一种贻贝活性肽的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种贻贝活性肽的制备方法，属于海洋生物技术领域。本发明专利技术在前期对原料进行复合预处理，然后复合使用两种蛋白酶生产贻贝多肽，制成贻贝多肽产品。所得到的产品中氨基氮含量为15g/100mL左右，便于人体吸收，大大提高了原料的吸收利用率；另外，所得贻贝多肽水解液的抗氧化性能和抗细胞增殖能力都很好，细胞增殖抑制指数IR为70％左右，对羟自由基清除率为38％左右，可见本发明专利技术方法极大化地保留了贻贝的活性成分。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种贻贝活性肽的制备方法，属于海洋生物

技术介绍
贻贝是一种高蛋白、低脂肪的食物。据分析，每100g干贻贝肉含粗蛋白高达52g，碳水化合物13g，脂肪7g。此外，还含有多种维生素及人体必需的钙、磷、铁、锰、锌、硒、碘等多种微量元素。具有抗疲劳、降血压、抗炎、增强免疫力等功效，被誉为“海中鸡蛋”。贻贝国内养殖产量巨大，新鲜贻贝肉水分含量高，不易保存。故常制成“淡菜”保存，即将贻贝煮熟、去壳后晒干，这种方法比较原始，而且在晾晒过程中贻贝肉易发生质变，一般做普通食品被消费者食用。将新鲜贻贝去壳洗净后经过冷冻干燥、粉碎制成贻贝冻干粉也是目前贻贝后加工的一个方向。因其使用的唯一原料是新鲜贻贝肉，在产品生产过程中未添加其他物质，保存了原有物质和抗炎成分，是一种比较优质的产品，但是冷冻干燥对设备投入要求高，且干燥成本较高，不适于大规模生产。另外，贻贝冻干粉为不溶解状态，难以制成冲剂等。也就是说上述冷冻干燥实质是一种原料的粗加工，虽然较直接晾晒干燥质量可控，但是并不能有效改变服用时营养成分的吸收效果，实质是大大增加了原料的附加成本。此外，可采用植物萃取的方式进行贻贝成分的提取，制成贻贝提取物。将新鲜贻贝洗净后，采用溶解提取水溶性成分或脂溶性物质，然后辅以淀粉或糊精等包埋吸附制成产品。鉴于动植物活性成分存在的差异，该方法对营养活性成分提取率低，原料利用率较低。
技术实现思路
本专利技术提供了一种贻贝活性肽的制备方法，主要包括以下步骤：(1)前处理：选取新鲜贻贝，去除泥沙、壳后洗净沥干，将贻贝肉加入到浓度为0.2mol/L的氢氧化钠溶液中搅拌均匀并浸泡2～3h，捞出清水冲洗2～3遍后沥干，再加入到质量分数为0.2％的维生素C水溶液中搅拌均匀并浸泡20～30min，捞出清水冲洗2～3遍后沥干；贻贝肉与氢氧化钠溶液的质量体积比为1kg：(1～1.5)L，贻贝肉与维生素水溶液的质量体积比为1kg：(1～2)L；(2)匀浆：每kg贻贝肉加0.5L水后，用胶体磨将贻贝磨浆得到贻贝肉浆液；(3)酶解：按质量比1％加入中性蛋白酶在42～45℃条件下酶解处理1～2h；用质量分数10％的氢氧化钠溶液调节pH至8.5～9，按质量比1％加入碱性蛋白酶在45～50℃条件下酶解2～3h；(4)灭酶：酶解结束后，升温灭酶；(5)过滤：加入珍珠岩、硅藻土等助滤剂，板框过滤得到水解液；(6)浓缩：将水解液采用刮板浓缩器浓缩得到质量分数30％的提取液；(7)干燥：将所得提取液喷雾干燥得到贻贝多肽粉。在本专利技术的一种实施方式中，所述中性蛋白酶是20万U/g的酶制剂。在本专利技术的一种实施方式中，所述碱性蛋白酶是20万U/g的酶制剂。