一种固相多肽合成抗炎十肽的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种固相多肽合成抗炎十肽的制备方法，包括如下步骤：以RinkAmideMBHA树脂起始原料，按照固相合成的方法依次连接具有保护基团的D-氨基酸，获得保护十肽树脂，其间依次脱去Fmoc-保护基团，TFA切肽后，获得粗品，粗品经C18柱分离纯化，冻干后，制得抗炎十肽精品。本发明专利技术的方法，工艺稳定，原辅材料来源方便，生产周期短，收率高，质量稳定，生产成本低，接肽收率高，避免使用氟化氢等剧毒试剂，三废污染少。每步接肽收率均在98.5%以上；切肽后收率为：98.3%，总收率为：47.9%，HPLC测定产品纯度为：99.65%。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及抗炎十肽的制备方法，尤其涉及固相多肽合成抗炎十肽的制备方法。
技术介绍
抗炎十肽，英文名：Delmitide，分子式：C59H1Q5N 170n ;CAS 登记号：287096-87-1 ;分 子量：1227. 8 ;碳、氢、氮比例：C :57· 68%，Η :8· 61%，N :19· 38%。氨基酸序列：D-Arg-D-Nle-D~N1e-D-Nle-D-Arg-D-Nle-D-Nle-D-Nle~Gly-D~Tyr-NH 2 ； 结构式：

【技术保护点】
固相多肽合成抗炎十肽的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：以Rink Amide MBHA树脂为起始原料，按照固相合成的方法依次与具有保护基团的氨基酸Fmoc‑D‑Tyr(tBu)‑OH、Fmoc‑Gly‑OH、Fmoc‑D‑Nle‑OH、Fmoc‑D‑Nle‑OH、Fmoc‑D‑Nle‑OH Fmoc‑D‑Arg(Pbf)‑OH、Fmoc‑D‑Nle‑OH、Fmoc‑D‑Nle‑OH、Fmoc‑D‑Nle‑OH、Boc‑D‑Arg‑OH进行缩合反应，获得保护十肽树脂，其间依次脱去Fmoc‑保护基团，同步进行脱侧链保护基团；切肽，获得抗炎十肽粗品；纯化后得抗炎十肽。

