一种索玛鲁肽的固相合成方法技术

本发明专利技术公开一种索玛鲁肽的固相合成方法，该方法包括以下步骤：以2‑Cl‑Resin为起始树脂载体，通过固相合成法依次连接索玛鲁肽序列中相对应的氨基酸，其中赖氨酸以Dde‑Lys(Fmoc)‑OH为原料，链接侧链原料后再脱除赖氨酸的Dde保护基，进行肽链的连续缩合反应，反应过程中采用特异性微波技术处理，得到索玛鲁肽‑2‑Cl‑Resin；将索玛鲁肽‑2‑Cl‑Resin进行切割沉降反应，冻干，得到索玛鲁肽粗肽。本发明专利技术采用Fmoc固相合成法，以2‑Cl‑Resin为固相载体，以DIC/HOBt为缩合剂，对赖氨酸原料进行了改造，大大简化了工艺流程，缩合反应中采用特异性微波合成技术，提高了缩合效率；本发明专利技术大大缩短了反应时间，提高了产品的收率，具有可观的经济适用价值和广泛的应用前景。

A cable Maru peptide solid phase synthesis method

The invention discloses a cable Maru peptide solid phase synthesis method, the method comprises the following steps: 2 Cl Resin as the starting resin carrier, sequentially connected with the corresponding amino acid sequence of Soma Lou by solid phase synthesis method, the lysine to Dde Lys (Fmoc) OH as raw material, the side chain link the raw material after removal of lysine Dde protected amino acid, continuous condensation reactions of the polypeptide chain, specific treatment using microwave technology in the reaction process, get 2 Cl peptide Maru Resin; Soma Lou 2 Cl Resin cutting settlement reaction, freeze dried, get Maru crude peptide peptide. The invention adopts Fmoc solid-phase synthesis method, with 2 Cl Resin as solid carrier, DIC/HOBt as condensation agent of lysine raw material was modified, greatly simplifies the process, using specific microwave synthesis technology in condensation reaction, improve the condensation efficiency; the invention greatly shortens the reaction time, improve the the yield of the product, and has considerable economic value and wide application prospect.

