一种鲑降钙素的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种鲑降钙素的制备方法，包括步骤：（1）将树脂载体处理后，按照固相合成的方法依次连接具有保护基的氨基酸得到三十二肽树脂；（2）其间依次脱去Fmoc

【技术实现步骤摘要】
一种鲑降钙素的制备方法


[0001]本专利技术属于药物化学
，具体涉及鲑降钙素的制备方法。

技术介绍

[0002]鲑降钙素临床上主要用于治疗骨质疏松症、变形性骨炎、痛性神经营养不良症、高钙血症等。通用名：鲑降钙素，英文名：Calcitonin salmon。其氨基酸序列为：
[0003]c[Cys
‑
Ser
‑
Asn
‑
Leu
‑
Ser
‑
Thr
‑
Cys]‑
Val
‑
Leu
‑
Gly
‑
Lys
‑
Leu
‑
Ser
‑
Gln
‑
Glu
‑
Leu
‑
His
‑
Lys
‑
Leu
‑
Gln
‑
Thr
‑
Tyr
‑
Pro
‑
Arg
‑
Thr
‑
Asn
‑
Thr
‑
Gly
‑
Ser
‑
Gly
‑
Thr
‑
Pro
‑
NH2。
[0004]分子式：C
145
H
240
N
44
O
48
>S2，分子量：3431.9。鲑降钙素有32个氨基组成，涉及14个天然氨基。其中Asn2个，Thr5个，Ser4个，Gln2个，Glu1个，Pro2个，Gly3个，Cys2个，Val1个，Leu5个，Tyr1个，Lys2个，His1个，Arg1个。
[0005]上海苏豪逸明制药有限公司生产鲑降钙素已有十七年之久，虽然产量不大，产品质量也较稳定。但随着市场对药品质量要求的不断提高与技术进步，原生产工艺已不能满足需求市场需求，迫切需要新的制备工艺。中国专利申请号CN105111301A报道了片段法制备鲑降钙素，片段法制备的粗肽较容易分离纯化，但物料费用、人工成本均较高，且生产周期长。
[0006]中国专利申请号CN1865283A公开了“一种固相多肽合成鲑鱼降钙素的制备方法”，利用Fmoc
‑
策略固相法制备鲑鱼降钙素，包括步骤：a.Fmoc
‑
Rink Amide MBHA树脂或Fmoc
‑
Rink Amide AM树脂脱Fmoc
‑
保护后按照固相合成的方法依次连接各种保护氨基酸得到具有保护基团的三十二肽树脂；b.其间依次脱去Fmoc
‑
保护基团；c.脱侧链保护基团及切肽同步进行，得还原型粗品；d.粗品经弱碱(pH7.5
‑
10.0)空气氧化反应，并经反相HPLC分离纯化，制得鲑鱼降钙素精品，总收率约为：17.2％。该制备方法中，切除树脂和具有不同保护基的氨基酸上的Fmoc
‑
保护基团均利用20％六氢吡啶的DMF溶液，具有不同保护基的氨基酸物料均利用同一种缩合试剂(TBTU/HOBt/NMM)、同样的缩合条件(20
‑
30℃，0.5
‑
1小时)进行反应的。经专利技术人多年研究发现，每一种氨基酸的溶解性、空间体积是有差异，有的差异还很大，使得利用同一种脱除保护剂溶液，同一种缩合试剂、同样的缩合条件合成鲑降钙素的化学制备方法得到的产品产率低，成本高。
[0007]因此，需要一种新的方法制备鲑降钙素。

技术实现思路

[0008]针对现有技术中化学合成制备鲑降钙素中存在的不足，本专利技术提出了一种新的鲑降钙素的制备方法，该方法对不同的氨基酸采用不同的反应试剂和反应条件进行缩合，该方法收率高，质量稳定，生产成本低，接肽收率高，可以工业化实施。本专利技术的技术方案如下：
[0009]一种鲑降钙素的制备方法，其包括以下步骤：
[0010](1)将树脂载体处理后，按照固相合成的方法依次连接具有保护基的氨基酸得到
具有保护基的三十二肽树脂，
[0011]其中，所述树脂载体为Fmoc
‑
Rink Amind MBHA树脂，具有保护基的氨基酸为Fmoc
‑
Pro
‑
OH、Fmoc
‑
Thr(tBu)
‑
OH、Fmoc
‑
Gly
‑
OH、Fmoc
‑
Ser(tBu)
‑
OH、Fmoc
‑
Asn(Trt)
‑
OH、Fmoc
‑
Arg(Pbf)
‑
OH、Fmoc
‑
Tyr(tBu)
‑
OH、Fmoc
‑
Gln(Trt)
‑
OH、Fmoc
‑
Leu
‑
OH、Fmoc
‑
Lys(Boc)
‑
OH、Fmoc
‑
His(Trt)
‑
OH、Fmoc
‑
Glu(OtBu)
‑
OH、Fmoc
‑
Val
‑
OH、Fmoc
‑
Cys(Trt)
‑
OH，以及
[0012]其中，对于具有Fmoc
‑
单保护基的Fmoc
‑
Rink Amide MBHA树脂和氨基酸，以及具有Fmoc
‑
保护基团和Boc
‑
或tBu
‑
或OtBu
‑
保护基的氨基酸，利用质量含量为25.5
‑
26.5％％的六氢吡啶的DMF溶液进行一次脱除Fmoc
‑
保护基，以及
[0013]对于具有Fmoc
‑
保护基团和Pbf
‑
或Trt
‑
保护基的氨基酸，利用质量含量为23.5
‑
24.5％％的六氢吡啶的DMF溶液进行两次脱除Fmoc
‑
保护基。
[0014]在另一优选例中，对具有Fmoc
‑
单保护基的氨基酸，利用HOBT/DIC缩合剂，进行缩合反应，对具有Fmoc
‑
保护基和Boc
‑
或tBu
‑
或Pbf
‑
或Trt
‑
保护基的氨基酸，利用HOBT/HBTU/DIPEA缩合剂，进行缩合反应。
[0015]在另一优选例中，缩合反应所用溶剂选自DMF(N，N
‑
二甲基甲酰胺)、DMAC(N，N
‑
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种鲑降钙素的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：(1)将树脂载体处理后，按照固相合成的方法依次连接具有保护基的氨基酸得到具有保护基的三十二肽树脂，其中，所述树脂载体为Fmoc
‑
Rink Amide MBHA树脂，具有保护基的氨基酸为Fmoc
‑
Pro
‑
OH、Fmoc
‑
Thr(tBu)
‑
OH、Fmoc
‑
Gly
‑
OH、Fmoc
‑
Ser(tBu)
‑
OH、Fmoc
‑
Asn(Trt)
‑
OH、Fmoc
‑
Arg(Pbf)
‑
OH、Fmoc
‑
Tyr(tBu)
‑
OH、Fmoc
‑
Gln(Trt)
‑
OH、Fmoc
‑
Leu
‑
OH、Fmoc
‑
Lys(Boc)
‑
OH、Fmoc
‑
His(Trt)
‑
OH、Fmoc
