戈舍瑞林的固相合成方法技术

本发明专利技术公开一种戈舍瑞林的固相合成方法，包括：采用HBTU/DIPEA作为缩合体系，依次偶联Fmoc‑Ser‑OH、Fmoc‑Trp‑OH；将全保护裂解液按树脂重量的10倍加入相应体积的量将中间产物中的载体2‑CTC Resin去除，但保留所有侧链保护基；将全保护裂解液用DIPEA（N，N‑二异丙基乙胺）调成偏碱性并将盐酸氨基脲和PyBop（1H‑苯并三唑‑1‑基氧三吡咯烷基六氟磷酸盐[用于肽的偶联剂）加入全保护裂解液中进行反应偶联，得到保留侧链保护基的戈舍瑞林肽溶液；将20%TFA/DCM的裂解液加入冰冻的乙醚中沉降获得白色固体粗肽；将白色固体粗肽真空抽干用甲醇溶解，加入甲酸铵和Pa/c进行氢化反应去除肽序中侧链保护基。本发明专利技术避免了许多副反应现象，提高了目的肽的纯度，收率也相对较高，操作起来方便可行中间体可以跟踪控制，整个过程利于放大生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及多肽药物化学合成领域，具体涉及一种醋酸戈舍瑞林的固相合成方 法。
技术介绍
戈舍瑞林，其中文化学名：焦谷氨酰-L-组氨酰-L-色氨酰-L-酪氨酰-D-丝氨 酰-L-亮氨酰-精氨酰-脯氨酰-氨基尿；英文名称：Goserelin，分子式：C59H84N18014,分 子量：1269. 4105 ;适用症：适用于可用激素治疗的前列腺癌及绝经前和绝经期的乳腺癌。 子宫内膜异位症；本药是一种合成的、促黄体生成素释放激素的类似物，长期使用可抑制垂体的促黄体 生成激素的分泌，从而引起男性血清睾酮和女性血清雌二醇的下降，停药后这一作用是可 逆的。男性病人在第一次用药之后21日左右，睾酮浓度可降低到去势后的水平，在每28 天用药1次的治疗过程中，睾酮浓度一直保持在去势后的浓度范围内。这种睾酮抑制作用 可使大多数病人的前列腺肿瘤消退，症状改善。女性患者在初次用药后21日左右，血清雌 二醇浓度受到抑制，并在以后每28天的治疗中维持在绝经后水平。这种抑制与激素依赖性 的乳腺癌，子宫内膜异位症相关。 药代动力学：本药具有几乎完全的生物利用度。每4周使用一注射埋植剂，可保持 有效血药浓度，而无组织蓄积。诺雷德的蛋白结合能力较差，在肾功能正常的情况下，血浆 清除半衰期为2-4小时，肾功能不全病人的半衰期将会延长，但对于每月都使用埋植剂的 患者来说，这影响非常小，故没有必要改变这些病人的用量。在肝功能不全的病人中，药代 动力学无明显的变化。 毒理研宄：在长期重复使用诺雷德的雄性鼠中，曾观察到良性脑垂体肿瘤的发病 率上升，这一事实与以前已观察到的行外科去势后的大鼠的情形相似，但尚未发现与人体 使用的经验有任何关联。在小鼠实验中，长期重复使用数倍于人类常用剂量的诺雷德后，可 发现胰岛细胞及幽门部胃粘膜细胞增生。这些事实与临床的关系尚不清楚。 从市场分析可以看出戈舍瑞林的需求量还是比较大的，前景比较可观，但是目前 就戈舍瑞林的合成方法就归结于两类，一种为固相合成方法一种为液相合成方法，但每种 方法都有各自的优缺点。 CN 101759777A采用的是"5+4 "的一个纯液相片段合成法，主要是先合成一个 五肽片段Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-OH,选氯甲酸叔丁醋作为缩合试剂一步一步缩合而成， 同样的方法再合成一个4肽片段D-Ser (tBu)-Leu-Arg-Pr〇-Azgly-NH2,然后将5肽片段 Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-OH 和 4 肽片段 D-Ser (tBu) -Leu_Arg-Pr〇-Azgly-NH2 在缩合试剂的 条件下缩合完成得到目的物肽序 Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser (tBu)-Leu-Arg-Pro-Azgly -NH2。