Cas9核酸酶及其制备方法和用途技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，特别是涉及一种Cas9核酸酶及其制备方法和用途。本发明专利技术提供的Cas9核酸酶包含野生型Cas9核酸酶在第915位和/或第976位发生一种或多种氨基酸突变所形成的多肽；所述野生型Cas9核酸酶的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。本发明专利技术提供中Cas9核酸酶(DE Cas9)与野生型Cas9核酸酶相比，采用DE Cas9对DNA双链进行切割可产生更大比例的DNA缺失(deletion)，更少比例DNA插入(insertion)，能够改变Cas9核酸酶DNA编辑和修复结果。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物，特别是涉及一种cas9核酸酶及其制备方法和用途。

技术介绍

1、自从人类基因组计划(human genome project)和dna元件百科全书(encyclopedia of dna elements)项目的完成，科学家们分析和鉴定了大量的基因组中的基因和dna调控元件[1,2]。在基因表达调控中起重要作用的dna调控元件包括启动子、增强子、沉默子和绝缘子等。然而，多数调控元件的功能并没有得到实验的验证和阐明[2-8]。探索基因和dna调控元件的功能，可以通过遗传学dna片段编辑来进行研究。

2、早期的基因编辑和基因功能修饰是通过基因转座和转基因实现的[9-14]。伴随测序技术的发展反向遗传学被应用于对基因组进行特定的突变[15,16]。特别是依赖于同源重组的基因打靶小鼠迅速地被应用到科学研究中[15,17,18]。此外，在小鼠和斑马鱼中dna片段的反转和重复被应用于去研究特定的基因组结构变化[19-24]。

3、近几年，源于细菌和古菌的ⅱ型成簇规律间隔短回文重复系统[clusteredregularly i本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种Cas9核酸酶，其特征在于，所述Cas9核酸酶包含野生型Cas9核酸酶在第915位和/或第976位发生一种或多种氨基酸突变所形成的多肽；所述野生型Cas9核酸酶的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。

2.根据权利要求1所述的Cas9核酸酶，其特征在于，所述氨基酸突变包含如下特征中的一种或多种：

3.根据权利要求1所述的Cas9核酸酶，其特征在于，所述Cas9核酸酶包含氨基酸序列如SEQ ID No.1的多肽。

4.一种分离的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸编码如权利要求1-3任一所述的Cas9核酸酶。

5.根据权利要求4所述的...

【技术特征摘要】

1.一种cas9核酸酶，其特征在于，所述cas9核酸酶包含野生型cas9核酸酶在第915位和/或第976位发生一种或多种氨基酸突变所形成的多肽；所述野生型cas9核酸酶的氨基酸序列如seq id no.2所示。

2.根据权利要求1所述的cas9核酸酶，其特征在于，所述氨基酸突变包含如下特征中的一种或多种：

3.根据权利要求1所述的cas9核酸酶，其特征在于，所述cas9核酸酶包含氨基酸序列如seq id no.1的多肽。

4.一种分离的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸编码如权利要求1-3任一所述的cas9核酸酶。

5.根据权利要求4所述的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸包含核苷酸序列如seqidno.3所示的核酸片段。

6.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体包含如权利要求4-5任一所述的多核苷酸和质粒骨架。

7.一种基因编辑系统，其特征在于，所述基因编辑系统包含如权利要求1-3任一所述的核酸酶，以及grna或编码grna的核酸片段；或，包含如权利要求4-5任一所述的多核苷酸，以及grna或编码grna的多核苷酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴强，刘雨哲，李金环，
申请(专利权)人：上海交通大学，
类型：发明
国别省市：