【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种生物纳米检测技术，尤其涉及一种环介导等温扩增技术和核酸杂交同步反应的方法，将环介导等温扩增过程、核酸杂交过程这两个分子生物学反应环节合二为一，缩短为一个反应步骤。
技术介绍
环介导等温扩增(loop-mediatedisothermal amplification, LAMP)是 2000 年由日本科学家Notomi, T.首次在Nucleic Acids Research杂志上报道的一种新颖的恒温核酸扩增方法，之后又不断改进并于2008年在杂志Nature Protocols上对其技术要点进行了系统的归纳总结。环介导等温扩增技术的特点是针对靶基因的6个区域设计4种特异引物，利用一种链置换DNA聚合酶在等温条件(63°C左右)保温30 — 60分钟，即可完成核酸扩增反应。与常规PCR相比，不需要模板的热变性、温度循环、电泳及紫外观察等过程。环介导等温扩增法是一种全新的核酸扩增方法，具有简单、快速、特异性强的特点。该技术在灵敏度、特异性和检测范围等指标上能媲美甚至优于PCR技术，不依赖任何专门的仪器设备实现现场高通量快速检测，检测成本远低于荧光定量PCR。经过十几年的发展，环介导等温扩增技术已成熟完备，并被广泛应用于病原微生物检测、食品安全、转基因物种检测、肿瘤诊断、胎儿性别鉴定、进出□快速诊断等多个领域，其检测结果的可靠性得到了普遍认可。核酸杂交技术是一种分子生物学的成熟标准技术，用于检测核酸分子(DNA或RNA)的特定序列(靶序列)。先将核酸杂交探针(寡核苷酸序列)转移并固定到硝酸纤维素膜、尼龙膜、或基因芯片上，核酸样本靶序列...
【技术保护点】
一种环介导等温扩增与核酸杂交的同步反应方法，其特征包括：第一步：将核酸杂交探针标记在芯片的表面，用无水甲苯稀释到1v/v%浓度的3?氨丙基三乙氧基硅烷在室温条件下处理芯片的表面2小时，然后用无水甲苯清洗芯片洗表面3次；接着在预定的杂交探针修饰区域滴加1v/v%浓度的戊二醛水溶液，室温放置1小时后用水洗涤3次；随后将1μL浓度为14μM核酸杂交探针滴加在修饰区域，封闭后放置室温1小时；接着在其表面滴加20mM甘氨酸水溶液，以封闭表面未与杂交探针发生反应的多余醛基，室温放置1小时，最后用超纯水清洗表面3次，晾干残余水分即得；第二步：环介导等温扩增与核酸杂交的同步反应，将25μL如下LAMP反应体系液滴加在基因芯片的探针修饰区域，封闭后，将芯片放置在63℃的恒温箱中进行核酸扩增和核酸杂交，反应1小时之后用水清洗三次，去除未与探针杂交结合的LAMP产物，LAMP反应体系液由如下成分组成：所述10×LAMP缓冲液由以下成分组成：200mM?Tris?HCl、100mM?KCl、100mM(NH4)2SO4、80mM?MgSO4和1%Triton?X?100，25℃时pH=8.8；第三步：检测，进...
【技术特征摘要】
1.一种环介导等温扩增与核酸杂交的同步反应方法，其特征包括: 第一步:将核酸杂交探针标记在芯片的表面， 用无水甲苯稀释到lv/v%浓度的3-氨丙基三乙氧基硅烷在室温条件下处理芯片的表面2小时，然后用无水甲苯清洗芯片洗表面3次；接着在预定的杂交探针修饰区域滴加Iv/v%浓度的戊二醛水溶液,室温放置I小时后用水洗涤3次；随后将I μ L浓度为14 μ M核酸杂交探针滴加在修饰区域，封闭后放置室温I小时；接着在其表面滴加20mM甘氨酸水溶液，以封闭表面未与杂交探针发生反应的多余醛基，室温放置I小时，最后用超纯水清洗表面3次，晾干残余水分即得； 第二步:环介导等温扩增与核酸杂交的同步反应， 将25μ L如下LAMP反应体系液滴加在基因芯片的探针修饰区域，封闭后，将芯片放置在63°C的恒温箱中进行核酸扩增和核酸杂交，反应I小时之后用水清洗三次，去除未与探针杂交结合的LAMP产物， LA...
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