一种戈舍瑞林的合成方法技术

本发明专利技术提供了一种戈舍瑞林的合成方法，通过固相合成法生成pGlu-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-OH和Fmoc-D-Ser(tBu)-Leu-Arg(NO2)-Pro-OH；并对生成的Fmoc-D-Ser(tBu)-Leu-Arg(NO2)-Pro-OH，脱除Fmoc生成NH

【技术实现步骤摘要】
一种戈舍瑞林的合成方法


[0001]本专利技术属于医药多肽类原料药的化学合成，具体涉及一种戈舍瑞林的合成方法。

技术介绍

[0002]戈舍瑞林(goserelin)，又称高瑞林、高舍瑞林、性瑞林、果丝瑞宁等，是人工合成的十肽化合物，氨基酸序列为pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(tBu)-Leu-Arg-Pro-AzaGly-NH2。是一种黄体激素释放激素(GnRH)结构类似物，与天然GnRH的不同之处在于肽链的第6和第10位基团上，能促进性腺激素的释放，作用较人体分泌的GnRH强50～100倍，LHRH类似物通过竞争结合垂体LHRH的大部分受体，反馈性抑制LH和FSH的分泌，从而抑制卵巢雌激素的生成，达到药物性卵巢切除的治疗作用。男性病人在第一次注射此药后21天左右血清睾丸酮浓度下降至去势水平，并在以后的治疗中维持此浓度，这可使大多数病人的前列腺肿瘤消退，症状有所改善。
[0003]目前现有的合成路线主要两种合成方法：固相合成和液相合成。液相合成操作繁琐，每合成一步都需要纯化，合成得率很低，不适合超过5个氨基酸以上的多肽合成，液相合成的原材料的价格已大大高于大规模工业化生产的Fmoc/tBu固相体系的原材料价格，直接影响生产成本；对于固相合成方法来说，一般采用多肽合成中的SPPS进行整个序列的全合成，但是，戈舍瑞林由于侧链D-Ser含有tBu和常规的Fmoc/tBu固相反应体系不兼容，用常规的Fmoc/tBu固相反应体系无法合成或收率很低，不适合规模化生产。

