具有内切葡聚糖酶活性的多肽以及对其进行编码的多核苷酸制造技术

具有内切葡聚糖酶活性的多肽，催化结构域以及编码这些多肽或催化结构域的多核苷酸。包括这些多核苷酸的核酸构建体、载体以及宿主细胞连同产生和使用这些多肽或催化结构域的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】对序列表的引用本申请含有计算机可读形式的序列表，将该序列表通过引用结合在此。对生物材料保藏的参考本申请包含对生物材料保藏的参考，该保藏通过引用结合在此。专利
本专利技术涉及具有内切葡聚糖酶活性、催化结构域、和纤维素结合结构域的多肽，以及编码这些多肽、催化结构域、和纤维素结合结构域的多核苷酸。本专利技术还涉及包括这些多核苷酸的核酸构建体、载体、和宿主细胞，以及生产和使用这些多肽、催化结构域和纤维素结合结构域的方法。
技术介绍
纤维素酶或纤维素分解酶是涉及纤维素水解的酶。已知涉及三种主要类型的纤维素酶，即内切葡聚糖酶、纤维二糖水解酶和β-葡糖苷酶。纤维素酶具有一系列工业应用。在纺织工业中，将纤维素酶用于牛仔布整理中，以使用生物石磨工艺在牛仔布上产生时髦的石洗外观。使用生物抛光工艺，将纤维素酶还用于例如清理布衣表面上的绒毛和防止在其表面上形成绒球。WO9629397披露了在工业应用中具有性能的酶制剂(例如洗衣组合物)，用于生物抛光新制造的纺织品、用于为纤维素织物或服装提供磨损外观以及用于处理纸浆。WO2010/076388披露了在低温下具有实质性能的真菌内切葡聚糖酶；将这些内切葡聚糖酶尤其是在纺织工业中，例如在生物整理或生物石磨中用于处理纤维素材料。在本领域中持续需要用于在生物抛光工艺中，尤其是在低温下获得具有良好的磨损效果和/或减少的起球趋势的新的内切葡聚糖酶和方法。本专利技术目标是满足这些需要。专利技术概述本专利技术涉及选自下组的具有内切葡聚糖酶活性的多肽，该组由以下各项组成：(a)一种多肽，与SEQIDNO:2的成熟多肽具有至少99％序列一致性；(b)一种多肽，由在非常高严格条件下与(i)SEQIDNO:1的成熟多肽编码序列、(ii)其cDNA序列、或(iii)(i)或(ii)的全长互补体杂交的多核苷酸编码；(c)一种多肽，由与SEQIDNO:1的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少99％序列一致性的多核苷酸编码；(d)SEQIDNO:2的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个(例如若干个)位置处包括取代、缺失、和/或插入；以及(e)(a)、(b)、(c)或(d)的多肽的片段，该片段具有内切葡聚糖酶活性。本专利技术还涉及包含选自下组的催化结构域的多肽，该组由以下各项组成：(a)催化结构域，其与SEQIDNO:2的氨基酸22至237具有至少99％序列一致性；(b)由多核苷酸编码的催化结构域，该多核苷酸在非常高严格条件下与(i)SEQIDNO:1的核苷酸64至764、(ii)其cDNA序列、或(iii)(i)或(ii)的全长互补体杂交；(c)催化结构域，其由与SEQIDNO:1的核苷酸64至764或其cDNA序列具有至少99％序列一致性的多核苷酸编码；(d)SEQIDNO:2的氨基酸22至237的变体，该变体在一个或多个(例如若干个)位置处包含取代、缺失、和/或插入；以及(e)(a)、(b)、(c)或(d)的催化结构域的片段，该片段具有内切葡聚糖酶活性。本专利技术还涉及一种用选自下组的具有内切葡聚糖酶活性的多肽处理纺织品的方法，该组由以下各项组成：(a)一种多肽，其与SEQIDNO:2的成熟多肽具有至少90％序列一致性；(b)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在高、或非常高严格条件下与(i)SEQIDNO:1的成熟多肽编码序列或(ii)(i)的全长互补链杂交；(c)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQIDNO:1的成熟多肽编码序列具有至少90％序列一致性；(d)SEQIDNO:2的成熟多肽的一种变体，该变体在一个或多个(例如，若干个)位置处包括取代、缺失、和/或插入；以及(e)(a)、(b)、(c)或(d)的多肽的一个片段，该片段具有内切葡聚糖酶活性。本专利技术还涉及编码包括SEQIDNO:2的氨基酸1至21或由其组成的信号肽的一种多核苷酸、编码包括SEQIDNO:2的氨基酸1至63或由其组成的前肽的一种多核苷酸，其每一者被可操作地连接至编码蛋白质的基因；涉及包括这些多核苷酸的核酸构建体、表达载体、以及重组宿主细胞；以及涉及产生蛋白质的方法。定义内切葡聚糖酶：术语“内切葡聚糖酶”意指一种内切-1,4-(1,3；1,4)-β-D-葡聚糖4-葡聚糖水解酶(E.C.3.2.1.4)，其催化纤维素、纤维素衍生物(如羧甲基纤维素和羟乙基纤维素)、地衣多糖中的1,4-β-D-糖苷键和混合β-1,3葡聚糖如谷类β-D-葡聚糖或木葡聚糖以及含有纤维素组分的其他植物材料中的β-1,4键的内切水解。