‑
Glu(OtBu)
‑
OH、Fmoc
‑
Val
‑
OH、Fmoc
‑
Cys(Trt)
‑
OH，其中，对于具有Fmoc
‑
单保护基的Fmoc
‑
Rink Amide MBHA树脂和氨基酸，以及具有Fmoc
‑
保护基团和Boc
‑
或tBu
‑
或OtBu
‑
保护基的氨基酸，利用质量含量为25.5
‑
26.5％的六氢吡啶的DMF溶液进行一次脱除Fmoc
‑
保护基，以及对于具有Fmoc
‑
保护基团和Pbf
‑
或Trt
‑
保护基的氨基酸，利用质量含量为23.5
‑
24.5％的六氢吡啶的DMF溶液进行两次脱除Fmoc
‑
保护基。2.根据权利要求1所述的鲑降钙素的制备方法，其特征在于，对具有Fmoc
‑
单保护基的氨基酸，利用HOBT/DIC缩合剂，进行缩合反应，对具有Fmoc
‑
保护基和Boc
‑
或tBu
‑
或Pbf
‑
或Trt
‑
保护基的氨基酸，利用HOBT/HBTU/DIPEA缩合剂，进行缩合反应，和/或缩合反应所用溶剂选自DMF和/或DMAC，更优选DMF。3.根据权利要求2所述的鲑降钙素的制备方法，其特征在于，所述HOBT/DIC缩合剂中HOBT与DIC质量比为1∶0.9～1.2，更优选1∶1.0～1.1，和/或所述HOBT/DIC缩合剂的用量为树脂摩尔数的3倍量，和/或所述HOBT/HBTU/DIPEA缩合剂中HOBT∶HBTU∶DIPEA的MOL比为1∶0.9～1.2∶1.7～2.2，更优选1∶1∶1.85，和/或所述HOBT/HBTU/DIPEA缩合剂的用量为树脂摩尔数的3倍量，和/或利用HOBT/DIC缩合剂进行缩合反应的包括步骤(a)：向反应体系中加入HOBT和DIC，在20～35℃下，搅拌50～70min，优选地，连接Fmoc
‑
Val
‑
OH时，利用HOBT/DIC缩合剂进行缩合反应的温度为40
‑
45℃，时间为95min。和/或利用HOBT/HBTU/DIPEA缩合剂进行缩合反应的包括步骤(b)：向反应体系中加入HOBT和HBTU，搅拌至物料全溶，再加入DIPEA，在20～40℃下，搅拌15～50min。4.根据权利要求1或2所述的鲑降钙素的制备方法，其特征在于，利用质量含量为25.5
‑
26.5％的六氢吡啶的DMF溶液进行一次脱除Fmoc
‑
保护基的包括步骤(c)：向所述树脂载体或连接有氨基酸的树脂中加入质量含量为26％的六氢吡啶的DMF溶液，在20～40℃下，搅拌17～23分钟，且随着肽链的延长，反应时间相应增加，优选地，连接的肽链由1至7，9个氨基酸组成时，搅拌17分钟；连接的肽链由11至13，15至16个氨基酸组成时搅拌18分钟；连接的肽链由18至19，21至26，28至29个氨基酸组成时，搅拌21分钟；连接的肽链由30，32个氨基酸组成时，搅拌23分钟；和/或利用质量含量为23.5
‑
24.5％的六氢吡啶的DMF溶液进行两次脱Fmoc
‑
保护基的包括步骤(d)：向连接有氨基酸的树脂中加入质量含量为23.5
‑
24.5％的六氢吡啶的DMF溶液，进行第一次脱Fmoc
‑
保护基，抽干，然后再加入质量含量为23.5
‑
24.5％的六氢吡啶的DMF溶液，进行第二次脱Fmoc
‑
保护基，其中第一次脱Fmoc
‑
保护基和第二次脱Fmoc
‑
保护基加入的六氢吡啶的DMF溶液的体积比为1∶0.5～1.5，更优选1∶0.8～1.2。
5.根据权利要求1或2所述的鲑降钙素的制备方法，其特征在于，所述制备方法还包括缩合反应之后，抽干反应液，用溶剂洗涤1～4次所得树脂，每次洗涤后抽干，用茚三酮法检测，若树脂颜色呈无色、淡黄色或淡蓝色表示缩合反应已经完成，若树脂颜色呈蓝紫色则需补接氨基酸，补接的氨基酸利用HOBT/DIC缩合剂，其中HOBT与DIC的摩尔比为1∶0.9～1∶1.2，更优选1∶1.0～1∶1。6.根据权利要求1或2所述的鲑降钙素的制备方法，其特征在于，所述制备方法还包括以下步骤：(2)同时脱侧链保护基团和切肽，得还原型粗品；以及(3)粗品氧化成环，并分离纯化，制得鲑降钙素精品。7.根据权利要求6所述的鲑降钙素的制备方法，其特征在于，步骤(2)中脱侧链保护基团和切肽所用切肽剂为三氟乙酸：三异丙基硅烷：苯酚：巯基丙酸：水的混合物，优选地，切肽剂中，三氟乙酸∶三异丙基硅烷∶苯酚∶巯基丙酸∶水的重量比为88.6～89.0∶4.3～4.5∶2.7～2.9∶2.7～2.9∶1.1～1.3。优选地，切肽过程的温度为20～40℃，更优选25～30℃，和/或步骤(3)中分离纯化条件为：流动相为磷酸三乙胺∶乙腈＝1∶0.3～0.5，色谱柱的填料为C18，检测波长为230nm。8.一种鲑降钙素的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：(1)处理Rink Amide MBHA
‑
树脂：在25
‑
30℃下，利用DMF浸泡Rink Amide MBHA
‑
树脂使其充分溶胀；(2)Fmoc
‑
Pro
‑
树脂的制备：将质量含量为26％的六氢吡啶的DMF溶液加入充分溶胀的Rink Amide MBHA
‑
树脂中，脱树脂中的Fmoc
‑
保护基，抽干，依次利用DMF、MeOH和DMF洗涤，将Fmoc
‑
Pro
‑
OH与脱Fmoc
‑
保护基的树脂在溶剂中，在HOBT/DIC缩合剂存在下进行缩合，生成Fmoc
‑
Pro
‑
树脂；(3)Fmoc
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂的制备：将质量含量为26％的六氢吡啶的DMF溶液加入Fmoc
‑
Pro
‑
树脂中，脱Fmoc
‑
保护基，抽干，依次利用DMF、MeOH和DMF洗涤，将Fmoc
‑
Thr(tBu)
‑
OH与Pro
‑
树脂在溶剂中，在HOBT/HBTU/DIPEA缩合剂存在下进行缩合，生成Fmoc
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂；(4)Fmoc
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂的制备：将质量含量为26％的六氢吡啶的DMF溶液加入Fmoc
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂中，脱Fmoc
‑
保护基，抽干，依次利用DMF、MeOH和DMF洗涤，将Fmoc
‑
Gly
‑
