本发明专利技术属于多肽药物合成与制备方法技术领域，特别涉及醋酸西曲瑞克的合成制备方法独特性与专有性。本发明专利技术以Rink Amide-AM Resin树脂为载体，以低成本的HBTU/DIEA为缩合剂，采用特异性微波合成技术，提高了缩合效率，其粗品收率达到了92％；得到的西曲瑞克粗品经反相高效液相色谱(rHPLC)法纯化并采用强阴离子交换树脂转醋酸盐处理，得到的醋酸西曲瑞克纯品收率达到40％以上，其醋酸含量达到国际标准要求。本发明专利技术大大缩短了反应时间，提高了产品的最终收率，具有可观的经济适用价值和广泛的应用前景。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于多肽药物制备方法
，特别涉及一种以特异性微波合成制备醋 酸西曲瑞克的方法。
技术介绍
中文名称：醋酸西曲瑞克 英文名称：cetrorelix Acetate 结构式：Ac-D-2-Nal-D-Cpa-D-3-Pal-Ser-Tyr-D-Cit-Leu-Arg-P;r〇-D-Ala-NH2 分子式：C70H92N17014C1 分子量：1431. 06 醋酸西曲瑞克（cetrorelix Acetate)是一种有效的黄体酮释放激素抑制素 (LHRH)受体拮抗剂，用于控制卵巢的刺激作用，来预防不成熟卵泡的过早排出，帮助受孕。 由于cetrorelix Acetate的自身物理性质（Mw值）而易被胃肠道中的酵素分解破坏，不能 通过口服使用，因此常作注射用西曲瑞克制剂，通过皮下或肌肉注射吸收，迅速发挥作用。 醋酸西曲瑞克又常称为西曲瑞克，通过剂量依赖抑制脑垂体腺的黄体生成激素 (LH)和卵泡刺激素（FSH)的分泌，并且不会影响黄体激素受体的活性而被大量研宄，结果 显示西曲瑞克对卵巢癌、前列腺癌、子宫纤维瘤、子宫内膜异位等疾病有较好的疗效，而且 对良性前列腺肥大和卵巢过度刺激综合征有预防和改善作用。 目前市场上的西曲瑞克制备方法，多采用了液相合成法，这些方法中都用到了毒 性较大的如吡啶、氨水等试剂，若用于西曲瑞克的大量制备，定会长期接触此类试剂，对人 身体伤害较大。本专利技术利用Fmoc固相合成原理，开发了固相高效合成技术，采用常见易得、 低成本的原料试剂来合成制备，通过工艺优化以及特有的微波反应技术处理，西曲瑞克粗 品收率尚达92%，其纯品得率达到40%，大大提尚了西曲瑞克的得率；本专利技术还米用强阴 离子交换树脂-醋酸转盐技术处理西曲瑞克纯品，大大降低了纯品中三氟醋酸的含量，彻 底清除了三氟醋酸对生物体的毒性；本专利技术操作简单，反应过程取样方便，易于中控，并且 合成周期短，生产成本低，副产物少，产品收率高，利于快速地大规模生产。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种以特异性微波合成制备醋酸西曲瑞克的 方法，该制备方法反应条件温和、反应效率高、成本低、具有生产醋酸西曲瑞克原料的广泛 应用前景。 本专利技术醋酸西曲瑞克的制备方法，包括固相多肽合成法合成西曲瑞克树脂，西曲 瑞克树脂切割沉降后得到西曲瑞克粗品，西曲瑞克粗品纯化、转盐冻干后得到醋酸西曲瑞 克纯品；为实现上述目的，本专利技术采取以下技术方案制备醋酸西曲瑞克： (1)以Rink Resin为起始树脂载体，通过固相合成法依次连接西曲瑞克产品序列 中相对应的氨基酸，得到西曲瑞克前体肽I-氨基树脂如下： Fmoc-D-Nal-D-Cpa-D-Pal-Ser-Tyr-D-Cit-Leu-Arg-Pro-D-Ala-氨基树脂 (2)脱掉D-Nal保护基，进行N端乙酰化反应，得到西曲瑞克前体肽II-氨基树脂 如下： Ac-D-Nal-D-Cpa-D-Pal-Ser-Tyr-D-Cit-Leu-Arg-Pro-D-Ala-氨基树脂 (3)切害U、沉降后，得到西曲瑞克粗肽m如下： Ac-D-Nal-D-Cpa-D-Pal-Ser-Tyr-D-Cit-Leu-Arg-Pr〇-D-Ala-NH2 (4)纯化、转盐及冻干得到醋酸西曲瑞克IV。 上述的西曲瑞克固相合成工艺中，步骤（1)所述氨基树脂优选为Rink Amide-AM Resin。反应中以HBTU/DIEA为缩合剂和活化试剂，以20% Pip/DMF溶液为脱保护试剂，进 行多肽的连续缩合反应。 步骤（2)所述乙酰化反应，乙酰化试剂为体积比是醋酐：DIEA : DMF = I : 1 : 4 配置的混合溶液，反应液体积为反应器容积的1/3~1/2。 步骤⑶所述切割、沉降反应，切割试剂的用量为Ig树脂8ml切割试剂，树脂切割 两次，将切割液分别吹入到冰乙醚中，离心沉淀去上清，重复操作3次得到多肽粗产品。 步骤（4)所述纯化工艺，选用5um C18制备柱进行反相高效液相色谱纯化，采用醋 酸-强阴离子交换树脂转盐技术处理西曲瑞克多肽，最终得到醋酸西曲瑞克IV纯品。【具体实施方式】 通过下述实施例将有助于理解本专利技术，但不能限制本专利技术的内容。对于本专利技术所 属
