一种西曲瑞克的制备方法技术

本发明专利技术涉及一种西曲瑞克的制备方法，具体采用了一种固液相结合的合成方法。按照西曲瑞克序列从C端到N端的顺序，在偶联试剂的作用下利用固相合成法逐个连接1‑9片段，再将1‑9片段全保护切割后与与DAla‑NH

A preparation method of cetrix

【技术实现步骤摘要】
一种西曲瑞克的制备方法
本专利技术属于多肽药物制备方法
，特别涉及一种西曲瑞克的制备方法，具体采用了一种固液相结合的合成方法。
技术介绍
西曲瑞克(商品名Cetrotide)是一种有效的黄体酮释放激素抑制素(LH-RH)受体拮抗剂，它能控制卵巢的刺激作用，预防不成熟卵泡过早排出，帮助受孕。并可用于治疗乳腺癌和妇科癌，子宫内膜异位症，性早熟，子宫肌瘤，卵巢雄激素过多和经前综合症。中文名称：西曲瑞克英文名称：Cetrorelixacetate序列:Ac-D2Nal1-D4Cpa2-D3Pal3-Ser4-Tyr5-DCit6-Leu7-Arg8-Pro9-DAla10-NH2分子式：C70H92ClN17O14分子量:：1431.06目前已知的合成西曲瑞克的方法当中，以固相合成法居多，从C端开始按照序列在树脂上依次进行氨基酸的连接：专利CN101284863B公开了西曲瑞克的一种固相合成方法：以Fmoc-Linker-MBHA-Resin作起始原料，按照序列依次连接具有Fmoc保护基团的氨基酸，获得保护的十肽树脂，进行乙酰化反应，然后进行切割获得醋酸西曲瑞克，并经C18或C8色谱柱进行分离纯化，再冷冻干燥，获得西曲瑞克醋酸盐或三氟醋酸盐。所述氨基酸偶联反应温度为35-50摄氏度。这个方法会产生比较多的消旋杂质，影响产品质量。专利CN101863960B公开了一种西曲瑞克的制备方法。该方法以Boc氨基酸及王树脂为原料，逐个加入C端氨基酸，再以10wt％的氨水进行氨解，然后以H2和Pd为脱保护试剂，制得西曲瑞克。该方法采用H2与Pd进行脱保护反应24h，反应时间长，粗肽收率仅为60～70％，而H2使用较为危险，Pd金属除尽难度大，对设备要求高，不适合大规模生产。专利CN104277093A公开了一种以RinkAmide-AMResin为载体，以的DIC/HOBt为缩合剂，采用微波反应技术，得到的西曲瑞克粗品经反相高效液相色谱纯化以及我们特有的醋酸转盐技术，制得的醋酸西曲瑞克纯品收率达到30％以上。该方法采用的微波合成法，对设备要求很高，不适用于大规模工业化合成。专利CN104086632A公开了一种使用以AM树脂为起始树脂，按照西曲瑞克主链肽序依次偶联具有N端Fmoc保护且侧链保护的氨基酸，其中肽序6位氨基酸采用Fmoc-D-Orn(Dde)-OH代替侧基无保护的Fmoc-Cit-OH，虽然此合成方法可以控制毒性[D-Cit(Ac)]因由瑞克杂质含量在0.1％以下，但是合成过程中采用毒性水合肼试剂脱除Dde保护，工艺复杂且安全性低。专利CN104610433A和专利CN104892732A均公开了一种西曲瑞克的制备方法，以Fmoc-Linker氨基树脂为起始原料，从C端到N端依次连接九个具有Fmoc保护基的氨基酸，脱去Fmoc保护基后再连接Ac-D-2-Nal-OH得到N端乙酰化的肽树脂，即Ac全保护十肽树脂。用裂解试剂切割肽树脂，冰乙醚沉淀切割液获得西曲瑞克粗肽，再以HPLC制备色谱柱分离纯化，冷冻干燥后得西曲瑞克三氟醋酸盐或西曲瑞克醋酸盐。该方法需要额外制备的Ac-D-2-Nal-OH原料，导致生产成本较高。专利CN107778355A公开了一种合成西曲瑞克的方法。采用全新的氨基树脂作为载体，以及采用保护的D-Orn为D-Cit的前体，而后脱除侧链保护基与叔了基异氨酸醋反应生成D-Cit(tBu),通过特有的含有溴化氢的三氟醋酸溶液来酸解西曲瑞克肽树脂。该方法D-Orn转化为D-Cit(tBu),增加了一步反应，难以保证转化完全并且使用了有毒的溴化氢，不利于大规模工业化生产。专利CN107337717A采用片段法5+5合成西曲瑞克，两个片段可以同时合成，缩短了合成周期。但这种方法后固相合成片段B的固相合成采用价格昂贵的Sieber树脂，成本较大。并且片段B多出了全保护切割步骤，导致总体工艺步骤多且步骤复杂，在大规模生产中具有较大的风险。上述专利的方法存在方法复杂、不适宜工业生产、生产效率低等问题。因此，目前迫切需要开发一种简单、高效、适宜规模生产的方法。