在本专利技术的一种实施方式中，还包括包装、检验的步骤。在本专利技术的一种实施方式中，步骤(6)所得提取液还采用分子截留量为10kDa的超滤膜进行过滤。本专利技术在前期对原料进行复合预处理，然后复合使用两种蛋白酶生产贻贝多肽，制成贻贝多肽产品。所得到的产品中氨基氮含量为15g/100mL左右，便于人体吸收，大大提高了原料的吸收利用率；另外，所得贻贝多肽水解液的抗氧化性能和抗细胞增殖能力都很好，细胞增殖抑制指数IR为70％左右，对羟自由基清除率为38％左右，可见本专利技术方法极大化地保留了贻贝的活性成分。本专利技术制得的产品为全水溶性，可制成冲剂等直接服用。在生产过程中添加全为食品级试剂，安全、可靠。产品质量便于把控，有利于大规模工业化生产。具体实施方式甲醛滴定法测定氨基酸含量(ANN)：取步骤(5)得到的20ml水解液置于烧杯中，加水60mL，开动磁力搅拌器，用0.05mol/L氢氧化钠标准液滴定至pH为8.2。加入10mL甲醛溶液混匀，再用0.05mol/L氢氧化钠溶液继续滴定至pH为9.2，记下消耗氢氧化钠标准的毫升数，同时取水80mL做试剂空白试验。按X＝(V1-V2)×C×0.014×100/(5×V)计算氨基氮(ANN)含量，氨基氮含量与水解度成正相关，其中，X为样品中氨基氮的含量(g/100mL)；V1为测定用样品加入甲醛稀释后消耗氢氧化钠标准(mL)；V2为试剂空白试验加入甲醛后消耗氢氧化钠标准溶液的体积(mL)；V为样品液取用量(mL)；C为氢氧化钠标准液的浓度(mol/L)；0.014为氮的毫摩尔质量(g/mmoL)。抗细胞增殖能力的测定：采用MTT法进行检测；配制pH值为7.2的PBS溶液和浓度为200μg/ml的步骤(5)得到的水解液；取对数生长期的前列腺癌细胞DU-145制成悬液，接种至96孔板，每孔200μL，于5％CO2，37℃贴壁4h，然后加入步骤(5)得到的水解液，设3个平行孔，同时设不加药对照组，置5％CO2，37℃培养箱中孵育48h，培养结束加入180μLMTT和20μL PBS继续培养4h，吸取96孔板的液体，加入150μL的DMSO，充分混合，置酶联免疫检测仪在490nm测吸光度，按IR＝[(对照组A值—药物组A值)/对照组A值]×100％计算细胞增殖抑制指数IR。清除羟自由基能力的测定：取0.75mmol/L邻二氮菲1mL装于试管中，依次加入PBS(0.02mol/LpH 7.4)2mL，蒸馏水1mL，完全混匀后，加入0.75mmol/L的硫酸亚铁1mL，质量分数为0.12％的过氧化氢1mL，于37℃水浴反应90min，于536nm处测其吸光度，为Ap；用1mL蒸馏水代替1mL过氧化氢，为Ab；用样品取代1mL蒸馏水，为As。羟自由基清除率按样品对羟自由基清除率＝(As-Ap)/(Ab-Ap)×100％计算。实施例1(1)前处理：选取新鲜贻贝，去除泥沙、壳后洗净沥干，将贻贝肉加入到浓度为0.2mol/L的氢氧化钠溶液中搅拌均匀并浸泡2h，捞出清水冲洗3遍后沥干，再加入到质量分数为0.2％的维生素C水溶液中搅拌均匀并浸泡30min，捞出清水冲洗3遍后沥干；贻贝肉与氢氧化钠溶液的质量体积比为1kg：1L，贻贝肉与维生素水溶液的质量体积比为1kg：2L；(2)匀浆：每kg贻贝肉加0.5L水后，用胶体磨将贻贝磨浆得到贻贝肉浆液；(3)酶解：按质量比1％加入20万U/g的中性蛋白酶在42～45℃条件下酶解处理2h；用质量分数10％的氢氧化钠溶液调节pH至8.5，按质量比1％加入20万U/g的碱性蛋白酶在48℃条件下酶解2h；(4)灭酶：酶解结束后，升温灭酶；(5)过滤：加入珍珠岩、硅藻土等助滤剂，板框过滤得到水解液；(6)浓缩：将水解液采用刮板浓缩器浓缩得到质量分数30％的提取液；(7)干燥：将所得提取液喷雾干燥得到贻贝多肽粉。