【技术实现步骤摘要】
一种索玛鲁肽的固相合成方法
本专利技术属于多肽药物合成的
，特别涉及一种索玛鲁肽的固相合成方法。
技术介绍
中文名称：索玛鲁肽英文名称：Sermaglutide序列：His-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys(Octadecanedioic-Glu-PEG2-PEG2)-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Arg-Gly-Arg-Gly-OH分子式：C187H291N45O59分子量：4113.64索玛鲁肽(Sermaglutide)一种新的长效胰高血糖素样肽-1(GLP-1)类似物，每周皮下注射一次，可使2型糖尿病患者血糖水平大幅改善，并且低血糖风险较低。同时，索玛鲁肽还能够通过降低食欲和减少食物摄入量，诱导减肥。与利拉鲁肽相比，索玛鲁肽的脂肪连更长，疏水性强，但是索玛鲁肽经过短链的PEG修饰，亲水性大大增强。PEG修饰后不但可以与白蛋白紧密结合，掩盖DPP-4酶水解位点，还能降低肾排泄，可延长生物半衰期，达到长循环的效果。索马鲁肽与艾塞那肽相比，提供了更好的血糖控制及体重减轻。索玛鲁肽具有降低血糖、减轻体重、促进胰岛细胞再生以及心血管系统保护等多种效应，临床应用前景广阔。现有的索玛鲁肽合成方法多为固液合成法，CN201410573312.1的合成方法，合成周期长，生产成本高，不利于索玛鲁肽的大规模生产。本专利技术提供一种合成索玛鲁肽的优化工艺以造福于人类健康。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种索玛鲁肽的固相合成方法，该合成方法反应条件温和、反应效率高、成本低、具有生产索玛鲁肽粗肽产品的广泛应用前景，以用于大规模生产索玛鲁肽。本专利技术的目的可以通过以下技术方案实现：一种索玛鲁肽的固相合成方法，包括如下步骤：(1)以Dde-Lys(Fmoc)-OH为原料，脱除赖氨酸的Fmoc保护基，然后依次偶联2-(2-(2-氨乙氧基)乙氧基)乙酸、2-(2-(2-氨乙氧基)乙氧基)乙酸、Glu和十八烷二酸，进行赖氨酸的改造缩合反应，得到如下肽链：Dde-K(Octadecanedioic-Glu-PEG2-PEG2)EFIAWLVRGRG-2-Cl-Resin(2)以2-Cl-Resin为起始树脂载体，通过固相合成法依次连接索玛鲁肽序列中相对应的氨基酸，并采用特异性微波技术反应，得到索玛鲁肽-2-Cl-Resin如下：H-Aib-EGTFTSDVSSYLEGQAAK(Octadecanedioic-Glu-PEG2-PEG2)EFIAWLVRGRG-2-Cl-Resin(3)进行切割沉降反应，冻干，得到索玛鲁肽粗肽如下：H-Aib-EGTFTSDVSSYLEGQAAK(Octadecanedioic-Glu-PEG2-PEG2)EFIAWLVRGRG上述固相合成方法中，步骤(1)所述赖氨酸的改造缩合反应指的是：脱除赖氨酸的侧链保护基Fmoc，通过固相合成法，在赖氨酸侧链依次偶联2-(2-(2-氨乙氧基)乙氧基)乙酸、2-(2-(2-氨乙氧基)乙氧基)乙酸、Glu和十八烷二酸；然后脱除赖氨酸的Dde保护基，Dde的脱除试剂为水合肼：DMF＝1:15体积比的混合溶液，得到改造后的赖氨酸肽链。步骤(2)所述氯树脂优选为2-Cl(Trt)-ClResin，反应中以DIC/HOBt为缩合剂和活化试剂，以20％Pip/DMF溶液为脱保护试剂，所述特异性微波技术指在氨基酸缩合反应15min后，将索玛鲁肽-2-ClResin置于微波化学反应器中微波反应20s，得到索玛鲁肽-2-Cl-Resin。步骤(3)所述切割沉降反应，切割试剂为TFA：茴香硫醚：水：EDT：苯酚＝35：2：2：1：2体积比，切割液体积为反应器容积的1/2，树脂切割两次，将切割液分别吹入到冰乙醚中，离心沉淀去上清，重复操作3次，得到索玛鲁肽粗肽产品。本专利技术的有益效果：本专利技术采用Fmoc固相合成法，以2-ClResin为固相载体，以DIC/HOBt为缩合剂，对赖氨酸原料进行了改造，大大简化了工艺流程，缩合反应中采用特异性微波合成技术，提高了缩合效率；本专利技术大大缩短了反应时间，提高了产品的收率，具有可观的经济适用价值和广泛的应用前景。具体实施方式通过下述实施例将有助于理解本专利技术，但不能限制本专利技术的内容。对于本专利技术所属
