一种去甲氯胺酮人工抗原的制备方法技术

本发明专利技术涉及一种去甲氯胺酮人工抗原，尤其涉及一种苯胺绿人工抗原的制备方法。按以下步骤进行：制备人工半抗原---NKET半抗原的合成→制备去甲氯胺酮人工抗原---去甲氯胺酮-BSA的合成。一种去甲氯胺酮人工抗原的制备方法，合成工艺先进，特异性强，得到的去甲氯胺酮人工抗原用于免疫新西兰白兔，检测结果表明，去甲氯胺酮人工抗原的免疫血清的效价为1：72000，完全可用于免疫分析中，为去甲氯胺酮的检测提供更加方便快速准确的途径。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种去甲氯胺酮人工抗原的制备方法，其特征在于按以下步骤进行：(1)、?制备人工半抗原????NKET半抗原的合成:?(a)?、将四氢呋喃和吡啶按照体积比为4：1相混合至完全溶解得到溶液A，放置在温度为4℃?的冰箱内备用；?????(b)、?取50?mg?的NKET溶液、15mg的氰基硼氢化钠溶液和?200ul?15％?的琥珀醛酸溶液，分别滴加溶液A?30ml、溶液A?5ml和溶液A?5ml，放置在温度为4℃?的冰箱内备用；??????(c)、?将准备好的琥珀醛酸溶液逐滴加入到NKET溶液中，在温度为4?℃下进行磁力搅拌，反应时间为10min；再逐滴加入准备好的氰基硼氢化钠溶液，形成反应混合物，将反应混合物在温度为4℃下进行磁力搅拌，磁力搅拌的时间为4h，直至反应完全后，将反应混合物低温旋转蒸发至干，所得产物即为NKET半抗原；(2)?、制备去甲氯胺酮人工抗原???去甲氯胺酮?BSA的合成:(d)?、取上述NKET半抗原20mg，溶于2?mL的?N，N?二甲基甲酰胺溶液中，得到B液，常温放置备用；????(e)?、将牛血清蛋白溶于PBS缓冲液中，得到浓度为5mg/ml的C液；??(f)?、在常温磁力搅拌条件下,?将100mg?的1一3一乙基碳二亚胺溶液滴加到B液，搅拌反应20min后，形成反应液，将该反应液滴加至10ml的C液中，再加入108mg的N?羟基硫代琥珀酰亚胺，在室温下进行搅拌过夜，形成人工抗原混合液；（g）、制备钠离子浓度为0.1mol/L的PBS缓冲液，pH为7.2～7.4；????(h)?、将人工抗原混合液在PBS缓冲液中进行透析，在温度为4℃下进行搅拌透析,每4小时换一次PBS缓冲液,透析时间为2天,形成透析液，紫外扫描透析液至无小分子吸收峰时,将产物离心后取上清,在无菌条件下通过0.2μm?的滤膜，即得到人工抗原：去甲氯胺酮?牛血清蛋白。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：沈海英，徐建明，
申请(专利权)人：杭州宏泰生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：