通过转基因啮齿类动物制备人源化驼类单域抗体的方法技术

本发明专利技术提供了一种通过转基因啮齿类动物制备人源化单域抗体的方法。所述方法通过构建人源化羊驼单域抗体人工染色体，制备转基因小鼠，同时采用同源重组的方法敲除小鼠内源性的抗体IgH、IgKappa和IgLamda基因簇，获得只表达人源化羊驼单域抗体的转基因小鼠，并用于制备人源化的单克隆羊驼单域抗体。可以通过杂交瘤或者单细胞PCR筛选的方法直接获得人源化的单域抗体，无需对获得的单域抗体进行体外突变和人源化改造，不需建库筛选，具有简单方便、安全性好的优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术公开了一种利用转基因啮齿类动物制备人源化单克隆驼类单域抗体的技术，属于分子生物学和免疫学领域。
技术介绍
在高等脊椎动物中，免疫球蛋白分子(Ig)通常被认为是由两条轻链(Lightchain,L)和两条重链(Heavychain,H)组成的蛋白四聚体(H2L2)。1993年在哺乳类骆驼科动物(Camelidae)的体液免疫系统中发现其免疫球蛋白IgG有两类结构：一类是IgG1，为重链和轻链的异型四聚体(eterotetramer)，相对分子质量约150kDa；另一类是在血清IgG中占50％左右的，相对分子质量约92kDa的IgG2和约90kDa的IgG3，均为重链的同型二聚体(homo-dimericheavy-chain)。这种天然缺失轻链的抗体，又被称为重链抗体(heavy-chainantibodies,HCAb)，存在于偶蹄目骆驼科的动物血液中。不同种类的骆驼科动物其HCAb单体的相对分子质量不尽相同，约为43～47kDa，比IgG1的重链单体小约10kDa。1本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种通过转基因啮齿类动物制备人源化IgG单域抗体的方法，所述方法包括以下步骤：(1)构建含有人源化IgG抗体VHH区编码序列串联结构的细菌人工染色体DNA；(2)将步骤(1)获得的细菌人工染色体DNA转导入啮齿类动物受精卵雄性原核内；(3)将步骤(2)获得的受精卵移入假孕雌性啮齿类动物身体两侧的输卵管内，使胚胎在代孕母体内发育，经一个完整的发育周期产下子代；(4)鉴定出含有人源化单域抗体基因座的转基因啮齿类动物；(5)将鉴定出的转基因啮齿类动物与采用同源重组方法敲除内源性抗体重链IgH、轻链IgKappa和IgLamda的啮齿类动物杂交，最终获得含有人源化单域抗体基因座，同时内源性抗体重链Ig...

【技术特征摘要】
1.一种通过转基因啮齿类动物制备人源化IgG单域抗体的方法，所
述方法包括以下步骤：
(1)构建含有人源化IgG抗体VHH区编码序列串联结构的细菌人工
染色体DNA；
(2)将步骤(1)获得的细菌人工染色体DNA转导入啮齿类动物受
精卵雄性原核内；
(3)将步骤(2)获得的受精卵移入假孕雌性啮齿类动物身体两侧的
输卵管内，使胚胎在代孕母体内发育，经一个完整的发育周期产下子代；
(4)鉴定出含有人源化单域抗体基因座的转基因啮齿类动物；
(5)将鉴定出的转基因啮齿类动物与采用同源重组方法敲除内源性
抗体重链IgH、轻链IgKappa和IgLamda的啮齿类动物杂交，最终获得含
有人源化单域抗体基因座，同时内源性抗体重链IgH、轻链IgKappa和
IgLamda基因被敲除的人源化单域抗体转基因啮齿类动物；
(6)从步骤(5)获得的人源化单域抗体转基因啮齿类动物中获得单
克隆单域纳米抗体。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述啮齿类动物为小
鼠。
3.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋海鹏，李敏，王庆东，
申请(专利权)人：长春力太生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：吉林;22