本发明专利技术公开了一种安全高效的地加瑞克合成方法。本发明专利技术方法以氨基树脂为起始树脂载体，通过固相合成法依次连接地加瑞克序列中相对应的Fmoc-氨基酸，其中最末位氨基酸采用Ac-D-2Nal-OH，经缩合反应及脱保护反应，得到全保护地加瑞克肽树脂；再进行酸解切割和乙醚沉降，得到地加瑞克粗肽；经色谱纯化、醋酸转盐以及冷冻干燥得到醋酸地加瑞克。本发明专利技术选用Oxyma作为安全高效的偶联试剂，以提高工艺安全性减少工艺副产物。本发明专利技术工艺既可以采用固相合成也可以采用液相合成，工艺副产物少，易于分离纯化。所得最终的醋酸地加瑞克产物纯度高达99％，收率高达61％，具有可观的经济适用价值和广泛的应用前景。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于制药
，特别涉及一种地加瑞克及地加瑞克醋酸盐的工业化制备新工艺。
技术介绍
地加瑞克（Degarelix）由FerringPharmaceuticals公司开发（TradeName:Firmagon），经美国FDA批准，于2008年12月24日在美国上市，用于治疗晚期前列腺癌。地加瑞克是一种促性腺激素释放激素（GnRH）受体抑制剂类药物，可逆性地抑制垂体GnRH受体来减少促性腺激素释放继而抑制睾酮的释放。地加瑞克通过抑制对前列腺癌持续生长至关重要的睾酮来延缓前列腺癌的生长和恶化。以激素方法治疗前列腺癌来降低睾酮浓度在初期时却造成睾酮浓度激增，此初始刺激该激素受体可暂时性地促进而非抑制肿瘤生长，而地加瑞克则不会有这种现象。Ⅲ期临床研究显示，地加瑞克降低睾酮浓度的效果至少可与亮丙瑞林储库型控释注射剂（LupronDepot）相媲美，而且降低睾酮浓度显效快。在治疗的第3日，地加瑞克组96％达到去生殖腺的睾酮浓度，亮丙瑞林组效果为0％。第14日，地加瑞克组99％达到去生殖腺的睾酮浓度，亮丙瑞林组为18％。在临床研究中，前列腺特异抗原（PSA）浓度可作为监测的第2个疗效判断终点。使用地加瑞克2周后降低PSA64％，1月后85％，3月后95％，在治疗的整个1年中始终抑制PSA。地加瑞克在临床研究中报道的最常见的不良反应是：注射部位反应（疼痛，红肿和肿胀），热潮红，体重增加，乏力和某些肝酶浓度升高。地加瑞克是一种含有7个非天然氨基酸的线性十肽，肽序列为：Ac-D2Nal1-DPhe(4-Cl)2-D-3Pal3-Ser4-4Aph(L-Hor)5-D-4Aph(Cbm)6-Leu7-Ilys8-Pro9-DAla10-NH2化学结构为（结构1）：目前与地加瑞克合成相关的报道如下。专利CN102329373A的地加瑞克固相合成工艺包括如下步骤：以Fmoc保护的氨基树脂为起始原料，按照固相合成的方法，用DIC/HOBt或DIC/HOAt为偶联剂进行接肽反应，按照氨基酸序列依次连接保护氨基酸，其中5位苯丙胺酸残基侧链氨基先以Trt或Alloc保护，去保护后偶联上氢化乳清酸，裂解得到粗肽，纯化后得到精肽（收率：40%，纯度：99.8%）。该方法由于在树脂上使用了TFA除去三苯甲基，会影响酸敏感的Boc等基团，而使用四（三苯基膦）钯脱去Alloc，金属残留会影响重金属含量超标，会导致产品质量不合格。专利CN103992392A的合成方法以Fmoc保护的氨基树脂为固相载体，HBTU/HOBt/DIEA作为氨基酸偶联剂，用ivDde代替5位苯丙氨酸苯环4位氨基相连的乳清酸片段，从C端到N端依次缩合反应连接10个保护的氨基酸，得到全保护肽树脂，然后脱掉N端D-Nal的Fmoc保护基，用乙酸酐和吡啶乙酸化，脱掉ivDde替换上Hor。该方法采用Fmoc-Aph(ivDde)-OH作为原料，此原料合成困难，工艺复杂，不适于工业化规模生产。专利CN102952174A的合成方法以Fmoc保护的氨基树脂为起始原料，按照固相合成的方法，用DIC/HOBt为偶联剂进行接肽反应，5位苯丙氨酸残基侧链氨基相连的氢化乳清酸片段先以三苯甲基保护，使用TFA去保护后偶联上氢化乳清酸。该方法由于在树脂上使用TFA除去三苯甲基，会影响酸敏感的Boc等基团，导致产品质量和收率不高，而且用的生产原料较贵直接导致生产成本偏高。专利CN102428097B的地加瑞克合成方法以Fmoc保护的氨基树脂为起始原料，按照固相合成的方法，用DIC/HOBt为偶联剂进行接肽反应，去保护选用哌啶和烷基取代哌啶，可以防止Aph(L-Hor)的二氢尿嘧啶部分转化为乙内酰脲。该方法为传统的固相多肽合成方法，缺乏足够的新颖性且生产成本高。专利CN103992378A专利技术公开了一种制备醋酸地加瑞克的技术，具体步骤为：首先，在RinkAmideMBHA树脂上依次偶联10个氨基酸，DIC/6-Cl-HOBt作为氨基酸偶联剂，其顺序为：Fmoc-D-Ala-OH,Fmoc-Pro-OH,Fmoc-Ilys(Boc)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-D-4Aph(Dde)-OH,Fmoc-4Aph(Teoc)-OH,Fmoc-Ser(tBu)-OH,Fmoc-D-3Pal-OH,Fmoc-D-Phe(4Cl)-OH,Fmoc-D-2Nal-OH；然后，脱去保护基Fmoc，醋酐封端后用2%水合肼的DMF混合溶液脱去6位D-苯丙氨酸侧链氨基上的Dde，再通过三甲基硅基异氰酸酯DMF溶液引入Cbm；使用四丁基氟化铵DMF混合溶液脱去5位苯丙氨酸侧链氨基上的Teoc，通过偶联反应在该氨基上引入L-Hor。