一种阿托西班的制备方法技术

本发明专利技术涉及一种阿托西班的制备方法，该制备方法包括针对不同的氨基酸、不同的位点采用不同的缩合剂/活化剂组合：DIC/HOBT、TBTU、TBTU/HOBT、HBTU/HOBT、BOP/HOBT、制备Mpr(Trt)‑D‑Tyr(OEt)‑Ile‑Thr(tBu)‑Asn(Trt)‑Cys(Trt)‑Pro‑Orn(Boc)‑Gly‑树脂，然后经切肽、氧化和纯化后获得阿托西班。本发明专利技术阿托西班的制备方法收率高、产品杂质少、生产降低成本，适用于工业化生产。

【技术实现步骤摘要】
一种阿托西班的制备方法
本专利技术涉及化合物的制备方法，更具体地说，涉及利用固相多肽合成阿托西班的制备方法。
技术介绍
中文名：阿托西班，醋酸阿托西班，阿托西班、醋酸阿托西班。英文名：Atosiban，AtosibanAcetate.结构式为：分子式为：C43H67N11O12S2分子量：994.2阿托西班在临床上为一种可以静注的子宫内及蜕膜、胎膜上受体的环状肽催产素竞争性拮抗剂。使用本品后可剂量相关性地抑制宫缩，并使环状肽催产素介导的前列腺素分泌减少，达到保胎的目的，可用于18岁以上，孕龄24-33周，胎儿心率正常的孕妇。国外怀孕妇女的临床实验中，本品分别与β2激动剂(利托君、沙丁胺醇、特布他林)中的一种进行了双盲比较研究，治疗意图分析的综合结果显示，本品有效地抑制宫缩，达到保胎的作用，且不良反应和停药者均较少。综合分析中两组的平均生产孕龄及胎儿或婴儿的指标(出生体重、存活率、呼吸窘迫综合征或颅内出血的发生率)未见显著差异。美国专利4,504,469是采用Boc路线，以氯甲基树脂为起始原本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种阿托西班的制备方法，其特征在于，该方法包括:/n步骤(1)预处理树脂：/n步骤(2)利用DIC和HOBT为缩合剂，Fmoc-Gly-OH为原料与处理的树脂反应制备Fmoc-Gly-树脂：/n步骤(3)步骤(2)所得树脂用六氢吡啶脱去Fmoc-保护后，利用TBTU为缩合剂，Fmoc-Orn(Boc)-OH为原料与制得的Fmoc-Gly-树脂反应制备Fmoc-Orn(Boc)-Gly-树脂；/n步骤(4)步骤(3)所得树脂用六氢吡啶脱去Fmoc-保护后，利用TBTU和HOBT为缩合剂，Fmoc-Pro-OH为原料与制得的Fmoc-Orn(Boc)-Gly-树脂反应制备Fmoc-Pro-Or...