可以通过测量底物粘度的降低或通过还原糖测定所确定的还原性末端的增加来确定内切葡聚糖酶活性(张(Zhang)等人，2006，生物技术进展(BiotechnologyAdvances)24:452-481)。可以根据高斯(Ghose)，1987，纯粹与应用化学(PureandAppl.Chem.)59:257-268的第264页的第VI部分的程序，使用羧甲基纤维素(CMC)作为底物测定内切葡聚糖酶活性。出于本专利技术的目的，根据实例中所述的程序测定内切葡聚糖酶活性。在一个方面中，本专利技术的多肽具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少100％的SEQIDNO:2或SEQIDNO:4的成熟多肽的内切葡聚糖酶活性。等位基因变体：术语“等位基因变体”意指占用同一染色体位点的基因的两个或更多个替代形式中的任一者。等位基因变异由突变天然产生，并且可以导致群体内的多态性。基因突变可以是沉默的(在所编码的多肽中没有改变)或可编码具有改变的氨基酸序列的多肽。多肽的等位基因变体是由基因的等位基因变体编码的多肽。结合结构域：术语“纤维素结合结构域”是指介导酶结合至纤维素底物的非晶区域的酶的区域。纤维素结合结构域(CBD)典型地发现于内切葡聚糖酶的N-末端亦或C-末端末尾。在本专利技术的上下文中，纤维素结合结构域和碳水化合物结合模块可以互换使用。催化结构域：术语“催化结构域”意指酶的含有该酶的催化机构的区域。家族45或家族GH45或CEL45：在此将术语“家族45”或“家族GH45”或“CEL45”定义为根据亨利萨特(Henrissat)B.，1991，基于氨基酸序列相似性的糖基水解酶的分类(Aclassificationofglycosylhydrolasesbasedonamino本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用选自下组的具有内切葡聚糖酶活性的多肽处理纺织品的方法，该组由以下各项组成：(a)多肽，其与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有至少90％序列一致性；(b)由多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在高、或非常高严格条件下与(i)SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列或(ii)(i)的全长互补链杂交；(c)由多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列具有至少90％序列一致性；(d)SEQ ID NO:2的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个(例如，若干个)位置处包括取代、缺失、和/或插入；以及(e)(a)、(b)、(c)或(d)的多肽的片段，该片段具有内切葡聚糖酶活性。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.10.25 CN PCT/CN2013/0859931.一种用选自下组的具有内切葡聚糖酶活性的多肽处理纺织品的方法，该
组由以下各项组成：
(a)多肽，其与SEQIDNO:2的成熟多肽具有至少90％序列一致性；
(b)由多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在高、或非常高严格条件下与(i)
SEQIDNO:1的成熟多肽编码序列或(ii)(i)的全长互补链杂交；
(c)由多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQIDNO:1的成熟多肽编码
序列具有至少90％序列一致性；
(d)SEQIDNO:2的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个(例如，若干
个)位置处包括取代、缺失、和/或插入；以及
(e)(a)、(b)、(c)或(d)的多肽的片段，该片段具有内切葡聚糖酶活性。
2.如权利要求1所述的方法，其中该具有内切葡聚糖酶活性的多肽与SEQ
IDNO:2的成熟多肽具有至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少
95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列一致性。
3.如权利要求1所述的方法，其中该具有内切葡聚糖酶活性的多肽包含
SEQIDNO:2的成熟多肽的10个或9个或8个或7个或6个或5个或4个或
3个或2个或1个氨基酸的取代、缺失和/或插入。
4.如权利要求1-3中任一项所述的方法，其中该具有内切葡聚糖酶活性的
多肽获得自脉孢菌属，特别是四孢脉孢菌或粗糙脉孢菌。
5.如权利要求1-4中任一项所述的多肽，该多肽包括SEQIDNO:2或SEQ
IDNO:4，或SEQIDN...

【专利技术属性】
技术研发人员：汤岚，MD莫兰特，P哈里斯，赖伟坚，
申请(专利权)人：诺维信公司，
类型：发明
国别省市：丹麦;DK