OH与Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂在溶剂中，在HOBT/DIC缩合剂存在下进行缩合，生成Fmoc
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂；(5)Fmoc
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂的制备：将质量含量为26％的六氢吡啶的DMF溶液加入Fmoc
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂中，脱Fmoc
‑
保护基，抽干，依次利用DMF、MeOH和DMF洗涤，将Fmoc
‑
Ser(tBu)
‑
OH与Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂在溶剂中，在HOBT/HBTU/DIPEA缩合剂存在下进行缩合，生成Fmoc
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂；
(6)Fmoc
‑
Gly
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂的制备：将质量含量为26％的六氢吡啶的DMF溶液加入Fmoc
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂中，脱Fmoc
‑
保护基，抽干，依次利用DMF、MeOH和DMF洗涤，Fmoc
‑
Gly
‑
OH与Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂在溶剂中，在HOBT/DIC缩合剂存在下进行缩合，生成Fmoc
‑
Gly
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂；(7)Fmoc
‑
Thr(tBu)
‑
Gly
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂的制备：将质量含量为26％的六氢吡啶的DMF溶液加入Fmoc
‑
Gly
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂中，脱Fmoc
‑
保护基，抽干，依次利用DMF、MeOH和DMF洗涤，Fmoc
‑
Thr(tBu)
‑
OH与Gly
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂在溶剂中，在HOBT/HBTU/DIPEA缩合剂存在下进行缩合，生成Fmoc
‑
Thr(tBu)
‑
Gly
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂；(8)Fmoc
‑
Asn(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Gly
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂的制备：将质量含量为26％的六氢吡啶的DMF溶液加入Fmoc
‑
Thr(tBu)
‑
Gly
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂中，进行脱Fmoc
‑
保护基，抽干，依次利用DMF、MeOH和DMF洗涤，Fmoc
‑
Asn(Trt)
‑
OH与Thr(tBu)
‑
Gly
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂在溶剂中，在HOBT/HBTU/DIPEA缩合剂存在下进行缩合，生成Fmoc
‑
Asn(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
GlySer(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂；(9)Fmoc
‑
Thr(tBu)
‑
Asn(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Gly
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂的制备：将质量含量为24％的六氢吡啶的DMF溶液加入Fmoc
‑
Asn(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Gly
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂中，进行第一次脱Fmoc
‑
保护基，抽干，然后再加入质量含量为24％的六氢吡啶的DMF溶液，进行第二次脱Fmoc
‑
保护基，抽干，依次利用DMF、MeOH和DMF洗涤，Fmoc
‑
Thr(tBu)
‑
OH与Asn(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Gly
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂在溶剂中，在HOBT/HBTU/DIPEA缩合剂存在下进行缩合，生成Fmoc
‑
Thr(tBu)
‑
Asn(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Gly
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂；(10)Fmoc
‑
Arg(pbf)
‑
Thr(tBu)
‑
Asn(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Gly
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂的制备：将质量含量为26％的六氢吡啶的DMF溶液加入Fmoc
‑
Thr(tBu)
‑
Asn(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Gly
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂中，进行脱Fmoc
‑