该方法需要在树脂载体上进行多肽合成修饰,操作工艺复杂，不适于工业化规模生产。在专利CN102329373A,CN103992392A,CN10295217A,CN102428097B专利技术公开的地加瑞克合成方法中，6位氨基酸残基D-4-Aph(Cbm)在合成中采用侧链Cbm基团不保护的Fmoc-D-4-Aph(Cbm)-OH或者侧链Cbm用t-Bu保护的Fmoc-D-4-Aph(t-Bu-Cbm)-OH.固相合成中采用侧链不保护的Fmoc-D-4-Aph(Cbm)-OH，如果反应温度控制不当，在最后的乙酰化封端过程中容易产生在侧链Cbm基因上的乙酰化副产物，该副产物难以分离纯化，将影响工艺的效率和产品的质量。采用侧链用叔丁基保护的Fmoc-D-4-Aph(t-Bu-Cbm),在完成连结后需要去除保护基，而Aph(t-Bu-Cbm)侧链上叔丁基的脱除比较困难，需要在强酸水溶液中加热条件下才能完全脱除，加大了产生消旋等杂质的可能性，影响产品质量。在专利CN103992378A专利技术公开的地加瑞克合成方法中，6位氨基酸残基D-4-Aph(Cbm)在合成中采用Fmoc-D-4-Aph(Dde)-OH,最后醋酐封端后用2%水合肼的DMF混合溶液脱去6位D-苯丙氨酸侧链氨基上的Dde，再通过三甲基硅基异氰酸酯DMF溶液引入Cbm，以此来避免在醋酐封端过程中Cbm基团的乙酰化副产物。此工艺操作复杂，不适于工业化规模生产。文献也报道了地加瑞克的Boc固相合成法（2001:880SYNTHLINE）和Boc液相合成法（US6214798B1）。Boc固相合成法需要用HF进行裂解，对人体和环境都会造成很大危害。Boc液相合成法所得地加瑞克纯度较低,只有96%-98%（J.Med.Chem.,2005,48,4851）。目前报道的地加瑞克Fmoc固相合成法均采用了HOBt或类似物作为氨基酸偶联剂,HOBt已经被归类为UN05081.3C类易爆化学品(J.Hazard.Mater.,2005,126,1-7)，在运输和生产过程中有安全隐患。因此需要开发一种反应条件温和，安全有效的地加瑞克固相合成方法。
技术实现思路
针对现有技术的上述缺陷完成了本专利技术。本专利技术的目的是提供一种反应条件温和，生产安全，操作简单，环境污染小，收率高，杂质少，适合规模化生产本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种制备地加瑞克的固相合成方法，其特征在于包括以下步骤：a) 以氨基树脂为固相载体，通过固相合成法依次偶联地加瑞克序列中相对应的Fmoc保护氨基酸或Fmoc保护的地加瑞克的肽片段，最后一个氨基酸采用Ac‑D‑2Nal‑OH，制备得到侧链部分保护或全保护的地加瑞克肽树脂；b) 使用酸解切肽试剂对所述肽树脂进行切割及侧链去保护。
【技术特征摘要】
1.一种制备地加瑞克的固相合成方法，其特征在于包括以下步骤：a)以氨基树脂为固相载体，通过固相合成法依次偶联地加瑞克序列中相对应的Fmoc保护氨基酸或Fmoc保护的地加瑞克的肽片段，最后一个氨基酸采用Ac-D-2Nal-OH，制备得到侧链部分保护或全保护的地加瑞克肽树脂；b)使用酸解切肽试剂对所述肽树脂进行切割及侧链去保护。
2.根据权利要求1所述的制备地加瑞克的方法，其特征在于该方法还包括对产物的纯化步骤。
3.根据权利要求1至2之一所述的制备地加瑞克的方法，其特征在于固相合成法依次偶联的氨基酸为：Fmoc-D-Ala-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-ILys(Boc)-OH，Fmoc-Leu-OH，Fmoc-D-4Aph(Cbm)-OH，Fmoc-4Aph(L-Hor)-OH，Fmoc-Ser(tBu)-OH，Fmoc-D-3Pal-OH，Fmoc-D-Phe(4-Cl)-OH，Ac-D-2Nal-OH。
4.根据权利要求1至3之一所述的制备地加瑞克的方法，其特征在于在a)步骤中使用偶联剂，所述偶联剂选自下列中的一种及其任意组合：HOBt，HOAt，DIC，EDC，BMC，BEC，PIC，PEC，PyBOP，PyAOP，HATU，HBTU，TBTU，TDBTU，HOOBt，Oxyma。
5.根据权利要求4所述的制备地加瑞克的方法，其特征在于在a)步骤中所用的偶联剂为Oxyma与X的组合，其中X=DIC，DCC，E...
【专利技术属性】
技术研发人员：李湘，徐琪，魏忠勇，
申请(专利权)人：中肽生化有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33
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