的普通技术人员来说，在不脱离本专利技术构思的前提下，还可以做出若干简单替 换或推演，都视为属于本专利技术的保护范围。 实施例1 1.氨基树脂的溶胀 称量取代度为0. 97~I. 04mmol/g的Rink-AM-Resin 0. 15g，从开口端加入至多肽 合成反应器中，取DCM试剂加入至反应器中，使树脂完全浸没在DCM溶剂中，与溶剂充分接 触，溶胀2h。 2. Fmoc-西曲瑞克树脂的合成 西曲瑞克前体肽I-氨基树脂为： Fmoc-D-Nal-D-Cpa-D-Pal-Ser-Tyr-D-Cit-Leu-Arg-Pro-D-Ala-氨基树脂 本实施例使用的保护氨基酸从树脂起算第1~10个氨基酸相对应的保护氨基酸 及分子量如下表所示：【主权项】1. ，其特征在于包括以下步骤：采用固相合 成法，起始载体选用Rink Amide-AM Resin，以HBTU/DIEA为缩合试剂和以Fmoc-保护氨基 酸为缩合原料，依次缩合西曲瑞克氨基酸序列中相对应的氨基酸，经活化剂和缩合剂的缩 合反应以及20% Pip/DMF脱保护剂的脱保护反应，得到西曲瑞克中间体肽I-氨基树脂，之 后再利用脱保护剂脱掉D-Nal保护基，进行N端乙酰化封头反应，以此得到西曲瑞克中间 体肽II-氨基树脂，然后经过切割沉降反应，最终得到了西曲瑞克粗肽III，产品经微波、纯 化、醋酸转盐技术以及冻干得到醋酸西曲瑞克IV。2. 根据权利要求1所述的制备醋酸西曲瑞克的方法，其特征在于所述的起始氨基树脂 为 Rink Amide-AM Resin，取代度为 0.97mmol/g。3. 根据权利要求1所述的制备醋酸西曲瑞克的方法，其特征在于缩合反应过程中以 HBTU/DIEA为活化剂和缩合剂，缩合反应时间为20min ;所述脱保护剂为20% Pip/DMF溶 液，洗脱时间为15min。4. 根据权利要求1所述的制备醋酸西曲瑞克的方法，其特征在于固相合成法 依次缩合的 Fmoc-保护氨基酸为：Fmoc-Pro_0H、Fmoc-Arg (Pbf)-OH、Fmoc-Leu-OH、 Fmoc-D-Cit-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-〇H、Fmoc-Ser (tBu)-OH、Fmoc-D-Ala (3-pyridyl)-OH、 Fmoc-D-Phe(4-Cl)-OH、Fmoc-D-2-Nal-OH，所述缩合反应中氨基酸投料量为I. 5倍所投树 脂摩尔数，缩合反应温度为25°C。5. 根据权利要求1所述的制备醋酸西曲瑞克的方法，其特征在于乙酰化反应的乙酰化 试剂是体积比为醋酐：DIEA : DMF=I : 1 : 4的混合液，乙酰化反应时间为20min。6. 根据权利要求1所述的制备醋酸西曲瑞克的方法，其特征在于切割沉降反应的切割 试剂100mL配方为：88ml TFA+5ml茴香硫醚+5ml水+2ml EDT，切割反应温度为20°C，并 用-20°C低温预冷的无水乙醚进行多肽粗品的沉降。7.本文档来自技高网...
【技术保护点】
特异性微波合成制备醋酸西曲瑞克的方法，其特征在于包括以下步骤：采用固相合成法，起始载体选用Rink Amide‑AM Resin，以HBTU/DIEA为缩合试剂和以Fmoc‑保护氨基酸为缩合原料，依次缩合西曲瑞克氨基酸序列中相对应的氨基酸，经活化剂和缩合剂的缩合反应以及20％Pip/DMF脱保护剂的脱保护反应，得到西曲瑞克中间体肽I‑氨基树脂，之后再利用脱保护剂脱掉D‑Nal保护基，进行N端乙酰化封头反应，以此得到西曲瑞克中间体肽II‑氨基树脂，然后经过切割沉降反应，最终得到了西曲瑞克粗肽III，产品经微波、纯化、醋酸转盐技术以及冻干得到醋酸西曲瑞克Ⅳ。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：陈为光，孙良玉，张旭光，
申请(专利权)人：合肥国肽生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽;34
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