一种检测二甲双胍个体化用药相关SNP位点的试剂盒制造技术

技术编号:16261976 阅读:75 留言:0更新日期:2017-09-22 17:20
本发明专利技术专利公开了一种利用高分辨融解曲线分析方法检测二甲双胍个体化用药相关SNP位点的试剂盒机器检测方法。所述试剂盒对二甲双胍用药的2个SNP位点进行分型,包括SLC2A2基因rs5398 SNP位点和SCL47A1基因rs 228966 SNP。试剂盒包括2×HRM缓冲液,25mM MgCl2,1uM正向引物、1uM反向引物以及1uM探针。可通过分析不同基因型的解链温度完成上述2个SNP位点分型,从而达到对二甲双胍个体化用药提供分子学诊断依据。

Kit for detecting individual SNP locus of metformin

The invention discloses a reagent box machine detection method for detecting individual SNP loci of metformin individualized drugs by means of a high resolution dissolution curve analysis method. The Kit 2 SNP sites of the metformin treatment were classified, including SLC2A2 rs5398 SNP gene locus and SCL47A1 gene RS 228966 SNP. The kit includes 2 x HRM buffer, 25mM MgCl2,1uM, 1uM forward primer reverse primers and 1uM probe. The melting temperature analysis of different genotypes of the 2 SNP loci typing, so as to provide basis for molecular diagnosis of individual medication metformin.

【技术实现步骤摘要】
一种检测二甲双胍个体化用药相关SNP位点的试剂盒
本专利技术专利涉及一种检测SNP位点的检测试剂盒PCR扩增方法,尤其是利用高分辨融解曲线分析技术检测二甲双胍个体化用药相关SNP位点的试剂盒及其核心PCR扩增方法。
技术介绍
糖尿病是世界公认的危险人类健康的疾病之一,中国是糖尿病患病率高,患病人数接近一亿,居世界首位,其给患者健康的危害并对社会经济造成沉重负担。因此,糖尿病是卫计委重点关注的疾病之一,并被卫计委落地分级诊疗的切入口。此外,糖尿病也是美国“精准医学计划”的两个代表性疾病之一。以上数据均说明防治糖尿病的紧迫性和重要性。二甲双胍是国内外指南(ADA、EASD、IDF和CDS等)中均被作为2型糖尿病临床治疗的一线口服药物,具有较强的降糖作用、心血管保护作用、可降低2型糖尿病患者罹患恶性肿瘤的风险、减少糖耐量减低(IGT)者发展成糖尿病的几率,在糖尿病防治中占据重要地位。对于这样一个使用最广泛的糖尿病治疗药物探讨决定其个体疗效差异和导致副作用的基因多态性位点,是实现糖尿病精准医学的第一步,通过基因分型筛查,指导个体化用药治疗,有助于提高我国糖尿病患者应用二甲双胍的治疗水平和血糖控制。
技术实现思路
SLC2A2和SCLl47A1的遗传多态性直接或间接影响二甲双胍在体内的转运和代谢过程。本专利技术提供一种高分辨融解曲线分析检测二甲双胍个体化用药相关SNP位点的试剂盒及其核心PCR扩增方法。本专利技术采用的技术方案:一种检测二甲双胍个体化用药相关SNP位点的试剂盒,所述的试剂盒可同时对SLC2A2基因rs5398SNP位点和SCL47A1基因rs228966SNP位点进行扩增分型检测。检测SNP的扩增条件为:2×HRM缓冲液,25mMMgCl2,1uM正向引物、1uM反向引物以及1uM探针,通过扩增后分析扩增产物融解曲线判断是否携带对应SNP位点的突变型表现,其中纯合突变型熔解曲线、纯合野生型熔解曲线之间解链温度有差别,野生型和突变型的结合则出现双峰,如附图1-6所示。因此,应用该方法能够很好的区分基因型,结果判定准确、简便、快速,易于实现计算机自动化检测和数据报告。所述检测SLC2A2基因rs5398SNP位点的一对引物及探针如下所示:正向引物:5’-TGTGTTTGCTTTCTATCCAGGAC-3’反向引物:5’-GGGCTGAGCCACTCTTCTTT-3’探针:5’-GGCCTTTACCCTGTTCACATTTTTTAAAGTT/3AmM/-3’所述SCL47A1基因rs228966SNP位点的一对引物及探针如下所示:正向引物:5’-TGCTAAGCATCGTAACCTGGG-3’反向引物:5’-CTGGTGGGAAAACTTGGTCCT-3’探针:5’-TCCACAGTAGCGTGGAAGTTCCCGGCTAGAC/3AmM/-3’本专利技术采用高分辨融解曲线分析技术进行分析,PCR反应条件:95℃15分钟,然后95℃15秒,60℃20秒和72℃30秒,65个循环,每单位时间之温度上升为以4.8℃/s至95℃,以2.5℃/s至60℃,以4.8℃/s至72℃,然后72℃1分钟。HRM分析条件:以4.8℃/s至95℃变性PCR产物,然后以2.5℃/s降低至55℃度杂交。在以4.8℃/s丛55℃升高至95℃期间,每摄氏度获取25次荧光信号。附图说明附图1:SLC2A2基因rs5398SNPC/C型HRM结果。附图2:SLC2A2基因rs5398SNPT/T型HRM结果。附图3:SLC2A2基因rs5398SNPC/T型HRM结果。附图4:SCL47A1基因rs228966G/G型HRM结果。附图5:SCL47A1基因rs228966A/A型HRM结果。附图6:SCL47A1基因rs228966G/A型HRM结果。附图7:SLC2A2基因rs5398SNP临床样本检测结果。附图8:SCL47A1基因rs228966SNP临床样本检测结果。具体实施方式实施例一。步骤1:配置PCR反应体系:包含2×HRMmastermix,25mMMgCl2,1uM正向引物和1uM反向引物,以及1uM探针。步骤2:PCR扩增:95℃15分钟,然后95℃15秒,60℃20秒和72℃30秒,65个循环,每单位时间之温度上升为以4.8℃/s至95℃,以2.5℃/s至60℃,以4.8℃/s至72℃,然后72℃1分钟。步骤3:HRM分析:以4.8℃/s至95℃变性PCR产物,然后以2.5℃/s降低至55℃度杂交。在以4.8℃/s丛55℃升高至95℃期间,每摄氏度获取25次荧光信号。步骤4:基因测序进行检测结果确认采用上述方法对97份临床样本进行分析,采用建立的HRM方法检测SLC2A2基因rs5398SNP位点和SCL47A1基因rs228966SNP位点的基因变异,基因型与基因测序结果100%符合,见附图7-8。本文档来自技高网...
一种检测二甲双胍个体化用药相关SNP位点的试剂盒