的普通技术人员来说，在不脱离本专利技术构思的前提下，还可以做出若干简单替换或推演，都视为属于本专利技术的保护范围。一种索玛鲁肽的固相合成方法，采用固相合成法，起始载体选用2-Cl-Resin为载体，经活化剂和缩合剂的缩合反应，并采用特异性微波技术反应，以保护氨基酸为缩合原料，依次缩合索玛鲁肽氨基酸序列中相对应的氨基酸，其中赖氨酸采用Dde-Lys(Fmoc)-OH，脱除赖氨酸侧链保护基Fmoc，进行原料的改造，然后通过固相合成法缩合到肽链上；进行切割、沉降反应，冻干得到索玛鲁肽产品。实施例一赖氨酸原料的改造(1)侧链氨基酸的连接加入1/3-1/2反应器体积的20％哌啶/DMF脱保护溶液到抽干的反应器中，置于30r/min的脱色摇床上摇晃反应20min，脱除赖氨酸的Fmoc侧链保护基，按固相氨基酸的缩合方法，在赖氨酸侧链依次偶联2-(2-(2-氨乙氧基)乙氧基)乙酸、2-(2-(2-氨乙氧基)乙氧基)乙酸、Glu和十八烷二酸，缩合成功后用DMF洗5次，抽干。(2)脱除Dde保护基按照水合肼：DMF＝1:15配置脱除溶液，每次用三倍树脂体积的混合溶液洗脱，震荡反应5min后用DMF洗涤3次，第3次水合肼溶液脱Dde后，DMF洗涤5次，得到改造后的赖氨酸肽链。实施例二索玛鲁肽-2-Cl-Resin的合成1.2-Cl-Resin的溶胀称量取代度为0.64mmol/g的2-Cl-Resin1g，从开口端加入至多肽合成反应器中，取DCM试剂加入至反应器中，使树脂完全浸没在DCM溶剂中，与溶剂充分接触，溶胀0.5h。2.索玛鲁肽-2-Cl-Resin的合成索玛鲁肽-2-Cl-Resin为：H-Aib-EGTFTSDVSSYLEGQAAK(Octadecanedioic-Glu-PEG2-PEG2)EFIAWLVRGRG-2-Cl-Resin本实施例使用的保护氨基酸从树脂起算第1-31个氨基酸相对应的保护氨基酸及分子量如下表所示：本专利技术中一些常用的缩写具有以下含义：Fmoc：芴甲氧羰基DMF：N,N-二甲基甲酰胺DCM：二氯甲烷Pbf：2,2,4,6,7-五甲基二氢苯并呋喃-5-磺酰Pip：六氢吡啶TFA：三氟醋酸tBu：叔丁基DIC：N,N-二异丙基碳化二亚胺DIEA：N,N-二异丙基乙胺HOBt：1-羟基苯并三唑(1)Fmoc-Gly-2-Cl-Resin的合成称取120mgFmoc-Gly-OH和130mgHOBt放于10ml离心管中，加3mlDCM将其溶解，再用滴管向溶液中加DIEA活化20s，混合均匀。最后将混合液加到抽干的反应器中反应1h。(2)Fmoc-Gly-2-Cl-Resin的封头反应配制甲醇：DIEA＝1:1(体积比)的混合液2ml，将其加入到抽干的反应器中，置于20-30r/min的摇床上摇20min本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种索玛鲁肽的固相合成方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)以Dde‑Lys(Fmoc)‑OH为原料进行赖氨酸的改造缩合反应，脱除赖氨酸的Fmoc保护基，然后依次偶联2‑(2‑(2‑氨乙氧基)乙氧基)乙酸、2‑(2‑(2‑氨乙氧基)乙氧基)乙酸、Glu和十八烷二酸，进行赖氨酸的改造缩合反应；(2)以2‑Cl‑Resin为起始树脂载体，通过固相合成法依次连接索玛鲁肽序列中相对应的氨基酸，以及改造的赖氨酸原料，并采用特异性微波技术反应，得到索玛鲁肽‑2‑Cl‑Resin；(3)将索玛鲁肽‑2‑Cl‑Resin进行切割沉降反应，冻干，得到索玛鲁肽粗肽。

【技术特征摘要】
1.一种索玛鲁肽的固相合成方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)以Dde-Lys(Fmoc)-OH为原料进行赖氨酸的改造缩合反应，脱除赖氨酸的Fmoc保护基，然后依次偶联2-(2-(2-氨乙氧基)乙氧基)乙酸、2-(2-(2-氨乙氧基)乙氧基)乙酸、Glu和十八烷二酸，进行赖氨酸的改造缩合反应；(2)以2-Cl-Resin为起始树脂载体，通过固相合成法依次连接索玛鲁肽序列中相对应的氨基酸，以及改造的赖氨酸原料，并采用特异性微波技术反应，得到索玛鲁肽-2-Cl-Resin；(3)将索玛鲁肽-2-Cl-Resin进行切割沉降反应，冻干，得到索玛鲁肽粗肽。2.根据权利要求1所述的一种索玛鲁肽的固相合成方法，其特征在于，步骤(1)所述赖氨酸的改造缩合反应具体为：脱除赖氨酸的侧链保护基Fmoc，通过固相合成法，在赖氨酸侧链依次偶联2-(2-(2-氨乙氧...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈为光，孙良玉，张旭光，郑范娜，陈御红，
申请(专利权)人：合肥国肽生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽,34