实验证明这种纯液相片段合成中，两个片段偶联时反应周期较长，时间一般是常规偶 连反应的10倍左右，造成时间的浪费合成的危险性相对加大；纯液相合成法虽然省去了树 脂的部分费用但是反应步骤较多，反应比较繁杂，过程中不容易控制，洗涤等操作加大难度 甚至难以实行造成最终产品纯度不高给纯化制备加大难度；纯液相片段缩合法在合成片段 时，片段作为一个原料其量需加倍甚至有时还会出现补投现象所以说片段合成的量一般是 目的肽合成的量的5倍左右，如果放大会给生产造成很大的费用；虽然纯液相片段合成法 也能很顺利的合成出目的产物，但是存在上述的一些缺陷综合考虑还是不利于大规模的生 产。 CN 102446383A采用的是原始的固相合成法来完成戈舍瑞林的操作，主要是这样 的一个反应： 首先1、将Rink Amide MBHA Reain与N, Ν' -羰基二咪唑反应生成2、 将上述的中间产物与Fmoc-NH-NH2反应得到Fmoc-NH-NH-CO-NH-Resin ; 3、 以Fmoc-NH-NH-CO-NH-Resin为起始物进行固相合成一次偶联带有保护基团的氨基 酸至结束； 4、 裂解得到粗肽进行纯化制备。 此专利中所涉及的氨基酸的支链基团都没有进行保护，完全裸露。这样首先就 是会造成在合成过程中出现许多副反应现象，造成目的肽纯度低纯化难度大，还有就是在 合成过程中利用Rink Amide MBHA Reain与N, Ν' -羰基二咪唑反应生成中间产物再与 Fmoc-NH-NH2反应得到Fmoc-NH-NH-CO-NH-Resin整个过程无法跟踪，无法确定偶联反应程 度及偶联效果，整个过程放大生产难以实现。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种，该醋酸戈舍瑞林的固相 合成方法集合了固、液相合成方法中各自的优点，避免了许多副反应现象，提高了目的肽的 纯度，收率也相对较高，操作起来方便可行中间体可以跟踪控制，整个过程利于放大生产。 为达到上述专利技术目的，本专利技术采用的技术方案是：一种醋酸戈舍瑞林的固相合成 方法，包括以下步骤： 步骤一、由 Fmoc-Pro-OH 和替代度为 L 1-1. 3mmol/g 的 2-CTC Resin 在激活剂 N，N_ 二 异丙基乙胺的作用下，室温反应Ih得到Fmoc-Pro-CTC Resin，加入20%DBLK (哌啶：DMF=1 : 4)去除 Fmoc 得到 H- Pro-CTC Resin ; 所述Fmoc-Pro-OH的结构式如下：所述2-CTC Resin的结构式如下：步骤二、按照常规的固相合成方法，采用H0BT/DIC、反应lh、DMF作溶剂依次偶联以下 Fmoc 的氨基酸 Fmoc-Arg (N02) -OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-D-Ser (tBu) -OH 和 Fmoc-Tyr (Bzl) H3H 得到 Fmoc-Tyr (Bzl)-D-Ser (tBu)-Leu-Arg (N02)-Pro-CTC Resin ; 步骤三、采用HBTU/DIPEA作为偶联缩合体系，在DCM作溶剂的条件下，反应lOmin，依次 偶联 Fmoc-Ser-〇H、Fmoc-Trp-〇H 得到 Fmoc-Trp-Ser-Tyr (Bzl) -D-Ser (tBu) -Leu-Arg (N02) -Pro-CTC Resin ； 步骤四、按照常规的固相合成方法，采用HOBT/DIC、反应lh、DMF作溶剂依次偶联 Fmoc-His (Trt) -OH、Pyr 得到 H-Pyr-His (Trt) -Trp-Ser-Tyr (Bzl) -D-Ser (tBu) -Leu-Arg (N 02)-Pro-CTC Resin ； 步骤五、将全保护裂解液按树脂重量的10倍(w: v=l: 10)加入相应体积的量将H-Pyr-H is (Trt) -Trp-Ser-Tyr (Bzl) -D-Ser (tBu) -Leu-Arg (N02) -Pr〇-2-CTC Resin 中的载体 2-CTC Resin去除； 步骤六、将全保护裂解液用DIPEA (N，N-二异丙基乙胺）调成偏碱性PH=7. 8-8. 5优选 7. 8-8. 