包含聚合物和GLP-2衍生物的缀合物制造技术

本发明专利技术涉及包含GLP-2衍生物和聚合物的缀合物，其中所述GLP-2衍生物相比于野生型GLP-2被修饰成在末端添加了1至5个额外的氨基酸，其中至少有一个半胱氨酸。本发明专利技术还涉及上述缀合物用于制备药物的用途。

Conjugates comprising polymers and GLP-2 derivatives

The present invention relates to conjugates containing GLP-2 derivatives and polymers, wherein the derivatives of GLP-2 compared to the wild type GLP-2 was modified to add 1 to 5 additional amino acids at the end, at least one cysteine. The invention also relates to the use of the conjugates for the preparation of a medicament.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及药物领域。特别地，本专利技术涉及包含聚合物和生物活性分子(例如GLP-12衍生物受体激动剂)的缀合物，更特别地包含二价或更多价聚合物和两个或更多个生物活性分子的缀合物。本专利技术还涉及所述缀合物用于治疗疾病和/或减肥的用途。
技术介绍
胰高血糖素样肽-2(glucagon-likepeptide-2，GLP-2)是胰高血糖素原基因转录、翻译后处理加工的33个氨基酸的单链多肽，分子量为3766.2Da，与胰高血糖素之间有50％的氨基酸序列同源性。GLP-2在体内容易被二酰肽酶IV水解，失去生物学活性。GLP-2(1-33)在人体内半衰期为7分钟，而[Gly2]GLP-2(即，第二位氨基酸被替换为甘氨酸的GLP-2)在人体内的半衰期为1.3-2小时。GLP-2作为一种肠上皮特异性生长因子，能促进正常肠黏膜的生长及损伤肠上皮的修复。GLP-2通过作用于GLP-2受体(GLP-2R)来发挥生物学作用。GLP-2R在肠道的广泛分布(肠上皮细胞、肠内在神经元、肠内分泌细胞、肠黏膜下的肌纤维母细胞)，GLP-2可能通过直接、间接等多条途径发挥生物学作用。GLP-2、GLP-2衍生物或GLP-2类似物能刺激肠黏膜的生长及损伤后的再生修复，还可以抑制胃酸的分泌和胃的运动、刺激肠的营养转运及肠道消化酶的活性，从而提高肠道的屏障功能、刺激肠黏膜的血液循环、提高营养的利用率。GLP-2对小肠和大肠上皮细胞营养作用是通过刺激隐窝细胞增殖和延缓细胞的凋亡、调节肠道葡萄糖转运受体的活性、减少胃排空和胃酸分泌来实现。GLP-2通过对消化道施加影响来调控营养物质的消化吸收与利用,同时传导反馈信号到摄食中枢进而调控动物的摄食活动。给断奶仔猪皮下注射人GLP-2，7天后发现抑制仔猪摄食达30％。这可能与GLP-2减缓胃排空速度、刺激胰高血糖素分泌同时抑制胃酸分泌有关。给大鼠注射人GLP-2(hGLP-2)及猪GLP-2(pGLP-2)都能使小肠的重量和长度增加，同时近端回肠的横截面积增加。GLP-2可抑制全肠外营养造成的肠道萎缩。GLP-2处理后，隐窝变深，上皮细胞凋亡减少，小肠蛋白含量及绒毛高度均增加。与其他生长因子如表皮生长因子、转化生长因子、胰岛素样生长因子和生长激素相比，小鼠皮下注射GLP-2对肠道重量增加的效果最好，尤其是耐受DPP-IV的GLP-2形式。目前市场上已有一个GLP-2衍生物产品-替度鲁肽(Teduglutide),由NPSpharmaceuticals公司开发的用于治疗因严重肠部疾病或小肠大部切除导致营养成分不能吸收的短肠综合征，2012年在EMA和FDA批准上市。替度鲁肽是由第二位丙氨酸被甘氨酸取代的抗DPP-IV的GLP-2衍生肽，其延长了GLP-2在体内的半衰期。替度鲁肽在人体内的半衰期可达1.3-2小时，但由于多肽分子量不足4KDa，还需每天给药一次。目前还有一个由Zealand公司开发的GLP-2衍生物ZP1846，目前正在临床研究在中，临床试验给药方案是每天皮下注射一次。尽管本领域中已经对GLP-2进行了如上所述的改进，但是仍然需要半衰期更长、稳定性更高、活性更强的GLP-2衍生物，以满足临床中对于GLP-2类药物的需求。
技术实现思路
在一个方面，本专利技术提供了包含GLP-2衍生物和聚合物(例如亲水性聚合物)的缀合物，其中所述GLP-2衍生物相比于野生型GLP-2被修饰成在末端(N端或C端)添加了1至5个(例如1、2、3、4、5个)额外的氨基酸，其中至少包含一个半胱氨酸。本专利技术还提供了包含GLP-2衍生物和聚合物的缀合物，其中所述GLP-2衍生物相比于野生型GLP-2在末端(N端或C端)包含1至5个(例如1、2、3、4、5个)额外的氨基酸，其中至少包含一个半胱氨酸。本专利技术还提供了GLP-2衍生物，其与聚合物相缀合，其中所述GLP-2衍生物相比于野生型GLP-2被修饰成在末端(N端或C端)添加了1至5个(例如1、2、3、4、5个)额外的氨基酸，其中至少包含一个半胱氨酸。优选地，所述GLP-2衍生物在所添加的半胱氨酸残基处与所述聚合物相缀合。特别地，本专利技术的缀合物可用于刺激肠黏膜生长、促使肠黏膜损伤后修复、抑制肠道萎缩和/或治疗短肠综合征。在一些实施方案中，在本专利技术的缀合物中，GLP-2衍生物与聚合物直接缀合。在一些实施方案中，在本专利技术的缀合物中，GLP-2衍生物与聚合物通过共价键或者通过连接基相缀合。在另一个方面，本专利技术提供了具有通式Y-(Zi-Xi)n的缀合物，其中各个Xi表示相同或不同的GLP-2衍生物，各个Zi表示相同或不同的连接基，Y表示聚合物，n是大于或等于1的整数(例如1、2、3、4、5)，i是1至n的整数。优选地，n小于5、4、或3。在另一个方面，本专利技术提供了制备本专利技术缀合物的方法，其包括使本专利技术的GLP-2衍生物与经活化的聚合物相接触。在又一个方面，本专利技术提供了药物组合物，其包含药物有效量的本专利技术的缀合物，以及任选地药学上可接受的载体。特别地，本专利技术的药物组合物可用于刺激肠黏膜生长、促使肠黏膜损伤后修复、抑制肠道萎缩和/或治疗短肠综合征。在又一个方面，本专利技术提供了试剂盒，其包含本专利技术的缀合物和/或组合物，以及使用说明书。特别地，本专利技术的试剂盒可用于刺激肠黏膜生长、促使肠黏膜损伤后修复、抑制肠道萎缩和/或治疗短肠综合征。在又一个方面，本专利技术提供了一种刺激肠黏膜生长、促使肠黏膜损伤后修复、抑制肠道萎缩和/或治疗短肠综合征的方法，其包括向有此需要的对象施用有效量的本专利技术的缀合物和/或组合物。在又一个方面，本专利技术提供了本专利技术的缀合物和/或组合物在制备用于刺激肠黏膜生长、促使肠黏膜损伤后修复、抑制肠道萎缩和/或治疗短肠综合征的药物中的用途。在一些实施方案中，本专利技术缀合物中的所述聚合物选自：多糖、多肽、聚亚烷基二醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯、聚恶唑啉、聚乙烯醇、聚丙烯酰胺、聚甲基丙烯酰胺、马来酸丙烯酸共聚物、聚酯、聚缩醛、聚原酸酯、聚碳酸酯、聚亚氨碳酸酯、聚酰胺、乙烯基醚马来酸酐共聚物、苯乙烯马来酸酐共聚物以及以上聚合物的共聚物，优选地所述聚合物选自聚亚烷基二醇，更优选地所述聚合物是聚乙二醇(PEG)。在一些实施方案中，所述GLP-2衍生物在对应于野生型GLP-2之第2位氨基酸的位置被修饰，其中所述修饰为抗DPP-IV酶的氨基酸替换，例如Ala替换为Gly或Val。在一些实施方案中，所述野生型GLP-2的序列如SEQIDNO:1所示。在一些实施方案中，所述GLP-2衍生物的序列如SEQIDNO:2所示。在一些实施方案中，本专利技术缀合物中的所述聚合物(例如亲水性聚合物)的分子量为2kDa至50kDa，优选20kDa至40kDa，更优选21kDa至39kDa、23kDa至37kDa或25kDa至35kDa，还优选26.5kDa至33.5kDa，还优选26.6kDa至33.4kDa，还优选27kDa至33kDa，还优选27.5kDa至32.5kDa，还优选27.6kDa至32.4kDa，还优选28kDa至32kDa，更优选28.5kDa至31.5kDa，更优选29kDa至31kDa，更优选29.5kDa至30.5kDa，例如2本文档来自技高网...

