抗MMAE单克隆抗体及其制备方法与应用技术

本发明专利技术提供了一种抗MMAE单克隆抗体及其制备方法与应用，所述抗体包含有重链可变区的抗原互补决定区aaCDR1、aaCDR2和aaCDR3，轻链可变区的抗原互补决定区aaCDR1、aaCDR2和aaCDR3。本发明专利技术的所述抗MMAE单克隆抗体可以应用于相关的配体偶联药物中的研究，且能检测出纳克级或更低浓度MMAE。纳克级或更低浓度MMAE。纳克级或更低浓度MMAE。

【技术实现步骤摘要】
抗MMAE单克隆抗体及其制备方法与应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种抗MMAE单克隆抗体及其制备方法与应用。

技术介绍

[0002]Monomethyl auristatin E (MMAE；SGD
‑
1010) 是海兔毒素 10 的合成衍生物，通过抑制微管蛋白聚合而起到有效的有丝分裂抑制作用。 MMAE 广泛用作细胞毒性成分制作抗体偶联药物 (ADCs) 用于癌症的研究。在肿瘤的治疗中，具有抗癌活性的小分子化合物，由于其对正常组织的毒性而限制了其使用，而将其与靶向配体（单克隆抗体、多肽、融合蛋白等）结合，将活性小分子带到靶区域，可以有效地控制小分子化合物对于正常细胞产生毒性的问题。因此，配体药物偶联物，如ADC(Antibody Drug Conjugate，ADC)，PDC(peptide drug conjugate)等XDC应运而生。
[0003]同时，在现有的配体偶联物中，出现不少MMAE相关偶联药物的报道，但现有小分子MMAE的检测主要通过液质连用的方法，而在组织样本中对MMAE的分析难度较大，且对于微量的MMAE提取分析对人员和仪器要求较高。