【技术特征摘要】
1.一种阿托西班的制备方法，其特征在于，该方法包括:
步骤(1)预处理树脂：
步骤(2)利用DIC和HOBT为缩合剂，Fmoc-Gly-OH为原料与处理的树脂反应制备Fmoc-Gly-树脂：
步骤(3)步骤(2)所得树脂用六氢吡啶脱去Fmoc-保护后，利用TBTU为缩合剂，Fmoc-Orn(Boc)-OH为原料与制得的Fmoc-Gly-树脂反应制备Fmoc-Orn(Boc)-Gly-树脂；
步骤(4)步骤(3)所得树脂用六氢吡啶脱去Fmoc-保护后，利用TBTU和HOBT为缩合剂，Fmoc-Pro-OH为原料与制得的Fmoc-Orn(Boc)-Gly-树脂反应制备Fmoc-Pro-Orn(Boc)-Gly-树脂；
步骤(5)步骤(4)所得树脂用六氢吡啶脱去Fmoc-保护后，利用HBTU和HOBT为缩合剂，DIEA为碱，Fmoc-Cys(Trt)-OH为原料与制得的Fmoc-Pro-Orn(Boc)-Gly-树脂反应制备Fmoc-Cys(Trt)-Pro-Orn(Boc)-Gly-树脂；
步骤(6)步骤(5)所得树脂用六氢吡啶脱去Fmoc-保护后，利用TBTU和HOBT为缩合剂，NMM为碱，Fmoc-Asn(Trt)-OH为原料与制得的Fmoc-Cys(Trt)-Pro-Orn(Boc)-Gly-树脂反应制备Fmoc-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Pro-Orn(Boc)-Gly-树脂；
步骤(7)步骤(6)所得树脂用六氢吡啶脱去Fmoc-保护后，利用TBTU和HOBT为缩合剂，Fmoc-Thr(tBu)-OH为原料与制得的Fmoc-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Pro-Orn(Boc)-Gly-树脂反应制备Fmoc-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Pro-Orn(Boc)-Gly-树脂；
步骤(8)步骤(7)所得树脂用六氢吡啶脱去Fmoc-保护后，利用DIC和HOBT为缩合剂，Fmoc-Ile-OH为原料与制得的Fmoc-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Pro-Orn(Boc)-Gly-树脂反应制备Fmoc-Ile-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Pro-Orn(Boc)-Gly-树脂；
步骤(9)步骤(8)所得树脂用六氢吡啶脱去Fmoc-保护后，利用HBTU和HOBT为缩合剂，NMM为碱，Fmoc-D-Tyr(OEt)-OH为原料与制得的Fmoc-Ile-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Pro-Orn(Boc)-Gly-树脂反应制备Fmoc-D-Tyr(OEt)-Ile-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Pro-Orn(Boc)-Gly-树脂；
步骤(10)步骤(9)所得树脂用六氢吡啶脱去Fmoc-保护后，利用BOP和HOBT为缩合剂，Mpr(Trt)-OH为原料与制得的Fmoc-D-Tyr(OEt)-Ile-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Pro-Orn(Boc)-Gly-树脂反应制备Mpr(Trt)-D-Tyr(OEt)-Ile-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Pro-Orn(Boc)-Gly-树脂。


2.根据权利要求1所述的阿托西班的制备方法，其特征在于，该方法进一步包括：
步骤(11)利用TFA、TIS和H2O混合物为切肽试剂，对制得的Mpr(Trt)-D-Tyr(OEt)-Ile-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Pro-Orn(Boc)-Gly-树脂进行切肽得还原型阿托西班粗品；
步骤(12)在pH为7.0-7.5下利用空气中的氧气对还原型阿托西班粗品进行氧化，以在Mpr和Cys之间形成二硫键；和
步骤(13)利用制备型HPLC(C18)柱进行纯化，获得阿托西班。


3.根据权利要求1或2所述的阿托西班的制备方法，其特征在于，
步骤(1)的树脂为RinkAmideAM树脂，
预处理树脂的过程为：用DMF浸泡RinkAmideAM树脂3次，每次浸泡1～3小时使其充分溶胀，抽干，加入体积浓度为17～21％的六氢吡啶的DMF溶液，18～22℃反应20～30分钟，抽干，用DMF洗涤，抽干，获得处理树脂。


4.根据权利要求1或2所述的阿托西班的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，反应溶剂为DMF，反应温度为25～29℃，反应时间为3～4小时。
反应体系中，Fmoc-Gly-OH的摩尔数为RinkAmideAM摩尔数的2.3～3.3倍；DIC摩尔数为树脂摩尔数的2.4～3.4倍；HOBT摩尔数为树脂摩尔数的2.5～3.5倍；
在RinkAmideAM树脂与Fmoc-Gly-OH反应完成之后，抽干反应液，用DMF洗涤，再抽干，获得Fmoc-Gly-树脂。


5.根据权利要求1或2所述的阿托西班的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，在Fmoc-Gly-树脂与Fmoc-Orn(Boc)-OH反应之前，向Fmoc-Gly-树脂中加入体积浓度为17～21％的六氢吡啶的DMF溶液，18～22℃反应20～30分钟，抽干，用DMF洗涤，抽干，其中体积浓度为17～21％的六氢吡啶的DMF溶液中，Fmoc-Gly-树脂的重量的体积浓度为1克/5～15ml，
反应溶剂为DMF，反应温度为32～37℃，反应时间为40～50分钟，
反应体系中，Fmoc-Orn(Boc)-OH的摩尔数为Fmoc-Gly-树脂摩尔数的1.9～2.9倍，TBTU摩尔数为Fmoc-Gly-树脂摩尔数的2.0～3.0倍，
在Fmoc-Gly-树脂与Fmoc-Orn(Boc)-OH反应完成后，抽干反应液，用DMF洗涤，再抽干，获得Fmoc-Orn(Boc)-Gly-树脂。