技术实现思路

[0004]为了解决现有技术的不足，本专利技术提供了一种戈舍瑞林的合成方法。
[0005]本专利技术通过以下技术手段实现：
[0006]一种戈舍瑞林的合成方法，包括如下步骤
[0007]S1、固相合成法生成pGlu-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-OH和Fmoc-D-Ser(tBu)-Leu-Arg(NO2)-Pro-OH；
[0008]S2、Fmoc-D-Ser(tBu)-Leu-Arg(NO2)-Pro-OH与盐酸氨基脲在液相中缩合成Fmoc-D-Ser(tBu)-Leu-Arg(NO2)-Pro-AzaGly-NH2。对生成的Fmoc-D-Ser(tBu)-Leu-Arg(NO2)-Pro-AzaGly-NH2，脱除Fmoc生成NH
2-D-Ser(tBu)-Leu-Arg(NO2)-Pro-AzaGly-NH2；
[0009]S3、对pGlu-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-OH和NH
2-D-Ser(tBu)-Leu-Arg(NO2)-Pro-AzaGly-NH2两个片段进行液相偶联；
[0010]S4、对S3中偶联后的片段进行-NO2保护基的脱除，得到戈舍瑞林粗品；
[0011]S5、通过RP-HPLC纯化和冻干制得戈舍瑞林精品。
[0012]优选地，所述S1中固相合成法生成pGlu-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-OH包括如下步骤：
[0013]S11、取2-CTC树脂,于固相反应柱中，用DCM溶胀,加入Fmoc-Tyr(tBu)-OH、DIEA的DMF溶液，充分反应；
[0014]S12、DMF充分洗涤，加入DCM:MeOH:DIEA＝17:2:1混合溶液封闭；
[0015]S13、用DMF洗涤得到Fmoc-Tyr(tBu)-CTC树脂；按照SPPS和序列，依次偶联Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-His(Trt)-OH和Pyr-OH；
[0016]S14、用体积比TFA:DCM＝1:99混合溶液进行反应，经旋蒸、无水乙醚打浆和洗涤、干燥得到全保护肽粗品；
[0017]S15、通过硅胶层析柱：用DCM和MeOH混合溶液溶解，用硅胶进行分离纯化，并用DCM和MeOH的混合溶液冲洗硅胶，将纯品的溶液真空浓缩，得到纯度＞98％的全保护肽纯品；
[0018]S16、用体积比TFA：苯酚：水＝95：2.5：2.5的混合溶液进行脱除保护基，过滤；冰冻乙醚沉淀、离心、乙醚洗涤，真空干燥得到纯度大于95％的pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-OH；
[0019]优选地，所述S1中固相合成法合成Fmoc-D-Ser(tBu)-Leu-Arg(NO2)-Pro-OH包括如下步骤：
[0020]S111、称取2-CTC树脂,于固相反应柱中，DCM溶胀后加入Fmoc-Pro-OH、DIEA的DMF溶液，充分反应；
[0021]S121、DMF充分洗涤，加入DCM:MeOH:DIEA＝17:2:1混合溶液封闭15min；用DMF洗涤后得到Fmoc-Pro-CTC树脂；
[0022]S131、按照SPPS和序列，依次偶联Fmoc-Arg(NO2)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-D-Ser(tBu)-OH；用体积比TFA:DCM＝1:99的混合溶液反应1h，旋蒸、无水乙醚打浆和洗涤、干燥得到全保护肽粗品，
[0023]S141、通过硅胶层析柱：用DCM和MeOH的混合溶液溶解，用硅胶进行分离纯化，DCM和MeOH的混合溶液，将纯品的溶液真空浓缩，得到纯度大于98％的全保护肽Fmoc-D-Ser(tBu)-Leu-Arg(NO2)-Pro-OH，所述混合溶液体积比为DCM：MeOH＝10：1。
[0024]优选地，所述S2包括如下步骤：
[0025]S21、称取Fmoc-D-Ser(tBu)-Leu-Arg(NO2)-Pro-OH溶解于DMF和DCM的混合溶液中，冰浴搅拌至澄清；
[0026]S22、分别加入PyBop、DIEA、盐酸氨基脲,搅拌30min后升温25℃，反应完全后将反应溶液真空浓缩成半固体状态；
[0027]S23、用10％柠檬酸打浆，过滤，并用纯水洗涤滤饼，真空干燥得到Fmoc-D-Ser(tBu)-Leu-Arg(NO2)-Pro-AzaGly；
[0028]S24、将S23得到的Fmoc-D-Ser(tBu)-Leu-Arg(NO2)-Pro-AzaGly加入到20％哌啶和DMF混合液中，在氮气保护下搅拌，反应。
[0029]S25、反应液缓慢加入到纯水中，搅拌，析出白色固体，过滤，并用正己烷冲洗固体，真空干燥得到NH
2-D-Ser(tBu)-Leu-Arg(NO2)-Pro-AzaGly-NH2。
[0030]优选地，所述S3包括如下步骤:
[0031]S31、将S1中制得的pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-OH溶解于体积比为1：的DMF和DCM的混合溶液中，冰浴搅拌至澄清；
[0032]S32、分别加入EDC.HCl、HOBt、DIEA、NH
2-D-Ser(tBu)-Leu-Arg(NO2)-Pro本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种戈舍瑞林的合成方法，其特征在于：包括如下步骤S1、固相合成法生成pGlu-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-OH和Fmoc-D-Ser(tBu)-Leu-Arg(NO2)-Pro-OH；S2、Fmoc-D-Ser(tBu)-Leu-Arg(NO2)-Pro-OH与盐酸氨基脲在液相中缩合成Fmoc-D-Ser(tBu)-Leu-Arg(NO2)-Pro-AzaGly-NH2。对生成的Fmoc-D-Ser(tBu)-Leu-Arg(NO2)-Pro-AzaGly-NH2，脱除Fmoc生成NH
2-D-Ser(tBu)-Leu-Arg(NO2)-Pro-AzaGly-NH2；S3、对pGlu-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-OH和NH
2-D-Ser(tBu)-Leu-Arg(NO2)-Pro-AzaGly-NH2两个片段进行液相偶联；S4、对S3中偶联后的片段进行-NO2保护基的脱除，得到戈舍瑞林粗品；S5、通过RP-HPLC纯化和冻干制得戈舍瑞林精品。2.如权利要求1所述的一种戈舍瑞林的合成方法，其特征在于：所述S1中固相合成法生成pGlu-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-OH包括如下步骤：S11、取2-CTC树脂,于固相反应柱中，用DCM溶胀,加入Fmoc-Tyr(tBu)-OH、DIEA的DMF溶液，充分反应；S12、DMF充分洗涤，加入DCM:MeOH:DIEA＝17:2:1混合溶液封闭；S13、用DMF洗涤得到Fmoc-Tyr(tBu)-CTC树脂；按照SPPS和序列，依次偶联Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-His(Trt)-OH和Pyr-OH；S14、用体积比TFA:DCM＝1:99混合溶液进行反应，经旋蒸、无水乙醚打浆和洗涤、干燥得到全保护肽粗品；S15、通过硅胶层析柱：用DCM和MeOH混合溶液溶解，用硅胶进行分离纯化，并用DCM和MeOH的混合溶液冲洗硅胶，将纯品的溶液真空浓缩，得到纯度＞98％的全保护肽纯品；S16、用体积比TFA：苯酚：水＝95：2.5：2.5的混合溶液进行脱除保护基，过滤；冰冻乙醚沉淀、离心、乙醚洗涤，真空干燥得到纯度大于95％的pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-OH。3.如权利要求2所述的一种戈舍瑞林的合成方法，其特征在于：所述S1中固相合成法合成Fmoc-D-Ser(tBu)-Leu-Arg(NO2)-Pro-OH包括如下步骤：S111、称取2-CTC树脂,于固相反应柱中，DCM溶胀后加入Fmoc-Pro-OH、DIEA的DMF溶液，充分反应；S121、DMF充分洗涤，加入DCM:MeOH:DIEA＝17:2:1混合溶液封闭15min；用DMF洗涤后得到Fmoc-Pro-CTC树脂；S131、按照SPPS和序列，依次偶联Fmoc-Arg(NO2)-OH、Fmoc-Leu-OH、F...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄保华，戴建，胡新礼，
申请(专利权)人：苏州宜百奥生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：