一种索玛鲁肽的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种索玛鲁肽固相合成方法，属于多肽合成技术领域，所述方法包括以下步骤：以氨基树脂载体，第一个氨基酸Gly使用特殊的经取代的苄基修饰后的结构，通过固相合成法连接主链至Lys

【技术实现步骤摘要】
一种索玛鲁肽的制备方法
[0001]
：本专利技术涉及多肽药物制备领域，尤其是涉及一种固相法制备索玛鲁肽的方法

技术介绍
：
[0002]中文名：索玛鲁肽
[0003]英文名：Semaglutide
[0004]肽序列：H
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His
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Aib
‑
Glu
‑
Gly
‑
Thr
‑
Phe
‑
Thr
‑
Ser
‑
Asp
‑
Val
‑
Ser
‑
Ser
‑
Tyr
‑
Leu
‑
Glu
‑
Gly
‑
Gln
‑
Ala
‑
Ala
‑
Lys(Octadecanedioic
‑
γ
‑
Glu
‑
PEG2
‑
PEG2)
‑
Glu
‑
Phe
‑
Ile
‑
Ala
‑
Trp
‑
Leu
‑
Val
‑
Arg
‑
Gly
‑
Arg
‑
Gly
‑
OH
[0005]分子量：4113.6
[0006]CAS:910463
‑
68
‑2[0007]索玛鲁肽(Semaglutide)是一种新的长效胰高血糖素样肽
‑
1(GLP
‑
1)类似物，原研产品由诺和诺德公司研发。适用于成人2型糖尿病，可使患者血糖水平大幅改善，并降低低血糖风险。于2017年获得FDA批准上市。其结构是GLP
‑
1(7
‑
37)链上8号位的Ala被Aib取代，34号位的Lys被Arg取代，并在26号位的Lys侧链上连接了短链P EG，谷氨酸及十八烷二酸脂肪链修饰。
[0008][0009]使用固相合成法，因其操作简便，后处理简单，是大批量生产多肽的常规方式。对于索玛鲁肽这样C端为羧酸基团肽链，大都使用Wang树脂或CTC树脂。如CN108059666B、CN110372785B。本专利技术人在实验过程中发现，Wang树脂的缺点在于，当使用主链带有Dde保护基的Lys连接Lys
26
，在连接完侧链之后，需要在固相树脂上使用水合肼溶液脱除Dde保护基。肽链与Wang树脂结合的酯结构会发生大量肼解，使得肽链从固相树脂上脱落而导致合成收率大幅降低。CTC树脂的缺点在于其本身对于温度等较敏感，在固相合成中别是像索玛鲁肽这样长链的合成过程中，也会发生肽链从树脂上脱落，使得合成收率大幅降低。此外，由于索玛鲁肽序列C端首个氨基酸为Gl y，由于Gly自身结构的特点，使其在连接树脂载体时极易产生[+Gly]的杂质，此杂质与目标肽的性质相近，在纯化时难易分离，导致产品收率降低。