测得步骤(5)水解液中氨基氮的含量为15.52g/100mL，细胞增殖抑制指数IR为71％，对羟自由基清除率为38％。实施例2(1)前处理：选取新鲜贻贝，去除泥沙、壳后洗净沥干，将贻贝肉加入到浓度为0.2mol/L的氢氧化钠溶液中搅拌均匀并浸泡3h，捞出清水冲洗3遍后沥干，再加入到质量分数为0.2％的维生素C水溶液中搅拌均匀并浸泡20min，捞出清水冲洗3遍后沥干；贻贝肉与氢氧化钠溶液的质量体积比为1kg：1L，贻贝肉与维生素水溶液的质量体积比为1kg：1.5L；(2)匀浆：每kg贻贝肉加0.5L水后，用胶体磨将贻贝磨浆得到贻贝肉浆本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种贻贝活性肽的制备方法，主要包括以下步骤：(1)前处理：选取新鲜贻贝，去除泥沙、壳后洗净沥干，将贻贝肉加入到浓度为0.2mol/L的氢氧化钠溶液中搅拌均匀并浸泡2～3h，捞出清水冲洗2～3遍后沥干，再加入到质量分数为0.2％的维生素C水溶液中搅拌均匀并浸泡20～30min，捞出清水冲洗2～3遍后沥干；贻贝肉与氢氧化钠溶液的质量体积比为1kg：(1～1.5)L，贻贝肉与维生素水溶液的质量体积比为1kg：(1～2)L；(2)匀浆：每kg贻贝肉加0.5L水后，用胶体磨将贻贝磨浆得到贻贝肉浆液；(3)酶解：按质量比1％加入中性蛋白酶在42～45℃条件下酶解处理1～2h；用质量分数10％的氢氧化钠溶液调节pH至8.5～9，按质量比1％加入碱性蛋白酶在45～50℃条件下酶解2～3h；(4)灭酶：酶解结束后，升温灭酶；(5)过滤：加入珍珠岩、硅藻土等助滤剂，板框过滤得到水解液；(6)浓缩：将水解液采用刮板浓缩器浓缩得到质量分数30％的提取液；(7)干燥：将所得提取液喷雾干燥得到贻贝多肽粉。

【技术特征摘要】
1.一种贻贝活性肽的制备方法，主要包括以下步骤：(1)前处理：选取新鲜贻贝，去除泥沙、壳后洗净沥干，将贻贝肉加入到浓度为0.2mol/L的氢氧化钠溶液中搅拌均匀并浸泡2～3h，捞出清水冲洗2～3遍后沥干，再加入到质量分数为0.2％的维生素C水溶液中搅拌均匀并浸泡20～30min，捞出清水冲洗2～3遍后沥干；贻贝肉与氢氧化钠溶液的质量体积比为1kg：(1～1.5)L，贻贝肉与维生素水溶液的质量体积比为1kg：(1～2)L；(2)匀浆：每kg贻贝肉加0.5L水后，用胶体磨将贻贝磨浆得到贻贝肉浆液；(3)酶解：按质量比1％加入中性蛋白酶在42～45℃条件下酶解处理1～2h；用质量分数10％的氢氧化钠溶液调节pH至8.5～9，按质量比1％加入碱性蛋白酶在45～50℃条件下酶解2～3h；(4)灭酶：酶解结束后，升温灭酶；...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴海，尹晓清，
申请(专利权)人：湖北瑞邦生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42