一种人源化抗体及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种人源化抗体及其应用，该人源化抗体包括重链可变区和轻链可变区，能够特异性靶向IgG的CH1结构域162位点唾液酸化表位，所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。该人源化抗体能够有效抑制肿瘤细胞生长、侵袭及悬浮生长能力，具有明显的抗肿瘤作用，还可以抑制肿瘤细胞c

【技术实现步骤摘要】
一种人源化抗体及其应用


[0001]本专利技术涉及免疫及基因工程
，具体涉及一种人源化抗体及其在抗肿瘤药物中的应用。

技术介绍

[0002]前期的研究发现，不但是B细胞高表达IgG，多种不同谱系起源的非B细胞同样可表达IgG，而且，非B细胞来源的IgG在结构和功能上与传统认识上的B细胞来源的IgG有很大差别。特别是发现上皮性肿瘤细胞表达水平显著高于正常细胞，这类在肿瘤细胞高表达的IgG能够促进肿瘤细胞的黏附能力，在体外和体内都促进肿瘤细胞的迁移和侵袭力，并且肿瘤干细胞高表达的IgG能够增强肿瘤干细胞自我更新和肿瘤形成及转移能力。基于此，近期对上皮起源的肿瘤细胞表达的IgG进行研究发现，其在CH1结构域上具有独特的非典型N糖基化位点，且其N糖链末端发生高唾液酸化修饰，重要的是，肿瘤细胞表达的IgG恰恰依赖其独特的唾液酸修饰实现促肿瘤、特别是促肿瘤干细胞的自我更新和肿瘤形成及转移，其同样能够作为标志物来识别上皮性肿瘤细胞、特别是肿瘤干细胞。
[0003]RP215是加拿大一课题组基于卵巢癌细胞系获得的单克隆抗体，RP215 识别的分子称为 CA215（癌抗原 215），被认为是泛癌标志物，当时认为其结合至RP215的抗原表位包括Ig的糖链以及黏蛋白等多种蛋白，但并未研究出RP215识别的具体抗原及其表位。经过本专利技术人的前期研究，最终发现RP215可以识别肿瘤细胞表达的IgG，其抗原表位是IgG的CH1结构域唾液酸化修饰的162位点。该位点可以作为上皮性肿瘤的特异性识别位点（专利号ZL201510776518.9）。然而目前除了单抗RP215以外，还没有其它以该IgG为特异性靶点的诊断或者治疗药物。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是提供一种人源化抗体及其应用，该人源化抗体能够特异性识别CH1结构域带有唾液酸化修饰的IgG，具有诊断和治疗意义。
[0005]本专利技术技术方案详述如下：一种人源化抗体，包括重链可变区和轻链可变区，能够特异性靶向IgG的CH1结构域162位点唾液酸化表位，所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
[0006]一种编码基因，用于编码上述人源化抗体的重链可变区和轻链可变区，编码重链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，编码轻链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。
[0007]一种表达载体，含有上述编码基因。
[0008]一种宿主细胞，含有上述表达载体。
[0009]上述人源化抗体在制备抗肿瘤药物中的应用。
[0010]一种抗肿瘤药物，含有上述人源化抗体。
[0011]优选的，上述抗肿瘤药物，所述肿瘤为上皮性肿瘤。
[0012]上述人源化抗体在制备c
‑
Met信号通路抑制剂中的应用。
[0013]上述人源化抗体在制备Wnt信号通路抑制剂中的应用。
[0014]上述人源化抗体的制备FAK信号通路抑制剂中的应用。
[0015]与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：本专利技术通过免疫及基因工程技术，研制出能够特异性识别CH1结构域带有唾液酸化修饰的IgG的人源化抗体，该抗体能够有效抑制肿瘤细胞生长、侵袭及悬浮生长能力，可作为抗肿瘤药物，为肿瘤治疗提供新的途径。
附图说明
[0016]图1为肺鳞癌细胞
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NCI
‑
H520培养体系中分别加入mIgG、SIG
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003F（人源化抗SIG1）、SIG
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004F（人源化抗SIG 2）、RP215后细胞总蛋白中FAK信号通路和c
‑
Met信号通路相关蛋白的Western blot检测结果。
[0017]图2为肺鳞癌细胞
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NCI
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H520培养体系中分别加入mIgG、SIG
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002F、SIG
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001、RP215后细胞总蛋白中FAK信号通路相关蛋白和c
‑
Met信号通路相关蛋白的Western blot检测结果。
[0018]图3为肺鳞癌细胞
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NCI
‑
H520培养体系中分别加入mIgG、RP215、SIG
‑
002F、SIG
‑
001体培养7天后的细胞生长情况。
[0019]图4为图3实验统计数据柱形图。
[0020]图5为mIgG、RP215、SIG
‑
001分别抑制肿瘤细胞增殖（上）及侵袭（下）的效果。
[0021]图6为mIgG、RP215、SIG
‑
001分别抑制肿瘤干细胞体外形成微球生长（左）、抑制肿瘤细胞生长的能力（中）和抑制肿瘤细胞在体外克隆生长的能力（右）的效应对比结果。
[0022]图7为mIgG、RP215、SIG
‑
001分别抑制肺鳞癌肿瘤生长（体现为体积及重量降低）的效应对比结果，左上为随时间增加体内肿瘤体积变化曲线图，右上为不同组取出的肿瘤大小对比，左下为不同组肿瘤体积数值分布，右下为不同组肿瘤重量数值分布。
[0023]图8为实施例2的2.3部分不同组实验小鼠肿瘤组织蛋白中c
‑
Met信号通路相关蛋白以及Wnt信号通路中相关蛋白的Western blot检测结果。
[0024]图9为用RP215对肺鳞癌PDX肿瘤细胞进行免疫组化染色结果。
[0025]图10为mIgG、RP215、SIG
‑
001分别抑制胰腺癌肿瘤生长（体现为体积及重量降低）的效应对比结果，左上为随着时间增加小鼠体重的变化曲线图，右上为随时间增加体内肿瘤体积变化曲线图，中图为不同组取出的肿瘤大小对比，左下为不同组肿瘤重量数值分布，右下为不同组肿瘤体积数值分布。
[0026]图11为mIgG、RP215、SIG
‑
001分别抑制结肠癌肿瘤生长（体现为体积降低）的效应对比结果。
具体实施方式
[0027]下面结合较佳的具体实施例对本专利技术的技术方案进行详细解释和说明，以使本领域技术人员能够更好地理解本专利技术并予以实施。
[0028]实施例中，SIG表示来源于上皮性肿瘤细胞的CH1结构域162位点N糖链唾液酸修饰
的分泌型IgG。
[0029]抗体的重链和轻链可变区（V区）由高变区 (hypervariable region，HVR)和骨架区(framework region，FR )组成，高变区又称互补决定区(complementarity
‑
determining region, CDR)，是与抗原表位结构相互补的关键区域，骨架区用于稳定高变区的空间构型。抗体重链和轻链可变区中HVR通常由3个结构域组成：HVR1、HVR2、HVR3；FR通常由四个结构域组成：FR1、FR2、FR本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种人源化抗体，包括重链可变区和轻链可变区，其特征在于，特异性靶向IgG的CH1结构域162位点唾液酸化表位，所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。2.一种编码基因，其特征在于，用于编码权利要求1所述人源化抗体的重链可变区和轻链可变区，编码重链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，编码轻链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。3.一种表达载体，其特征在于，含有权利要求2所述的编码基因。4...

【专利技术属性】
技术研发人员：邱晓彦，何峙峤，黄歆梅，姜文华，
申请(专利权)人：北京艾赛吉生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：