保护基，抽干，依次利用DMF、MeOH和DMF洗涤，Fmoc
‑
Arg(pbf)
‑
OH与Thr(tBu)
‑
Asn(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Gly
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂在溶剂中，在HOBT/HBTU/DIPEA缩合剂存在下进行缩合，生成Fmoc
‑
Arg(pbt)
‑
Thr(tBu)
‑
Asn(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Gly
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂；(11)Fmoc
‑
Pro
‑
Arg(pbf)
‑
Thr(tBu)
‑
Asn(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Gly
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂的制备：将质量含量为24％的六氢吡啶的DMF溶液加入Fmoc
‑
Arg(pbf)
‑
Thr(tBu)
‑
Asn(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Gly
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂中，进行第一次脱Fmoc
‑
保护基，抽干，然后再加入质量含量为24％的六氢吡啶的DMF溶液，进行第二次脱Fmoc
‑
保护基，抽干，依次利
用DMF、MeOH和DMF洗涤，Fmoc
‑
Pro
‑
OH与Arg(pbf)
‑
Thr(tBu)
‑
Asn(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Gly
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂，在HOBT/DIC缩合剂存在下进行缩合，生成Fmoc
‑
Pro
‑
Arg(pbf)
‑
Thr(tBu)
‑
Asn(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Gly
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂；(12)Fmoc
‑
Tyr(tBu)
‑
Pro
‑
Arg(pbf)
‑
Thr(tBu)
‑
Asn(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Gly
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂的制备：将质量含量为26％的六氢吡啶的DMF溶液加入Fmoc
‑
Pro
‑
Arg(pbf)
‑
Thr(tBu)
‑
Asn(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Gly
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂中，脱Fmoc
‑
保护基，抽干，依次利用DMF、MeOH和DMF洗涤，Fmoc
‑
Tyr(tBu)
‑
OH与Pro
‑
Arg(pbf)
‑
Thr(tBu)
‑
Asn(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Gly
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr (tBu)
‑
Pro
‑
树脂，在HOBT/HBTU/DIPEA缩合剂存在下进行缩合，生成Fmoc
‑
Tyr(tBu)
‑
Pro
‑
Arg(pbf)
‑
Thr(tBu)
‑
Asn(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Gly
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂；(13)Fmoc
‑
Thr(tBu)
‑
Tyr(tBu)
‑
Pro
‑
Arg(pbf)
‑
Thr(tBu)
‑
Asn(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Gly
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂的制备：将质量含量为26％的六氢吡啶的DMF溶液加入Fmoc
‑
Tyr(tBu)
‑
Pro
‑
Arg(pbf)
‑
Thr(tBu)
‑
Asn(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Gly
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂中，脱Fmoc
‑
保护基，抽干，依次利用DMF、MeOH和DMF洗涤，Fmoc
‑
Thr(tBu)
‑
OH与Tyr(tBu)
‑
Pro
‑
Arg(pbf)
‑
Thr(tBu)
‑
Asn(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Gly
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂，在HOBT/HBTU/DIPEA缩合剂存在下进行缩合，生成Fmoc
‑
Thr(tBu)
‑
Tyr(tBu)
‑
Pro
‑
Arg(pbf)
‑
Thr(tBu)
‑
Asn(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Gly
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂；(14)Fmoc
‑
Gln(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Tyr(tBu)
‑
Pro
‑
Arg(pbf)
‑
Thr(tBu)
‑
Asn(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Gly
