一种特异性沙丁胺醇人工抗原的合成方法技术

一种特异性沙丁胺醇人工抗原的合成方法，属于生物化工技术领域。本发明专利技术包括如下步骤：沙丁胺醇通过甲醛溶液活化，酚羟基邻位连接上6-氨基己酸，得到沙丁胺醇半抗原；将沙丁胺醇半抗原上的羧基与载体蛋白上的氨基进行偶联，得到沙丁胺醇人工抗原。本发明专利技术弥补了现有沙丁胺醇抗原合成技术的不足和缺陷，得到了一种高特异性的沙丁胺醇人工抗原，产生的抗体特异性高、灵敏度高，实验结果表明，用本发明专利技术的沙丁胺醇人工抗原免疫动物得到的抗血清效价可达80000，检测限为0.5ng/mL，半抑制浓度IC50为5ng/mL。本发明专利技术的抗原或抗体可用于建立酶联免疫吸附分析方法和胶体金试纸快速检测法，从而用于快速检测食品中的沙丁胺醇残留，具有广阔的应用前景。

【技术实现步骤摘要】

一种高特异性沙丁胺醇人工抗原的合成方法，属于生物化工

技术介绍
沙丁胺醇(salbutamol)，是一种短效β 2肾上腺素受体激动剂，用作平喘药。添加微量沙丁胺醇于牲畜饲料内，可以增加牲畜的瘦肉量及换肉率、减少脂肪，但是其毒性远高于具有相同功能的莱克多巴胺。2002年9月10起在中国境内禁止在饲料和动物饮用水中使用沙丁胺醇。沙丁胺醇结构式如式(I)。

【技术保护点】
一种特异性沙丁胺醇人工抗原的合成方法，其特征在于以沙丁胺醇为原料，沙丁胺醇与6?氨基己酸反应合成沙丁胺醇半抗原即化合物I，化合物I通过1?乙基?3?(3?二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺EDC与N?羟基琥珀酰亚胺NHS活化、或者通过三正丁胺与氯甲酸异丁酯活化，再与载体蛋白进行偶联制得沙丁胺醇人工抗原即化合物Ⅱ，合成路线如反应式所示：合成工艺为：（1）沙丁胺醇半抗原的制备沙丁胺醇加入乙醇溶解，在室温下，滴加质量浓度37%的甲醛溶液反应，沙丁胺醇:甲醛的摩尔比为1:1，反应30min，再加入与沙丁胺醇等摩尔的6?氨基己酸，搅拌反应6h；将反应液pH调节至2～3，加入乙酸乙酯萃取，有机相37℃旋转蒸发干，得到沙丁胺醇半抗原，即化合物I；（2）沙丁胺醇人工抗原的制备（A）将化合物I用N,N?二甲基甲酰胺DMF溶解，化合物I与N?羟基琥珀酰亚胺NHS和1?乙基?3?(3?二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺EDC在4℃避光搅拌反应1h，化合物I:N?羟基琥珀酰亚胺NHS:1?乙基?3?(3?二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺EDC的摩尔比为1:1.5:2，再在室温反应12h，得活化的沙丁胺醇半抗原溶液；取牛血清白蛋白，化合物I与牛血清白蛋白的摩尔比为80:1，将牛血清白蛋白用0.1M?pH9.6碳酸盐缓冲液溶解，溶解后的牛血清白蛋白浓度大于3mg/mL，且碳酸盐缓冲液与N,N?二甲基甲酰胺DMF的体积比例为5:1；将活化的沙丁胺醇半抗原溶液慢速滴加到牛血清白蛋白溶液中，室温下反应24h，用PBS缓冲液透析2天，期间更换PBS缓冲液4次，即得到沙丁胺醇人工抗原，即化合物 Ⅱ；或（B）将化合物I用N,N?二甲基甲酰胺DMF溶解，化合物I与三正丁胺和氯甲酸异丁酯0℃反应1h，化合物I:三正丁胺:氯甲酸异丁酯的摩尔比为1:1.2:1.2，得活化的沙丁胺醇半抗原溶液；取牛血清白蛋白，化合物I与牛血清白蛋白的摩尔比为80:1，将牛血清白蛋白用0.1M?pH9.6碳酸盐缓冲液溶解，0℃预冷30min，溶解后的牛血清白蛋白浓度大于3mg/mL，且碳酸盐缓冲液与N,N?二甲基甲酰胺DMF的体积比例为5:1；在0℃条件下，将活化的半抗原溶液慢速滴加到牛血清白蛋白溶液中，0℃条件下反应1h，然后室温下反应24h，用PBS缓冲液透析2天，期间更换PBS缓冲液4次，即得到沙丁胺醇人工抗原，即化合物Ⅱ。FDA00002978066900011.jpg...

【技术特征摘要】
1.一种特异性沙丁胺醇人工抗原的合成方法，其特征在于以沙丁胺醇为原料，沙丁胺醇与6-氨基己酸反应合成沙丁胺醇半抗原即化合物I，化合物I通过1-乙基-3-(3- 二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺EDC与N-羟基琥珀酰亚胺NHS活化、或者通过三正丁胺与氯甲酸异丁酯活化，再与载体蛋白进行偶联制得沙丁胺醇人工抗原即化合物II，合成路线如反应式所示:O2.根据权利要求1所述的特异性沙丁胺醇人工抗原的合成方法，其特征在于:所述载体蛋白为牛血清白蛋白BSA、阳离子化的牛血清白蛋白cBSA、匙孔血蓝蛋白KLH、血蓝蛋白...

【专利技术属性】
技术研发人员：胥传来，刘丽强，王利兵，匡华，徐利广，马伟，胡拥明，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：