技术实现思路
为解决上述指出的技术问题，本专利技术提供一种固液相结合法合成西曲瑞克的方法，方案如下:西曲瑞克的制备方法，包括如下步骤:a)按照西曲瑞克序列从C端到N端的顺序，在偶联试剂的作用下利用固相合成法逐个连接1-9片段得到Ac-D2Nal-D4Cpa-D3Pal-Ser(tBu)-Tyr(tbu)-DCit-Leu-Arg(Pbf)-Pro-CTCResin肽树脂；b)将步骤a)得到的肽树脂全保护切割得到全保护的西曲瑞克-A；Ac-D2Nal-D4Cpa-D3Pal-Ser(tBu)-Tyr(tbu)-DCit-Leu-Arg(Pbf)-Pro-OH；c)将步骤b)得到的西曲瑞克-A与DAla-NH2.HCl在液相中进行片段缩合，得到全保护的西曲瑞克；d)将步骤c)得到的全保护的西曲瑞克以裂解液切割，再以冰乙醚沉淀切割液得到西曲瑞克粗肽；e)将步骤d)得到的西曲瑞克粗肽经过反相高效液相色谱纯化得到西曲瑞克成品，完成西曲瑞克的合成。作为优选，步骤(a)中，所述的树脂为CTC树脂，且其取代度为0.3-0.8mmol/g。作为优选，步骤(a)中，所述固相合成法逐个连接采用CTC树脂为固相载体，所述CTC树脂与Fmoc-Pro-OH发生偶联反应得到Fmoc-Pro-CTC树脂,然后脱Fmoc保护后，以1.5-4倍摩尔量的投料比依次偶联相应的Fmoc保护氨基酸，每一个氨基酸联均在缩合试剂存在条件下进行，每一步偶联过程中均用Kaisertest试剂检测反应终点，每一步连接反应结束后，进行洗涤，然后采用脱保护试剂脱Fmoc保护后，再与下一个Fmoc保护氨基酸进行偶联反应:依次分别偶联Fmoc-Arg(pbf)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-DCit-OH,Fmoc-Thr(tBu)-OH,Fmoc-Ser(tBu)-OH，Fmoc-D-3Pal-OHFmoc-D-Phe(4Cl)-OH、Fmoc-D-2Nal-OH，从而得到Ac-D2Nal-D4Cpa-D3Pal-Ser(tBu)-Tyr(tbu)-DCit-Leu-Arg(Pbf)-Pro-CTCResin。作为优选，步骤(a)中所述的配置缩合试剂选自缩合试剂+碱的组合，其中缩合试剂选自HBTU、HATU、PyAOP、PyBOP、EDC.HCl+HOBT、DIC+HOBT等试剂中的一种，碱选自NMM,DIPEA，Et3N中的一种；当与HOBT混合时，比例为1：1；缩合试剂与碱的比例为1：1。作为优选，步骤(a)中所述固相合成反应的氨基酸投料量为树脂摩尔数的1.5-4倍，反应温度范围为5-40℃。作为优选，步骤(b)中所述切割，切割液选自HFIP/DCM体系，二者体积比为3：7，浓度为8-10ml/g，温度为10-35℃。作为本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种西曲瑞克的制备方法，其特征在于，包括如下步骤:/na)按照西曲瑞克序列从C端到N端的顺序，在偶联试剂的作用下利用固相合成法逐个连接1-9片段得到Ac-D2Nal-D4Cpa-D3Pal-Ser(tBu)-Tyr(tbu)-DCit-Leu-Arg(Pbf)-Pro-CTCResin肽树脂；/nb)将步骤a)得到的肽树脂全保护切割得到全保护的西曲瑞克-A；Ac-D2Nal-D4Cpa-D3Pal-Ser(tBu)-Tyr(tbu)-DCit-Leu-Arg(Pbf)-Pro-OH；/nc)将步骤b)得到的西曲瑞克-A与DAla-NH