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂的制备：将质量含量为26％的六氢吡啶的DMF溶液加入Fmoc
‑
Thr(tBu)
‑
Tyr(tBu)
‑
Pro
‑
Arg(pbf)
‑
Thr(tBu)
‑
Asn(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Gly
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂中，进行脱Fmoc
‑
保护基，抽干，依次利用DMF、MeOH和DMF洗涤，Fmoc
‑
Gln(Trt)
‑
OH与Thr(tBu)
‑
Tyr(tBu)
‑
Pro
‑
Arg(pbf)
‑
Thr(tBu)
‑
Asn(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Gly
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂，在HOBT/HBTU/DIPEA缩合剂存在下进行缩合，生成Fmoc
‑
Gln(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Tyr(tBu)
‑
Pro
‑
Arg(pbf)
‑
Thr(tBu)
‑
Asn(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Gly
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂；(15)Fmoc
‑
Leu
‑
Gln(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Tyr(tBu)
‑
Pro
‑
Arg(pbf)
‑
Thr(tBu)
‑
Asn(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Gly
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂的制备：将质量含量为24％的六氢吡啶的DMF溶液加入Fmoc
‑
Gln(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Tyr(tBu)
‑
Pro
‑
Arg(pbf)
‑
Thr(tBu)
‑
Asn(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Gly
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂中，进行第一次脱Fmoc
‑
保护基，抽干，然后再加入质量含量为24％的六氢吡啶的DMF溶液，进行第二次脱Fmoc
‑
保护基，抽干，依次利用DMF、MeOH和DMF洗涤，Fmoc
‑
Leu
‑
OH与Gln(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Tyr(tBu)
‑
Pro
‑
Arg(pbf)
‑
Thr(tBu)
‑
Asn(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Gly
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂，在HOBT/DIC缩合剂存在下进行缩合，生
成Fmoc
‑
Leu
‑
Gln(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Tyr(tBu)
‑
Pro
‑
Arg(pbf)
‑
Thr(tBu)
‑
Asn(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Gly
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂；(16)Fmoc
‑
Lys(Boc)
‑
Leu
‑
Gln(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Tyr(tBu)
‑
Pro
‑
Arg(pbf)
‑
Thr(tBu)
‑
Asn(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Gly
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂的制备：将质量含量为26％的六氢吡啶的DMF溶液加入Fmoc
‑
Leu
‑
Gln(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Tyr(tBu)
‑
Pro
‑
Arg(pbf)
‑
Thr(tBu)
‑
Asn(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Gly
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂中，脱Fmoc
‑
保护基，抽干，依次利用DMF、MeOH和DMF洗涤，Fmoc
‑
Lys(Boc)
‑
OH与Leu
‑
Gln(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Tyr(tBu)
‑
Pro
‑
Arg(pbf)
‑
Thr(tBu)
‑
Asn(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Gly
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂，在HOBT/HBTU/DIPEA缩合剂存在下进行缩合，生成Fmoc
‑
Lys(Boc)
‑
Leu
‑
Gln(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Tyr(tBu)
‑
Pro
‑
Arg(pbf)
‑
Thr(tBu)
‑
Asn(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Gly