【技术保护点】
包含GLP‑2衍生物和亲水性聚合物的缀合物，其中所述GLP‑2衍生物相比于野生型GLP‑2被修饰成在末端添加了1至5个额外的氨基酸，所述额外的氨基酸中至少有一个半胱氨酸，并且所述亲水性聚合物在所述半胱氨酸处与所述GLP‑2衍生物相缀合，其中所述亲水性聚合物是聚乙二醇(PEG)，并且所述PEG分子量为20kDa至40kDa。

【技术特征摘要】
1.包含GLP-2衍生物和亲水性聚合物的缀合物，其中所述GLP-2衍生物相比于野生型GLP-2被修饰成在末端添加了1至5个额外的氨基酸，所述额外的氨基酸中至少有一个半胱氨酸，并且所述亲水性聚合物在所述半胱氨酸处与所述GLP-2衍生物相缀合，其中所述亲水性聚合物是聚乙二醇(PEG)，并且所述PEG分子量为20kDa至40kDa。2.根据权利要求1的缀合物，其中所述GLP-2衍生物相比于野生型GLP-2被修饰成在末端添加了1个半胱氨酸。3.根据权利要求1或2的缀合物，其中所述GLP-2衍生物在对应于野生型GLP-2之第2位氨基酸的位置被修饰，其中所述修饰为抗DPP-IV酶的氨基酸替换，例如Ala替换为Gly或Val。4.根据权利要求1至3中任一项的缀合物，其中所述野生型GLP-2的序列如SEQIDNO:1所示。5.根据权利要求1至4中任一项的缀合物，其中所述GLP-2衍生物的序列如SEQIDNO:2所示。6.根据权利要求1至5中任一项的缀合物，其中所述聚合物的分子量为21kDa至39kDa、23kDa至37kDa、25kDa至35kDa或26.5kDa至33.5kDa，优选26.6kDa至33.4kDa，优选27kDa至33kDa，还优选27.5kDa至32.5kDa，还优选27.6kDa至32.4kDa，还优选28kDa至32kDa，更优选28.5kDa至31.5kDa，更优选29kDa至31kDa，更优选29.5kDa至30.5kDa。7.根据权利要求1至6中任一项的缀合物，其中所述GLP-2衍生物和所述亲水性...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐敏，
申请(专利权)人：苏州派格生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32