【技术特征摘要】
1.一种西曲瑞克的制备方法，其特征在于，包括如下步骤:
a)按照西曲瑞克序列从C端到N端的顺序，在偶联试剂的作用下利用固相合成法逐个连接1-9片段得到Ac-D2Nal-D4Cpa-D3Pal-Ser(tBu)-Tyr(tbu)-DCit-Leu-Arg(Pbf)-Pro-CTCResin肽树脂；
b)将步骤a)得到的肽树脂全保护切割得到全保护的西曲瑞克-A；Ac-D2Nal-D4Cpa-D3Pal-Ser(tBu)-Tyr(tbu)-DCit-Leu-Arg(Pbf)-Pro-OH；
c)将步骤b)得到的西曲瑞克-A与DAla-NH2.HCl在液相中进行片段缩合，得到全保护的西曲瑞克；
d)将步骤c)得到的全保护的西曲瑞克以裂解液切割，再以冰乙醚沉淀切割液得到西曲瑞克粗肽；
e)将步骤d)得到的西曲瑞克粗肽经过反相高效液相色谱纯化得到西曲瑞克成品，完成西曲瑞克的合成。


2.根据权利要求1所述的西曲瑞克的制备方法，其特征在于，步骤(a)中，所述的树脂为CTC树脂，且其取代度为0.3-0.8mmol/g。


3.根据权利要求1所述的西曲瑞克的制备方法，其特征在于，步骤(a)中，所述固相合成法逐个连接采用CTC树脂为固相载体，所述CTC树脂与Fmoc-Pro-OH发生偶联反应得到Fmoc-Pro-CTC树脂,然后脱Fmoc保护后，以1.5-4倍摩尔量的投料比依次偶联相应的Fmoc保护氨基酸，每一个氨基酸联均在缩合试剂存在条件下进行，每一步偶联过程中均用Kaisertest试剂检测反应终点，每一步连接反应结束后，进行洗涤，然后采用脱保护试剂脱Fmoc保护后，再与下一个Fmoc保护氨基酸进行偶联反应:依次分别偶联Fmoc-Arg(pbf)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-DCit-OH,Fmoc-Thr(tBu)-OH,Fmoc-Ser(tBu)-OH，Fmoc-D-3Pal-OHFmoc-D-Phe(4Cl)-OH、Fmoc-D-2Nal-OH，从而得到Ac-D2Nal-D4Cpa-D3Pal-Ser(tBu)-Tyr(tbu)-DCit-Leu-Arg(...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘宝生，张巍，李湘，徐琪，
申请(专利权)人：中肽生化有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33