技术实现思路

[0004]为了解决现有技术的不足，本专利技术提供了一种抗MMAE单克隆抗体及其制备与应用。
[0005]本专利技术的目的通过以下技术方案来实现：抗MMAE单克隆抗体，包含有重链可变区的抗原互补决定区aaCDR1、aaCDR2和aaCDR3，其氨基酸序列分别为SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3；轻链可变区的抗原互补决定区aaCDR1、aaCDR2和aaCDR3，其氨基酸序列分别为SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6。
[0006]优选地，所述抗体具有SEQ ID NO:7所示的重链区可变区氨基酸序列和SEQ ID NO:8所示的轻链区可变区氨基酸序列。
[0007]一种核酸分子，所述核酸分子包括编码以上任一所述的抗MMAE单克隆抗体。
[0008]一种细胞系，能够产生如以上任一所述的抗MMAE单克隆抗体。
[0009]抗MMAE单克隆抗体的制备方法，所述方法包括，培养以上所述的细胞系，并产生所述的抗MMAE单克隆抗体。
[0010]抗MMAE单克隆抗体的应用，所述抗MMAE单克隆抗体在相关抗肿瘤配体偶联药物中的应用，所述配体可以是抗体，多肽，融合蛋白等。
[0011]抗MMAE单克隆抗体的应用，所述抗体应用于一步竞争法检测MMAE的含量。
[0012]抗MMAE单克隆抗体的应用，所述抗体用于检测MMAE相关ADC药物PK研究中检测结合型抗体的含量。
[0013]本专利技术的有益效果体现在：提供了一种抗MMAE单克隆抗体，并提供了相应的制备
方法，本专利技术的所述抗MMAE单克隆抗体可以应用于在制备治疗和预防癌症的抗体偶联药物中的研究，且能更快度方便的检测出纳克级或更低浓度MMAE。
附图说明
[0014]图1：本专利技术实施例5中抗体与MMAE结合在450 nm波长下的OD值。
[0015]图2：通过本专利技术实施例7中所述的方法检测MMAE含量的示意图。
具体实施方式
[0016]本专利技术揭示了一种抗MMAE单克隆抗体，包含有重链可变区的抗原互补决定区aaCDR1、aaCDR2和aaCDR3，其氨基酸序列分别为SEQ ID NO:1 DYTFNDYE；SEQ ID NO:2 VHPGSGDT；SEQ ID NO:3 TRGWD。轻链可变区的抗原互补决定区aaCDR1、aaCDR2和aaCDR3，其氨基酸序列分别为SEQ ID NO:4 QDIGNS；SEQ ID NO:5 ATS；SEQ ID NO:6 LQYASSPYT。
[0017]所述抗体具有SEQ ID NO:7所示的重链区可变区氨基酸序列和SEQ ID NO:8所示的轻链区可变区氨基酸序列。
[0018]其中，重链可变区,SEQ ID NO:7QVQLQQSGAELVRPGASVKLSHRALDYTFNDYEMHWVKQTPVHGLEWIGGVHPGSGDTSYNQKFKGKATLTADKSSNTAYLELSNLTSEDSAVYYCTRGWDWGQGTTLTVSS轻链可变区，SEQ ID NO:8 DIQMTQSPSSLSASLGERVSLTCRASQDIGNSLNWLQQEPDGTIKRLIYATSTLDSGVPKRFSGSRSGSDYSLTISSLESEDFVAYYCLQYASSPYTFGGGTKLEVK本专利技术还揭示了一种核酸分子及细胞系，以及以上所述抗MMAE单克隆抗体的制备方法。
[0019]所述核酸分子由编码以上任一所述的抗MMAE单克隆抗体获得。所述细胞系能够产生如以上任一所述的抗MMAE单克隆抗体。所述方法包括培养上述的细胞系，并产生所述的抗MMAE单克隆抗体。本专利技术的所述抗MMAE单克隆抗体可以应用于相关抗肿瘤配体偶联药物中的研究。
[0020]为更好的理解本专利技术，以下进行具体的实施举例说明。
[0021]实施例1：抗原制备公司内部合成MMAE小分子，并标记一个半胱氨酸（MMAE
‑
CYS）以便于偶联载体蛋白，进行免疫或检测用。载体蛋白偶联，免疫抗原制备，由于MMAE分子比较小，毒性大，不适合直接免疫，将MMAE
‑
CYS与载体蛋白进行偶联，选择Thermo Scientific的马来酰胺活化的钥孔血蓝（KLH）蛋白试剂盒，按照试剂盒提供的流程操作，进行与载体蛋白偶联。
[0022]实施例2：动物免疫将实施例1中制备的免疫用抗原（MMAE
‑
CYS
‑
KLH）用弗氏完全佐剂乳化，免疫4~6周龄雌性Balb/c小鼠（购自北京维通利华实验动物技术有限公司），腹部皮下注射，每只小鼠6点，剂量为100
µ
g/只。每14天加强免疫一次，抗原使用弗氏非完全佐剂乳化，剂量为50
µ
g/只。第3次加强免疫后7天，以间接ELISA（波长450nm）检测小鼠血清中抗免疫原的多抗效价，效价最高的小鼠以尾静脉注射冲击免疫，抗原用生理盐水混匀，剂量为50
µ
g/只。
[0023]实施例3：杂交瘤细胞制备1、融合：将实施例2中免疫达标的小鼠采血，取脾脏制备细胞悬液，与小鼠骨髓瘤
细胞F0以10：1比例混合，离心1200rpm，5分钟。弃上清后，离心管放入37℃水浴中，在1分钟内缓慢加入1 mL的PEG1500（Roche公司），并混匀细胞。在温水中静置l分钟后，加入10 mL无血清的IMDM（Hyclone公司），混匀，离心1000rpm，5分钟。弃上清后，加入10 mL含10%血清（Excell公司）的IMDM培养基，将细胞轻轻地吹打起来，并加入配好的HAT完全培养基（Sigma公司）混匀，铺96孔板。将铺好细胞的培本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.抗MMAE单克隆抗体，其特征在于：包含有重链可变区的抗原互补决定区aaCDR1、aaCDR2和aaCDR3，其氨基酸序列分别为SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3；轻链可变区的抗原互补决定区aaCDR1、aaCDR2和aaCDR3，其氨基酸序列分别为SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6。2.如权利要求1所述的抗MMAE单克隆抗体，其特征在于：所述抗体具有SEQ ID NO：7所示的重链区可变区氨基酸序列和SEQ ID NO:8所示的轻链区可变区氨基酸序列。3.一种核酸分子，其特征在于：所述核酸分子包括编码如权利要求1
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【专利技术属性】
技术研发人员：黄保华，王中波，
申请(专利权)人：苏州宜百奥生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：