用于癌症个体化诊断治疗的重要基因富集方法技术

技术编号:10565670 阅读:241 留言:0更新日期:2014-10-22 17:02
本发明专利技术公开了一种用于癌症个体化诊断治疗的重要基因富集方法,建立中国患者常见癌症基因的组合,并根据中国患者基因突变的特性设计富集方案,达到高效靶向富集重要癌基因的目的,将2万多个基因的测序通量降低到不到200个基因,大大降低测序成本。同时,本方法加入了“基因转位”等特殊突变的富集方案,可以检测到外显子检测难以发现但对诊断治疗有重要意义的突变。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种用于癌症个体化诊断治疗的重要基因富集方法,其特征在于,所述方法包括如下步骤:制备相应的DNA探针微阵列,将包含靶向区域的DNA探针连接进入转录表达载体,并在体外表达RNA探针;使用biotin标记的单个碱基合成RNA,使合成的RNA探针得到充分的biotin标记;将待测DNA通过非接触式超声破碎方案破碎成300‑500bp的小片段,使用分子生物学方案将小片段末端补平,加上一个“A”碱基,并与带有“T”碱基测序配体连接;使用配体相应的扩增引物对连接产物进行扩增,获得基因组测序文库;将测序文库在95摄氏度加热5分钟形成单链DNA,然后在65摄氏度加入上述RNA探针与DNA文库进行24小时的杂交;然后使用能够特异性结合RNA探针上biotin标记的磁珠,在磁场作用下对DNA/RNA探针复合物进行富集和清洗,使用氢氧化钠洗脱DNA文库并进行扩增,收集靶向测序文库;使用二代测序平台对靶向测序文库进行靶向测序,经过分析得到靶向区域的DNA序列。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:阎海焦宇辰王晓月王思振熊梓锴
申请(专利权)人:北京泛生子生物科技有限公司
类型:发明
国别省市:北京;11

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