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂；(17)Fmoc
‑
His(Trt)
‑
Lys(Boc)
‑
Leu
‑
Gln(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Tyr(tBu)
‑
Pro
‑
Arg(pbf)
‑
Thr(tBu)
‑
Asn(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Gly
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂的制备：将质量含量为26％的六氢吡啶的DMF溶液加入Fmoc
‑
Lys(Boc)
‑
Leu
‑
Gln(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Tyr(tBu)
‑
Pro
‑
Arg(pbf)
‑
Thr(tBu)
‑
Asn(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Gly
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂中，进行脱Fmoc
‑
保护基，抽干，依次利用DMF、MeOH和DMF洗涤，Fmoc
‑
His(Trt)
‑
OH与Lys(Boc)
‑
Leu
‑
Gln(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Tyr(tBu)
‑
Pro
‑
Arg(pbf)
‑
Thr(tBu)
‑
Asn(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Gly
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂，在HOBT/HBTU/DIPEA缩合剂存在下进行缩合，生成Fmoc
‑
His(Trt)
‑
Lys(Boc)
‑
Leu
‑
Gln(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Tyr(tBu)
‑
Pro
‑
Arg(pbf)
‑
Thr(tBu)
‑
Asn(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Gly
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂；(18)Fmoc
‑
Leu
‑
His(Trt)
‑
Lys(Boc)
‑
Leu
‑
Gln(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Tyr(tBu)
‑
Pro
‑
Arg(pbf)
‑
Thr(tBu)
‑
Asn(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Gly
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂的制备：将质量含量为24％的六氢吡啶的DMF溶液加入Fmoc
‑
His(Trt)
‑
Lys(Boc)
‑
Leu
‑
Gln(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Tyr(tBu)
‑
Pro
‑
Arg(pbf)
‑
Thr(tBu)
‑
Asn(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Gly
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂中，进行第一次脱Fmoc
‑
保护基，抽干，然后再加入质量含量为24％的六氢吡啶的DMF溶液，进行第二次脱Fmoc
‑
保护基，抽干，依次利用DMF、MeOH和DMF洗涤，Fmoc
‑
Leu
‑
OH与His(Trt)
‑
Lys(Boc)
‑
Leu
‑
Gln(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Tyr(tBu)
‑
Pro
‑
Arg(pbf)
‑
Thr(tBu)
‑
Asn(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Gly
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂，在HOBT/DIC缩合剂存在下进行缩合，生成Fmoc
‑
Leu
‑
His(Trt)
‑
Lys(Boc)
‑
Leu
‑
Gln(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Tyr(tBu)
‑
Pro
‑
Arg(pbf)
‑
Thr(tBu)
‑
Asn(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Gly
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂；(19)Fmoc
‑
Glu(OtBu)
‑
Leu
‑
His(Trt)
‑
Lys(Boc)
‑
Leu
‑
Gln(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Tyr(tBu)
‑
Pro
‑
Arg(pbf)
‑
Thr(tBu)
‑
Asn(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Gly
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂的制备：将质量含量为26％的六氢吡啶的DMF溶液加入Fmoc
‑
Leu
‑
His(Trt)
‑
Lys(Boc)
‑
Leu
‑
Gln(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Tyr(tBu)
‑
Pro
‑
Arg(pbf)
‑
Thr(tBu)
‑