【技术特征摘要】
1. 固相多肽合成抗炎十肽的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：以Rink Amide MBHA树脂为起始原料，按照固相合成的方法依次与具有保护基团的氨基酸 Fmoc-D-Tyr(tBu)-〇H、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-D-Nle-OH、Fmoc-D-Nle-OH、Fmoc-D-Nle-OH Fmoc-D-Arg (Pbf) -〇H、Fmoc-D-Nle-〇H、Fmoc-D-Nle-〇H、Fmoc-D-Nle-〇H、Boc-D-Arg-〇H 进行 缩合反应，获得保护十肽树脂，其间依次脱去Fmoc-保护基团，同步进行脱侧链保护基团； 切肽，获得抗炎十肽粗品；纯化后得抗炎十肽。2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述按照固相合成的方法，获得保护十肽 树脂，包括如下步骤： (1) 制备 Fmoc-D-Tyr (tBu)-树脂： 取Rink Amide MBHA树脂用DMF浸泡，使树脂溶胀，抽干，加入脱帽试剂，反应，抽干， 分别用DMF和甲醇洗涤，抽干，然后加入溶解于接肽试剂的Fmoc-D-Tyr (tBu) -OH、HBTU和 HOAt的混合物，反应，抽干，分别用DMF和甲醇洗涤，抽干，再加入醋酐和DMF，反应，获得 Fmoc-D-Tyr (tBu)-树脂； 混合物中： 溶剂DMF对Rink Amide MBHA树脂重量的体积浓度为8?20ml/g ; HBTU的摩尔数为树脂的2?4倍； HOAt的摩尔数为树脂的2~4倍； Fmoc-D-Tyr (tBu)-0H 的摩尔数为 Rink Amide MBHA 树脂的 2?4 倍； 脱帽试剂对Rink Amide MBHA树脂重量的体积浓度为5?20ml/g ; (2) 制备 Fmoc-Gly-D-Tyr (tBu)-树脂： 在步骤（1)的Fmoc-D-Tyr (tBu)-树脂中，加入脱帽试剂，反应，抽干，分别用DMF和甲 醇洗涤，抽干，然后加入溶解于接肽试剂的Fmoc-Gly-OH、HBTU、H0AT的混合物，反应，抽干， 分别用DMF和甲醇洗漆，抽干，获得Fmoc-Gly-D-Tyr (tBu)-树脂； 混合物中： Fmoc-Gly-OH的摩尔数为Rink Amide MBHA树脂的2?4倍； 其余操作以及工艺条件同步骤（1); (3) 制备 Fmoc-D-Nle-Gly-D-Tyr (tBu) -树脂： 在步骤（2)的树脂中，加入脱帽试剂，反应，抽干，分别用DMF和甲醇洗涤，抽干，加入用 接肽试剂溶解的Fmoc-D-Nle-OH、HBTU和H0AT的混合物，反应，抽干，分别用DMF和甲醇洗 漆，抽干，获得 Fmoc-D-Nle-Gly-D-Tyr (tBu)-树脂； 混合物中： Fmoc-D-Nle-OH的摩尔数为Rink Amide MBHA树脂的2?4倍； 其余操作以及工艺条件同步骤（1); (4) 制备 Fmoc-D-Nle-D-Nle-Gly-D-Tyr (tBu) -树脂 在步骤（3)的树脂中，加入脱帽试剂，反应钟，抽干，分别用DMF和甲醇洗涤，抽干，加入 用接肽试剂溶解的Fmoc-D-Nle-OH、HBTU和H0AT的混合物，反应，抽干，分别用DMF和甲醇 洗涤，抽干，获得 Fmoc-D-Nle-D-Nle-Gly-D-Tyr (tBu)-树脂； 混合物中： Fmoc-D-Nle-OH的摩尔数为Rink Amide MBHA树脂的2?4倍。3.其余操作以及工艺条件同步骤（1); (5) 制备 Fmoc-D-Nle-D-Nle-D-Nle-Gly-D-Tyr (tBu)_ 树脂： 在步骤（4)的树脂中，加入脱帽试剂，反应，抽干，分别用DMF和甲醇洗涤，抽干，加入用 接肽试剂溶解的Fmoc-D-Nle-OH、HBTU和H0AT的混合物，反应，抽干，分别用DMF和甲醇洗 涤，抽干，获得 Fmoc-D-Nle-D-Nle-D-Nle-Gly-D-Tyr (tBu)-树脂； 混合物中： Fmoc-D-Nle-OH的摩尔数为Rink Amide MBHA树脂的2?4倍； 其余操作以及工艺条件同步骤（1); (6) 制备 Fmoc-D-Arg(Pbf)-D-Nle-D-Nle-D-Nle-Gly-D-Tyr(tBu)_ 树脂： 在步骤（5)的树脂中，加入脱帽试剂，反应，抽干，分别用DMF和甲醇洗涤，抽干，加入用 接肽试剂溶解的Fmoc-D-Arg (Pbf) -〇H、HBTU和H0AT的混合物，反应，抽干，分别用DMF和甲 醇洗漆，抽干，获得 Fmoc- D_Arg (Pbf) -D-Nle-D-Nle-D-Nle-Gly-D-Tyr (tBu)-树脂； 混合物中： Fmoc-D-Arg (Pbf)-OH 的摩尔数为 Rink Amide MBHA 树脂的 2?4 倍； 其余操作以及工艺条件同步骤（1...

【专利技术属性】
技术研发人员：王文琪，刘湘艳，崔颀，周逸明，
申请(专利权)人：上海苏豪逸明制药有限公司，周逸明，崔颀，
类型：发明
国别省市：上海;31