2按摩尔量的3倍将称量好的盐酸氨基脲和PyBop (IH-苯并三唑-1-基氧三吡咯 烷基六氟磷酸盐[用于肽的偶联剂)加入PH在7. 8-8. 2左右的全保护裂解液中进行反应偶 联，从而得到保留侧链本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种醋酸戈舍瑞林的固相合成方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤一、由Fmoc‑Pro‑OH和替代度为1.1‑1.3mmol/g 的2‑CTC Resin在激活剂N，N‑二异丙基乙胺的作用下，室温反应得到Fmoc‑Pro‑CTC Resin，加入20%DBLK（哌啶：DMF=1：4）去除Fmoc得到H‑ Pro‑CTC Resin；所述Fmoc‑Pro‑OH的结构式如下：所述2‑CTC Resin的结构式如下：步骤二、按照常规的固相合成方法，采用HOBT/DIC、反应1h、DMF作溶剂依次偶联以下Fmoc 保护的氨基酸Fmoc‑Arg(NO2)‑OH、Fmoc‑Leu‑OH、Fmoc‑D‑Ser(tBu)‑OH和 Fmoc‑Tyr(Bzl) ‑OH得到Fmoc‑Tyr(Bzl)‑D‑Ser(tBu)‑Leu‑Arg(NO2)‑Pro‑CTC Resin；步骤三、采用HBTU/DIPEA作为缩合体系，在DCM作溶剂的条件下，反应10min，依次偶联Fmoc‑Ser‑OH、Fmoc‑Trp‑OH得到Fmoc‑Trp‑Ser‑Tyr(Bzl)‑D‑Ser(tBu)‑Leu‑Arg(NO2)‑Pro‑CTC Resin；步骤四、按照常规的固相合成方法，采用HOBT/DIC、反应1h、DMF作溶剂依次偶联Fmoc‑His(Trt)‑OH、Pyr得到H‑Pyr‑His(Trt)‑Trp‑Ser‑Tyr(Bzl)‑D‑Ser(tBu)‑Leu‑Arg(NO2)‑Pro‑CTC Resin；步骤五、将全保护裂解液（三氟乙醇：二氯甲烷=1：4）按树脂重量的10倍加入到步骤四的肽树脂中充分搅拌均匀将H‑Pyr‑His(Trt)‑Trp‑Ser‑Tyr(Bzl)‑D‑Ser(tBu)‑Leu‑Arg(NO2)‑Pro‑2‑CTC Resin中的载体2‑CTC Resin去除，但保留所有侧链保护基；步骤六、将全保护裂解液用DIPEA（N，N‑二异丙基乙胺）调成偏碱性PH=7.8‑8.5优选7.8‑8.2按摩尔量的3倍将称量好的盐酸氨基脲和PyBop（1H‑苯并三唑‑1‑基氧三吡咯烷基六氟磷酸盐[用于肽的偶联剂）加入PH在7.8‑8.2左右的全保护裂解液中进行反应偶联，从而得到保留侧链保护基的戈舍瑞林前体肽I  Pyr‑His(Trt)‑Trp‑Ser‑Tyr(Bzl)‑D‑Ser(tBu)‑Leu‑Arg（NO2）‑Pro‑Azgly‑NH2的溶液状态将其溶液旋蒸浓缩成粘稠状物或是固体状物；步骤七、配置20%TFA/DCM 的裂解液缓慢加入到步骤六中的粘稠状物中使其搅拌室温裂解2h，再将其裂解液缓慢加入冰冻的乙醚中放置30min进行沉降即得到去除His(Trt)上的侧链保护基Trt得到前体肽II  Pyr‑His‑Trp‑Ser‑Tyr(Bzl)‑D‑Ser(tBu)‑Leu‑Arg（NO2）‑Pro‑Azgly‑NH2的白色固体物；步骤八、将步骤七中的前体肽II白色固体物真空抽干用甲醇溶解，加入甲酸铵和Pa/c进行氢化反应去除肽序中侧链保护基NO2和Bzl，从而得到戈舍瑞林粗肽Pyr‑His‑Trp‑Ser‑Tyr‑D‑Ser(tBu)‑Leu‑Arg‑Pro‑Azgly‑NH2的甲醇溶液；步骤九、将含有甲醇溶液的戈舍瑞林粗品进行过滤去除过量的Pa/c及甲酸铵然后加入5倍量的纯水将样品析出离心得到纯度90%的戈舍瑞林粗肽固体，制备得到戈舍瑞林。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：夏丹，王良友，孙锋，
申请(专利权)人：苏州天马医药集团天吉生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32