Asn(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Gly
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂中，脱Fmoc
‑
保护基，抽干，依次利用DMF、MeOH和DMF洗涤，Fmoc
‑
Glu(OtBu)
‑
OH与Leu
‑
His(Trt)
‑
Lys(Boc)
‑
Leu
‑
Gln(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Tyr(tBu)
‑
Pro
‑
Arg(pbf)
‑
Thr(tBu)
‑
Asn(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Gly
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂，在HOBT/HBTU/DIPEA缩合剂存在下进行缩合，生成Fmoc
‑
Glu(OtBu)
‑
Leu
‑
His(Trt)
‑
Lys(Boc)
‑
Leu
‑
Gln(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Tyr(tBu)
‑
Pro
‑
Arg(pbf)
‑
Thr(tBu)
‑
Asn(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Gly
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂；(20)Fmoc
‑
Gln(Trt)
‑
Glu(OtBu)
‑
Leu
‑
His(Trt)
‑
Lys(Boc)
‑
Leu
‑
Gln(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Tyr(tBu)
‑
Pro
‑
Arg(pbf)
‑
Thr(tBu)
‑
Asn(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Gly
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂的制备：将质量含量为26％的六氢吡啶的DMF溶液加入Fmoc
‑
Glu(OtBu)
‑
Leu
‑
His(Trt)
‑
Lys(Boc)
‑
Leu
‑
Gln(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Tyr(tBu)
‑
Pro
‑
Arg(pbf)
‑
Thr(tBu)
‑
Asn(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Gly
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂中，进行脱Fmoc
‑
保护基，抽干，依次利用DMF、MeOH和DMF洗涤，Fmoc
‑
Gln(Trt)
‑
OH与Glu(OtBu)
‑
Leu
‑
His(Trt)
‑
Lys(Boc)
‑
Leu
‑
Gln(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Tyr(tBu)
‑
Pro
‑
Arg(pbf)
‑
Thr(tBu)
‑
Asn(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Gly
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂，在HOBT/HBTU/DIPEA缩合剂存在下进行缩合，生成Fmoc
‑
Gln(Trt)
‑
Glu(OtBu)
‑
Leu
‑
His(Trt)
‑
Lys(Boc)
‑
Leu
‑
Gln(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Tyr(tBu)
‑
Pro
‑
Arg(pbf)
‑
Thr(tBu)
‑
Asn(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Gly
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂；(21)Fmoc
‑
Ser(tBu)
‑
Gln(Trt)
‑
Glu(OtBu)
‑
Leu
‑
His(Trt)
‑
Lys(Boc)
‑
Leu
‑
Gln(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Tyr(tBu)
‑
Pro
‑
Arg(pbf)
‑
Thr(tBu)
‑
Asn(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Gly
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂的制备：将质量含量为24％的六氢吡啶的DMF溶液加入Fmoc
‑
Gln(Trt)
‑
Glu(OtBu)
‑
Leu
‑
His(Trt)
‑
Lys(Boc)
‑
Leu
‑
Gln(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Tyr(tBu)
‑
Pro
‑
Arg(pbf)
‑
Thr(tBu)
‑
Asn(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Gly
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂中，进行第一次脱Fmoc
‑
保护基，抽干，然后再加入质量含量为24％的六氢吡啶的DMF溶液，进行第二次脱Fmoc
‑
保护基，抽干，依次利用DMF、MeOH和DMF洗涤，Fmoc
‑
Ser(tBu)
‑
OH与Gln(Trt)
‑
Glu(OtBu)
‑
Leu
‑
His(Trt)
‑
Lys(Boc)
‑
Leu
‑
Gln(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Tyr(tBu)
‑
Pro
‑
Arg(pbf)
‑
Thr(tBu)
‑