6.根据权利要求1或2所述的阿托西班的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，在Fmoc-Orn(Boc)-Gly-树脂与Fmoc-Pro-OH反应之前，向Fmoc-Orn(Boc)-Gly-树脂中加入体积浓度为17～21％的六氢吡啶的DMF溶液，18～22℃反应20～30分钟，抽干，用DMF洗涤，抽干，其中体积浓度为17～21％的六氢吡啶的DMF溶液中，Fmoc-Orn(Boc)-Gly-树脂的重量的体积浓度为1克/5～15ml，
反应溶剂为DMF，反应温度为32～37℃，反应时间为40～50分钟，
反应体系中，Fmoc-Pro-OH的摩尔数为Fmoc-Orn(Boc)-Gly-树脂摩尔数的2.0～3.0倍，TBTU摩尔数为Fmoc-Orn(Boc)-Gly-树脂摩尔数的2.1～3.1倍；HOBT摩尔数为Fmoc-Orn(Boc)-Gly-树脂摩尔数的2.2～3.2倍，
在Fmoc-Orn(Boc)-Gly-树脂与Fmoc-Pro-OH反应完成之后，抽干反应液，固体用DMF洗涤，抽干；获得Fmoc-Pro-Orn(Boc)-Gly-树脂。


7.根据权利要求1或2所述的阿托西班的制备方法，其特征在于，步骤(5)中，在Fmoc-Pro-Orn(Boc)-Gly-树脂与Fmoc-Cys(Trt)-OH反应之前，向Fmoc-Pro-Orn(Boc)-Gly-树脂中加入体积浓度为17～21％的六氢吡啶的DMF溶液，18～22℃反应20～30分钟，抽干，用DMF洗涤，抽干，其中体积浓度为17～21％的六氢吡啶的DMF溶液中，Fmoc-Pro-Orn(Boc)-Gly-树脂的重量的体积浓度为1克/5～15ml，
反应溶剂为DMF，反应温度为32～37℃，反应时间为40～60分钟，
反应体系中，Fmoc-Cys(Trt)-OH的摩尔数为Fmoc-Pro-Orn(Boc)-Gly-树脂摩尔数的2.6～3.6倍，TBTU摩尔数为Fmoc-Pro-Orn(Boc)-Gly-树脂摩尔数的2.7～3.7倍；HOBT摩尔数为Fmoc-Pro-Orn(Boc)-Gly-树脂摩尔数的2.8～3.8倍，DIEA：DMF的体积比为1∶8～12，
在Fmoc-Pro-Orn(Boc)-Gly-树脂与Fmoc-Cys(Trt)-OH反应完成之后，抽干反应液，固体用DMF洗涤，抽干，获得Fmoc-Cys(Trt)-Pro-Orn(Boc)-Gly-树脂。


8.根据权利要求1或2所述的阿托西班的制备方法，其特征在于，步骤(6)中，在Fmoc-Cys(Trt)-Pro-Orn(Boc)-Gly-树脂与Fmoc-Asn(Trt)-OH反应之前，向Fmoc-Cys(Trt)-Pro-Orn(Boc)-Gly-树脂中加入体积浓度为17～21％的六氢吡啶的DMF溶液，18～22℃反应20～30分钟，抽干，用DMF洗涤，抽干，其中体积浓度为17～21％的六氢吡啶的DMF溶液中，Fmoc-Cys(Trt)-Pro-Orn(Boc)-Gly-树脂的重量的体积浓度为1克/5～15ml，
反应溶剂为DMF，反应温度为32～37℃，反应时间为40～50分钟，
反应体系中，Fmoc-Asn(Trt)-OH的摩尔数为Fmoc-Cys(Trt)-Pro-Orn(Boc)-Gly-树脂摩尔数的2.4～3.4倍；TBTU摩尔数为Fmoc-Cys(Trt)-Pro-Orn(Boc)-Gly-树脂摩尔数的2.5～3.5倍；HOBT摩尔数为Fmoc-Cys(Trt)-Pro-Orn(Boc)-Gly-树脂摩尔数的2.6～3.6倍，NMM∶DMF的体积比为1∶8～10，
在Fmoc-Cys(Trt)-Pro-Orn(Boc)-Gly-树脂与Fmoc-Asn(Trt)-OH反应完成之后，抽干反应液，固体用DMF洗涤，抽干，获得Fmoc-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Pro-Orn(Boc)-Gly-树脂。


