一种利拉鲁肽的合成方法技术

本发明专利技术提供了一种利拉鲁肽的合成方法，通过固相合成三个片段，液相合成两个二肽片段，再将各片段和其他原料在溶液体系中依次偶联，得到N-Tfa保护的利拉鲁肽中间体，经过纯化得到中间体纯品；棕榈酸完成修饰后，在碱性条件下脱除Tfa保护基，经过纯化换盐得到所需的利拉鲁肽。本发明专利技术的方法解决了现有的合成方法存在的合成周期长,成本高,收率低,杂质难除的问题。题。

【技术实现步骤摘要】
一种利拉鲁肽的合成方法


[0001]本专利技术涉及医药多肽类原料药的化学合成，具体涉及一种利拉鲁肽的合成方法。

技术介绍

[0002]利拉鲁肽与天然GLP-1分子结构相比有一个氨基酸差异,并增加了一个16碳棕榈酰脂肪酸侧链,与天然人GLP-1有97％同源性，与天然GLP-1不同的是,利拉鲁肽在人体中的药代动力学和药效动力学特点均适合每天一次的给药方案。皮下注射给药后,其作用时间延长的机理包括：使吸收减慢的自联作用,与白蛋白结合,对二肽基肽酶IV(DPP-IV)和中性内肽酶(NEP)具有更高的酶稳定性，从而具有较长的血浆半衰期。
[0003]利拉鲁肽化学分子式为C
172
H
265
N
43
O
51
,相对分子质量为3751.20,CAS号为204656-20-2，其序列如下：
[0004]NH
2-(L-histidyl-L-alanyl-L-α-glutamylglycyl-L-threonyl-L-phenylalanyl-L-threonyl-L-seryl-L-α-aspartyl-L-valyl-L-seryl-L-seryl-L-tyrosyl-L-leucyl-L-α-glutamylglycyl-L-glutaminyl-L-alanyl-L-alanyl)-N(6)-(N-hexadecanoyl-L-γ-glutamyl)-L-lysyl-L-α-glutamyl-L-phenylalanyl-L-isoleucyl-L-alanyl-L-tryptophyl-L-leucyl-L-valyl-L-arginylglycyl-L-arginylglycine。其化学结构式如下所示：
[0005][0006]针对目前合成利拉鲁肽的方法其合成步骤较多，合成周期长，同时，纯度和收率均不高，不适于工业化规模生产的缺点，急需提出一种收率高，且适用于工业化规模生产的合成方法。