Asn(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Gly
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂，在HOBT/HBTU/DIPEA缩合剂存在下进行缩合，生成Fmoc
‑
Ser(tBu)
‑
Gln(Trt)
‑
Glu(OtBu)
‑
Leu
‑
His(Trt)
‑
Lys(Boc)
‑
Leu
‑
Gln(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Tyr(tBu)
‑
Pro
‑
Arg(pbf)
‑
Thr(tBu)
‑
Asn(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Gly
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂；(22)Fmoc
‑
Leu
‑
Ser(tBu)
‑
Gln(Trt)
‑
Glu(OtBu)
‑
Leu
‑
His(Trt)
‑
Lys(Boc)
‑
Leu
‑
Gln(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Tyr(tBu)
‑
Pro
‑
Arg(pbf)
‑
Thr(tBu)
‑
Asn(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Gly
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂的制备：将质量含量为26％的六氢吡啶的DMF溶液加入Fmoc
‑
Ser(tBu)
‑
Gln(Trt)
‑
Glu(OtBu)
‑
Leu
‑
His(Trt)
‑
Lys(Boc)
‑
Leu
‑
Gln(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Tyr(tBu)
‑
Pro
‑
Arg(pbf)
‑
Thr(tBu)
‑
Asn(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Gly
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂中，脱Fmoc
‑
保护基，抽干，依次利用DMF、MeOH和DMF洗涤，Fmoc
‑
Leu
‑
OH与Ser(tBu)
‑
Gln(Trt)
‑
Glu(OtBu)
‑
Leu
‑
His(Trt)
‑
Lys(Boc)
‑
Leu
‑
Gln(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Tyr(tBu)
‑
Pro
‑
Arg(pbf)
‑
Thr(tBu)
‑
Asn(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Gly
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂，在HOBT/DIC缩合剂存在下进行缩合，生成Fmoc
‑
Leu
‑
Ser(tBu)
‑
Gln(Trt)
‑
Glu(OtBu)
‑
Leu
‑
His(Trt)
‑
Lys(Boc)
‑
Leu
‑
Gln(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Tyr(tBu)
‑
Pro
‑
Arg(pbf)
‑
Thr(tBu)
‑
Asn(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Gly
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂；(23)Fmoc
‑
Lys(Boc)
‑
Leu
‑
Ser(tBu)
‑
Gln(Trt)
‑
Glu(OtBu)
‑
Leu
‑
His(Trt)
‑
Lys(Boc)
‑
Leu
‑
Gln(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Tyr(tBu)
‑
Pro
‑
Arg(pbf)
‑
Thr(tBu)
‑
Asn(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Gly
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂的制备：将质量含量为26％的六氢吡啶的DMF溶液加入Fmoc
‑
Leu
‑
Ser(tBu)
‑
Gln(Trt)
‑
Glu(OtBu)
‑
Leu
‑
His(Trt)
‑
Lys(Boc)
‑
Leu
‑
Gln(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Tyr(tBu)
‑
Pro
‑
Arg(pbf)
‑
Thr(tBu)
‑
Asn(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Gly
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂中，脱Fmoc
‑
保护基，抽干，依次利用DMF、MeOH和DMF洗涤，Fmoc
‑
Lys(Boc)
‑
OH与Leu
‑
Ser(tBu)
‑
Gln(Trt)
‑
Glu(OtBu)
‑
Leu
‑
His(Trt)
‑
Lys(Boc)
‑
Leu
‑
Gln(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Tyr(tBu)
‑
Pro
‑
Arg(pbf)
‑
Thr(tBu)
‑
Asn(Trt)
‑
Thr(tBu)
‑
Gly
‑
Ser(tBu)
‑
Gly
‑
Thr(tBu)
‑
Pro
‑
树脂，在HOBT/HBTU/DIPEA缩合剂存在下进行缩合，生成Fmoc
‑
Lys(Boc)
‑
Leu
‑
Ser(tBu)
‑
Gln(Trt)
‑
Glu(OtBu)
‑
Leu
‑

【专利技术属性】
技术研发人员：周伟，饶金泉，沙益健，王文琪，周逸明，崔颀，
申请(专利权)人：上海苏豪逸明制药有限公司，
类型：发明
国别省市：