9.根据权利要求1或2所述的阿托西班的制备方法，其特征在于，步骤(7)中，在Fmoc-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Pro-Orn(Boc)-Gly-树脂与Fmoc-Thr(tBu)-OH反应之前，向Fmoc-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Pro-Orn(Boc)-Gly-树脂中加入体积浓度为17～21％的六氢吡啶的DMF溶液，18～22℃反应20～30分钟，抽干，用DMF洗涤，抽干，其中体积浓度为17～21％的六氢吡啶的DMF溶液中，Fmoc-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Pro-Orn(Boc)-Gly-树脂的重量的体积浓度为1克/5～15ml，
反应溶剂为DMF，反应温度为32～37℃，反应时间为40～50分钟，
反应体系中，Fmoc-Thr(tBu)-OH的摩尔数为Fmoc-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Pro-Orn(Boc)-Gly-树脂摩尔数的1.8～2.8倍；TBTU摩尔数为Fmoc-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Pro-Orn(Boc)-Gly-树脂摩尔数的1.9～2.9倍；HOBT摩尔数为Fmoc-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Pro-Orn(Boc)-Gly-树脂摩尔数的2.0～3.0倍，
在Fmoc-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Pro-Orn(Boc)-Gly-树脂与Fmoc-Thr(tBu)-OH反应之后，抽干反应液，固体用DMF洗涤，抽干，获得Fmoc-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Pro-Orn(Boc)-Gly-树脂。


10.根据权利要求1或2所述的阿托西班的制备方法，其特征在于步骤(8)中，在Fmoc-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Pro-Orn(Boc)-Gly-树脂与Fmoc-Ile-OH反应之前，向Fmoc-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Pro-Orn(Boc)-Gly-树脂中加入体积浓度为17～21％的六氢吡啶的DMF溶液，18～22℃反应20～30分钟，抽干，用DMF洗涤，抽干，其中体积浓度为17～21％的六氢吡啶的DMF溶液中，Fmoc-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Pro-Orn(Boc)-Gly-树脂的重量的体积浓度为：1克/5～15ml，
反应溶剂为DMF，反应温度为25～29℃，反应时间为2.5～3.5小时，
反应体系中，Fmoc-Ile-OH的摩尔数为Fmoc-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Pro-Orn(Boc)-Gly-树脂摩尔数的2.3～3.3倍；DIC摩尔数为Fmoc-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Pro-Orn(Boc)-Gly-树脂摩尔数的2.4～3.4倍；HOBT摩尔数为Fmoc-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Pro-Orn(Boc)-Gly-树脂摩尔数的2.5～3.5倍，
在Fmoc-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Pro-Orn(Boc)-Gly-树脂与Fmoc-Ile-OH反应完成之后，抽干反应液，固体用DMF洗涤，抽干，获得Fmoc-Ile-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Pro-Orn(Boc)-Gly-树脂。


11.根据权利要求1或2所述的阿托西班的制备方法，其特征在于步骤(9)中，在Fmoc-Ile-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Pro-Orn(Boc)-Gly-树脂与Fmoc-D-Tyr(OEt)-OH反应之前，向Fmoc-Ile-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Pro-Orn(Boc)-Gly-树脂中加入体积浓度为17～21％的六氢吡啶的DMF溶液，18～22℃反应20～30分钟，抽干，用DMF洗涤，抽干，其中体积浓度为17～2...

【专利技术属性】
技术研发人员：吕金芹，周伟，沙益健，饶金泉，许晓枫，崔颀，周逸明，
申请(专利权)人：上海苏豪逸明制药有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31