技术实现思路
：
[0010]有鉴于此，开发一种避免合成过程中肽链脱落，合成收率高且节约成本的索玛鲁肽制备方法十分必要。为实现本专利技术的目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0011]一种索玛鲁肽的制备方法，包括：
[0012]步骤1)将经取代的苄基修饰后的Gly与氨基树脂缩合得到Gly
‑
氨基树脂。
[0013]第37号位Gly采用如下结构的砌块，结构式：
[0014][0015]步骤2)取步骤1制得的Gly
‑
氨基树脂，按照索玛鲁肽主链序列，利用固相合成法连接保护的氨基酸或多肽至Glu
27
。
[0016]步骤3)使用主链带有Dde保护基的Lys连接Lys
26
，按照侧链序列连接侧链至十八烷二酸。
[0017]步骤4)脱除Lys
26
主链保护基Dde，按照主链序列，利用固相合成法连接保护的氨基酸或多肽连接至His7。裂解肽树脂得到粗品，经纯化、冻干后得到索玛鲁肽纯品。
[0018]作为优选，步骤1)合成Gly
‑
氨基树脂所用的树脂为MBHA树脂，其初始取代度为0.1～0.8mmol/g。因为肽链序列比较长，取代度过高，会导致连接更加困难；取代度过低，会对试剂造成浪费，对生产设备的规模和性能提出过高的要求，没法进行大规模工业化生产。
[0019]作为优选，步骤1)中使用的Gly为结构式1和结构式4，有效避免了传统使用W ang树脂或CTC树脂收率低及C端产生[+Gly]杂质的问题。
[0020]作为优选，步骤2)、步骤3)、步骤4)中偶联的偶联试剂为HOBt、HOAt与DIC的混合物，或PyAop、PyBop与碱的混合物，或HBTU、HATU与碱的混合物。其中，有机碱选自DIPEA、NMM中的一种。更优选为HOBt与DIC的组合。
[0021]作为优选，步骤1)和步骤2)中氨基酸与缩合试剂的比例为1:0.9～1:1。
[0022]作为优选，步骤4)中所用的裂解试剂包括三氟乙酸，茴香硫醚，苯甲醚，三异丙基硅烷，苯酚，1,2
‑
乙二硫醇，水等。更为优选，裂解试剂的比例为三氟乙酸：茴香硫醚：三异丙基硅烷：1,2
‑
乙二硫醇：水＝90：2.5：2.5：2.5：2.5。
[0023]优点和好处
[0024]1、采用了经取代的苄基修饰后的Gly与氨基树脂缩合得到Gly
‑
氨基树脂，与传统的CTC树脂相比，肽链的连接可以在较高的温度下顺利完成。合成反应更快，从而提高了合成收率；反应更完全，减少了粗品中产生的缺失肽杂质。与采用Wang树脂相比，可以在使用水合肼溶液脱除Dde保护基的过程中，避免肽链与Wang树脂结合的酯结构会发生大量肼解，从而大幅提高收率，提高幅度可以达到30％
‑
40％，大幅节约了成本。
[0025]2、结构式1和4的采用，一方面这两种结构本身更容易制备，所用原料成本低，另一方面，结构式1和4连接到固相载体上后，位阻较小，有利于后续肽链的连接。整体上，进一步
Dde
‑
Lys(Fmoc)
‑
OH(120mmol)，16.2g HOBt(120mmol)，溶于DMF中，冰水浴下加入18.6mL DIC(120mmol)活化10
‑
15min。将活化后的反应液加入至反应器中，20
‑
40℃下反应至茚三酮检测为阴性。反应结束后抽干反应液，加入DMF洗涤树脂3次。重复上述脱除Fmoc保护和加入相应保护的氨基酸或保护的多肽偶联的步骤，按照索玛鲁肽侧链序列，依次使用Fmoc
‑
AEEA
‑
OH，Fmoc...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种固相法合成索玛鲁肽的方法，所述方法包含如下步骤：a)将如结构式1～5所示的任意一种化合物与氨基树脂缩合得到Gly
‑
氨基树脂；第37号位Gly采用如下结构的砌块，结构式：b)按照索玛鲁肽主链序列，利用固相合成法连接至Glu
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；c)使用主链带有Dde保护基的Lys连接Lys
26
，；d)按照侧链序列连接侧链至十八烷二酸；e)脱除Lys
26
主链保护基Dde，按照主链序列采用固相连接法连接至His7。f)裂解肽树脂得到粗品，经纯化、冻干后得到索玛鲁肽纯品。2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，第37号位Gly采用如下结构的砌块：Gly结构式1或Gly结构式4。3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述固相合成氨基树脂为MBHA树脂、BHA树脂、AM树脂、Sieber树脂中的任意一种，或其中任意一种与Rink Amide Linker组成的Fmoc
‑
Rinker amide氨基树脂。4.根据权利要求3所述方法，其特征在于，所述固相合...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘宝生，马佳颀，李湘，徐琪，
申请(专利权)人：中肽生化有限公司，
类型：发明
国别省市：