【技术保护点】
一种检测二甲双胍个体化用药相关SNP位点的试剂盒,其特征在与,所述试剂盒包括检测SLC2A2基因rs5398 SNP位点的引物、探针,检测 SCL47A1基因rs 228966 SNP位点的引物、探针。

【技术特征摘要】
1.一种检测二甲双胍个体化用药相关SNP位点的试剂盒,其特征在与,所述试剂盒包括检测SLC2A2基因rs5398SNP位点的引物、探针,检测SCL47A1基因rs228966SNP位点的引物、探针。2.根据权利要求1所述的检测二甲双胍个体化用药相关SNP位点的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括检测基因SLC2A2基因rs5398SNP位点的一个正向引物、反向引物和探针,检测基因SCL47A1基因rs228966SNP位点的一个正向引物、反向引物和探针。3.根据权利要求2所述的检测二甲双胍个体化用药相关SNP位点的试剂盒,其特征在于,所述检测基因SLC2A2基因rs5398SNP位点的引物探针序列如下所示:正向引物:5’-TGTGTTTGCTTTCTATCCAGGAC-3’反向引物:5’-GGGCTGAGCCACTCTTCTTT-3’探针:5’-GGCCTTTACCCTGTTCACATTTTTTAAAGTT/3AmM/-3’。4.根据权利要求2所述的检测二...

【专利技术属性】
技术研发人员:徐琪李湘
申请(专利权)人:中肽生化有限公司
类型:发明
国别省市:浙江,33

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