技术实现思路

[0007]为了解决现有技术的不足，本专利技术提供了一种利拉鲁肽的合成方法。
[0008]本专利技术的目的通过以下技术方案来实现：
[0009]一种利拉鲁肽的合成方法，通过固相合成三个片段，液相合成两个二肽片段，再将各片段和其他原料在溶液体系中依次偶联，得到N-Tfa保护的利拉鲁肽中间体，经过纯化得
到中间体纯品；棕榈酸完成修饰后，在碱性条件下脱除Tfa保护基，经过纯化换盐得到所需的利拉鲁肽。
[0010]其合成过程如下所示：
[0011][0012]优选地，所述固相合成的三个片段分别为：多肽片段A：NH
2-(27-37AA)-Wang Resin，(27-37AA)包含序列EFIAWLVRGRG；全保护肽片段B：Fmoc-NH(16-22AA)-OH，其中，16-22AA包含序列VSSYLEG；全保护肽片段C：N-Tfa-(7-10AA)-OH，其中，7-10AA包含序列HAEG。
[0013]优选地，所述液相合成的两个二肽片段分别为：二肽片段a：Fmoc-Lys(N-ε-(γ-Glu(N-α-Boc)-OtBu)-OH；二肽片段b：Fmoc-NH-(24-25AA)-OH,其中，24-25AA包含序列AA，为Fmoc-Ala-Ala-OH。
[0014]优选地，所述合成方法中N-Tfa保护的利拉鲁肽中间体的合成包括如下步骤，
[0015]先将多肽片段A置于反应柱中，按照SPPS方法和序列，依次偶联二肽片段a、二肽片段b、Fmoc-Gln(Trt)-OH、多肽片段B、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Ser(tBU)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH和多肽片段C，并通过裂解，得到N-Tfa-(7-37AA)粗品，即具有N-Tfa保护的利拉鲁肽中间体。
[0016]优选地，所述具有N-Tfa保护的利拉鲁肽中间体的纯化为通过将所述具有N-Tfa保护的利拉鲁肽中间体溶于10％乙腈和水的混合溶液中，震荡溶解后，过滤备用；经HPLC纯化。
[0017]优选地，所述HPLC条件采用：流动相为0.1％TFA/水-0.1％TFA/乙腈体系，上样量为5.0g/次，流速300ml/min，梯度洗脱。
[0018]优选地，经纯化后的取中间体X加入三口反应瓶中，加入10％乙腈/水溶液搅拌溶解，冰水浴下，缓慢滴加10％Na
2 CO3和水溶液混合液，调节溶液pH至8，停止滴加；
[0019]在冰水浴下滴加Pal-OSu的THF溶液，在室温下反应，加入甘氨酸，通过HPLC监测反应终点；向反应液中激烈搅拌下加入哌啶，室温下继续搅拌，HPLC监测碱解终点，反应结束
后，停止搅拌，滤除不溶物，并用纯净水洗涤不溶物；完成Tfa保护基的脱除。
[0020]优选地，所述合成方法还包括对利拉鲁肽的纯化步骤，其包括合并洗液和滤液，采用0.5％醋酸水溶液稀释肽溶液，至pH值降至5时，溶液经滤膜过滤，通过HPLC进行纯化，所述HPLC条件为；流动相为20mM醋酸铵水溶液-乙腈体系，上样量为3.0g/次，流速300ml/min，梯度洗脱；峰前和峰后循环进样，截取中控分析纯度为99.5％以上，单杂小于0.1％的精肽溶液，脱盐后浓缩冻干得纯度＞99.0％利拉鲁肽。
[0021]本专利技术的有益效果体现在：解决了现有的合成方法存在的合成周期长,成本高，收率低，杂质难除的问题。
具体实施方式
[0022]以下结合实施例具体阐述本专利技术的技术方案，本专利技术揭示了一种利拉鲁肽的合成方法。该合成过程如下所示：
[0023][0024]称取替代度为1.0mmol/g的王树脂10g，加入到固相反应柱中，用DMF洗涤2次，用DCM溶胀树脂30分钟后，称取5.94g Fmoc-Gly-OH、2.97gHOBt和0.21g DMAP用DMF溶解，冰水浴下加入3.42mL DIC后，加入上述装有树脂的反应柱中，反应3小时后，加入10mL吡啶和12ml乙酸酐封闭6小时。用DMF洗涤5次，得到Fmoc-Gly-Wang树脂11.3g，检测替代度为0.32mmol/g。按照SPPS方法和序列，依次偶联至27位氨基酸，并脱除Fmoc保护基，干燥得到NH
2-(27-37AA)-Wang树脂(13.5g，3.6mmol)，命名为多肽片段A。其中，27-37AA包含序列EFIAWLVRGRG。
[0025]将Fmoc-Lys(Boc)-OH(50.0mmol)溶解在TFA/CH2Cl2(1∶1；400ml),并在室温下搅拌2小时。在TFA蒸发和乙醚萃取后，获得白色粉末形式的Fmoc-Lys-OH 17.9g，纯度为＞99％。R f
＝0.5(CHCl2/MeOH/AcOH，6:3:1)或HPLC监测。
[0026]将Boc-Glu-OtBu(27g，90mmol)、N-羟基琥珀酰本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种利拉鲁肽的合成方法，其特征在于：通过固相合成三个片段，液相合成两个二肽片段，再将各片段和其他原料在溶液体系中依次偶联，得到N-Tfa保护的利拉鲁肽中间体，经过纯化得到中间体纯品；棕榈酸完成修饰后，在碱性条件下脱除Tfa保护基，经过纯化换盐得到所需的利拉鲁肽。2.如权利要求1所述的一种利拉鲁肽的合成方法，其特征在于：所述固相合成的三个片段分别为：多肽片段A：NH
2-(27-37AA)-Wang树脂，(27-37AA)包含序列EFIAWLVRGRG；全保护肽片段B：Fmoc-NH(16-22AA)-OH，其中，16-22AA包含序列VSSYLEG；全保护肽片段C：N-Tfa-(7-10AA)-OH，其中，7-10AA包含序列HAEG。3.如权利要求2所述的一种利拉鲁肽的合成方法，其特征在于：所述液相合成的两个二肽片段分别为：二肽片段a：Fmoc-Lys(N-ε-(γ-Glu(N-α-Boc)-OtBu)-OH；二肽片段b：Fmoc-NH-(24-25AA)-OH,其中，24-25AA包含序列AA，为Fmoc-Ala-Ala-OH。4.如权利要求3所述的一种利拉鲁肽的合成方法，其特征在于：所述合成方法中N-Tfa保护的利拉鲁肽中间体的合成包括如下步骤，先将多肽片段A置于反应柱中，按照SPPS方法和序列，依次偶联二肽片段a、二肽片段b、Fmoc-Gln(Trt)-OH、多肽片段B、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Ser(tBU)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH和多肽片段C，并通过裂解，得到N...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄保华，戴建，胡新礼，
申请(专利权)人：苏州宜百奥生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：