-His(Trt)-Trp(Boc )-Ser(Tbu)-Tyr(Tbu)-D-2-Nal-Leu-Arg(Pbf)-Pr〇-Gly-LinkerAMResin h\Pyr-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(Tbu)-Tyr(Tbu)-D-2-Nal-Leu-Arg(Pbf)-Pr〇-Gly-Li nkerAMResin用工业级的DMF洗涤3次，无水甲醇洗涤3次，重蒸过的DCM洗涤3次，利用 无水甲醇抽干，树脂成很干的颗粒； i、把抽干的 Pyr-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(Tbu)-Tyr(Tbu)-D-2-Nal-Leu-Arg(Pbf)-Pr〇-Gly-Link erAMResin倒入玻璃的茄型瓶，加入预冷5°C~_10°C的切肽试剂中，20°C~40°C切肽微 波反应15-20分钟，过滤除去树脂，加乙醚沉淀，离心，用乙醚反复洗涤6次，在室温，置干燥 器中减压抽干，获得那法瑞林粗品。 对上述技术方案作进一步的改进，氨基酸耦合时设定反应功率为130W，反应温 度为40°C -50°C，反应时间为l_3min。脱除FM0C保护基时设定功率为70W，反应温度为 15°C _25°C，反应时间lmin。切割树脂时设定功率为70W，将树脂肽加入预冷5°C~-10°C的 切肽试剂中，微波反应温度为15°C -25°C，反应时间为15min-20min。 本专利的特点是：工艺稳定，原辅材料来源方便，利用微波反应大大降低了生产 周期，生产成本低，因微波反应效率高提高了收率高，质量稳定，生产成本低，极具市场竞争 力，每步接肽收率可以达到98%以上，降低了成本。同时工艺采用温和的Fmoc路线，每步脱 Fmoc仅用20%的PIP，每步脱Fmoc和耦合反应只要5分钟左右，大大缩短了生产周期，切割 采用TFA，避免Boc路线中使用氟化氢，大大减少了三废，有利于工业化生产。 【具体实施方式】 1、制备 Fmoc-Gly -LinkerAM Resin 选用 Fmoc-Linker-AM-Resin 或 Fmoc-Linker-MBHA-Resin 倒入接肽瓶，加入大约树 脂2. 5倍体积的DCM，浸泡10分钟（常温）后用真空栗抽干，加入脱帽试剂放入恒温振荡 器反应5分钟，用真空栗抽干，重新加入脱帽剂利用微波反应3分钟（30°C - 40°C)，用 真空栗抽干，用工业级的DMF洗涤3次，无水甲醇洗涤3次，重蒸过的DCM洗涤3次，加入 Fmoc-Gly-OH、HOBt、分析级的DMF、DIC利用微波反应5分钟（30°C~50°C )，用真空栗 抽干，用工业级的DMF洗涤3次，无水甲醇洗涤3次，重蒸过的DCM洗涤3次，抽干，获得 Fmoc-Gly -Linker AM Resin; 脱帽试剂与Fmoc-Linker-AM-Resin或Fmoc-Lin本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种利用微波固相合成法合成药物多肽那法瑞林的方法，其特征在于：以Fmoc‑Linker‑AM‑Resin或Fmoc‑Linker‑MBHA‑Resin为起始原料，按照固相合成的方法利用微波反应仪依次连接具有Fmoc保护的氨基酸，获的保护的十肽树脂，其间依次脱去Fmoc保护基团，用DIC/HOBt或DIC/HOAt或BOP/HOBt或BOP/HOAt或HBTU/HOBt或HBTU/HOAt或HATU/HOBt或HATU/HOAt或HCTU/HOBt其中的一种为缩合剂进行接肽反应，得到保护的十肽树脂后，同步进行脱侧链保护基团及切肽，获得那法瑞林粗品，并经C18色谱柱进行分离纯化，获得所述的那法瑞林，然后可再经过冷冻干燥，获得那法瑞林醋酸盐或三氟乙酸盐产品。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王锡平，
申请(专利权)人：苏州强耀生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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