抗HIgG-Fc单克隆抗体及其制备方法与应用技术

本发明专利技术提供了一种抗HIgG

【技术实现步骤摘要】
抗HIgG
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Fc单克隆抗体及其制备方法与应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种抗HIgG
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Fc单克隆抗体及其制备方法与应用。

技术介绍

[0002]免疫球蛋白是指具有抗体（Ab）活性或化学结构，与抗体分子相似的球蛋白。其主要为IgG，在许多病理情况下，人体免疫系统会产生变化，通过检测血液IgG的变化可以指导疾病的诊断。随着生物医药的快速发展，抗体药占居很大的一部分，从早期的鼠源抗体到人鼠嵌合抗体，再到目前主要以人源化抗体和全人抗体为主的时代，需要不同方法来分析和解释药物的一些性质。如何制备一种Anti
‑ꢀ
Human IgG Fc protein单克隆抗体，以更好的为生物药物的开发及临床检测分析提供些实用工具成为了目前待解决的问题。

技术实现思路

[0003]为了解决现有技术的不足，本专利技术提供了一种抗HIgG
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Fc单克隆抗体及其制备与应用。
[0004]本专利技术的目的通过以下技术方案来实现：抗HIgG
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Fc单克隆抗体，包含有重链可变区的抗原互补决定区aaCDR1、aaCDR2和aaCDR3，其氨基酸序列分别为SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3；轻链可变区的抗原互补决定区aaCDR1、aaCDR2和aaCDR3，其氨基酸序列分别为SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6。
[0005]优选地，所述抗体具有SEQ ID NO：7所示的重链区可变区氨基酸序列和SEQ ID NO:8所示的轻链区可变区氨基酸序列。
[0006]一种核酸分子，所述核酸分子包括编码以上任一所述的抗HIgG
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Fc单克隆抗体。
[0007]一种细胞系，能够产生如以上任一所述的抗HIgG
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Fc单克隆抗体。
[0008]抗HIgG
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Fc单克隆抗体的制备方法，所述方法包括，培养如以上所述的细胞系，并产生所述的抗HIgG
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Fc单克隆抗体。
[0009]抗HIgG
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Fc单克隆抗体的应用，所述抗HIgG
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Fc单克隆抗体在生物药品的开发中的应用。
[0010]本专利技术的有益效果体现在：提供了一种抗HIgG
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Fc单克隆抗体，并提供了相应的制备方法，本专利技术的所述抗HIgG
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Fc单克隆抗体可以应用于在制备生物药物中的研究，为药物的分析和药物性质的解析提供了基础。
附图说明
[0011]图1：本专利技术实施例5中抗体在450 nm波长下的OD值。
具体实施方式
[0012]本专利技术揭示了一种抗HIgG
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Fc单克隆抗体，包含有重链可变区的抗原互补决定区aaCDR1、aaCDR2和aaCDR3，其氨基酸序列分别为SEQ ID NO:1 GFTFSNYA、SEQ ID NO:2 ISTDSGTT、SEQ ID NO:3 ARQGYPHWYFDV；轻链可变区的抗原互补决定区aaCDR1、aaCDR2和aaCDR3，其氨基酸序列分别为SEQ ID NO:4 QDIYNY、SEQ ID NO:5 YTS、SEQ ID NO:6LQYDYLLFT。
[0013]所述抗体具有SEQ ID NO：7所示的重链区可变区氨基酸序列和SEQ ID NO:8所示的轻链区可变区氨基酸序列。
[0014]其中，SEQ ID NO：7：EMKLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFSNYAMSWVRQTPEKRLEWVAYISTDSGTTYYPDTVKGRFTISRDNAKNTLYLHMSSLKSEDTAMYFCARQGYPHWYFDVWGAGTTVTVSSSEQ ID NO:8：DIQMTQSPSSLSASLGGKVTITCKASQDIYNYIAWYQDKPGKGPRLLIHYTSTLQPGIPSRFSGSGSGRDYSFSISNLEPDDVATYYCLQYDYLLFTFGSGTKLEIK本专利技术还揭示了一种核酸分子及细胞系，以及以上所述抗HIgG
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Fc单克隆抗体的制备方法。
[0015]所述核酸分子由编码以上任一所述的抗HIgG
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Fc单克隆抗体获得。所述细胞系能够产生如以上任一所述的抗HIgG
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Fc单克隆抗体。所述方法包括培养上述的细胞系，并产生所述的抗HIgG
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Fc单克隆抗体。本专利技术的所述抗HIgG
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Fc单克隆抗体可以应用于在制备生物药物中的研究。
[0016]为更好的理解本专利技术，以下进行具体的实施举例说明。
[0017]实施例1：抗原准备准备Human IgG Fc protein（Fitzgerald公司），用分子筛将保存液转换到磷酸盐缓冲体系，加入弗氏完全佐剂（sigma）备用。
[0018]实施例2：动物免疫将实施例1中准备的抗原（Human IgG Fc protein）用银汞调合器进行混匀乳化，免疫4~6周龄雌性Balb/c小鼠（购自北京维通利华实验动物技术有限公司），皮下多点注射，剂量为85
µ
g/只。每14天加强免疫一次，抗原使用弗氏非完全佐剂乳化，剂量为50
µ
g/只。第3次加强免疫后7天，以间接ELISA（波长450nm）检测小鼠血清中抗免疫原的多抗效价，效价最高的小鼠以尾静脉注射冲击免疫，抗原用生理盐水混匀，剂量为50
µ
g/只。
[0019]实施例3：杂交瘤细胞制备1、融合：将实施例2中免疫达标的小鼠采血，取脾脏制备细胞悬液，与小鼠骨髓瘤细胞Fo以10：1比例混合，离心1200rpm，5分钟。弃上清后，离心管放入37℃水浴中，在1分钟内缓慢加入1 mL的PEG1500（Roche公司），并搅动细胞。在温水中静置l分钟后，加入10 mL无血清的IMDM（Hyclone公司），混匀，离心1000rpm，5分钟。弃上清后，加入含有10 %胎牛血清（Excell公司）的培养基，将细胞吹打起来，并加入配好的HAT完全培养基（Sigma公司）混匀，铺96孔板。将铺好细胞的培养板，放入37℃、5% CO2培养箱中培养。
[0020]2、筛选及亚克隆：利用ELISA的方法进行初步的筛选，将筛选得到的阳性抗体进行稀释直至得到单个亚克隆细胞。通过ELISA筛选，得到多个阳性克隆，挑选其中一个阳性克
隆进行扩大培养，检测定株。以下以编号02CT6.2.1为挑选的个体举例说明。
[0021]实施例4：腹水诱生法制备单克隆抗体1、腹水制备对数生长期细胞用无血清培养基洗涤并悬起，计数3
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8x105/mL，1mL悬浮的细胞腹腔注射事先用石蜡油致敏的小鼠。7天后开始收集腹水。取出的腹水于4℃下离心4000rpm，10分钟。小心吸本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.抗HIgG
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Fc单克隆抗体，其特征在于：包含有重链可变区的抗原互补决定区aaCDR1、aaCDR2和aaCDR3，其氨基酸序列分别为SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3；轻链可变区的抗原互补决定区aaCDR1、aaCDR2和aaCDR3，其氨基酸序列分别为SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6。2.如权利要求1所述的抗HIgG
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Fc单克隆抗体，其特征在于：所述抗体具有SEQ ID NO：7所示的重链区可变区氨基酸序列和SEQ ID NO:8所示的轻链区可变区氨基酸序列。3.一种核酸分子，其特征在于：所述核酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄保华，王中波，
申请(专利权)人：苏州宜百奥生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：