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一种特异性莱克多巴胺人工抗原的合成方法技术

技术编号:8902930 阅读:270 留言:0更新日期:2013-07-10 23:39
一种特异性莱克多巴胺人工抗原的合成方法,属于生物化工技术领域。本发明专利技术包括如下步骤:将章鱼胺和乙酰丙酸乙酯混合在甲醇溶液中,在三乙胺催化下,通过氰基硼氢化钠还原,反应得到中间产物,将中间产物在碱性条件下水解,得到含活性羧基的分子,该分子与莱克多巴胺分子的同源性大于70%,可作为莱克多巴胺的半抗原,将半抗原再与载体蛋白进行偶联,得到莱克多巴胺人工抗原。实验结果表明,用本发明专利技术的抗原免疫动物产生的抗体特异性高、灵敏度高,得到的抗血清效价可达64000,检测限为0.1ng/mL,半抑制浓度IC50为1ng/mL。本发明专利技术的抗原或抗体可用于建立酶联免疫吸附分析方法和胶体金试纸快速检测法,用于快速检测食品中的莱克多巴胺残留,应用前景广阔。

【技术实现步骤摘要】

一种高特异性莱克多巴胺人工抗原的合成方法,属于生物化工

技术介绍
莱克多巴胺(Ractopamine)是一种人工合成的β肾上腺受体激动剂,可用于治疗充血性心力衰竭症、肌肉萎缩症,增长肌肉,减少脂肪蓄积,并对胎儿和新生儿生长有益。其分子结构式为:权利要求1.,其特征在于以章鱼胺和乙酰丙酸乙酯为原料合成莱克多巴胺半抗原即化合物I,化合物I通过1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺EDC与N-羟基琥珀酰亚胺NHS活化、或者通过三正丁胺与氯甲酸异丁酯活化,再与载体蛋白进行偶联制得莱克多巴胺人工抗原即化合物II,合成路线如反应式所示:2.根据权利要求1所述莱克多巴胺人工抗原的合成方法,其特征在于:所述的载体蛋白为:牛血清白蛋白BSA,或匙孔血蓝蛋白KLH、血蓝蛋白LPH、鸡卵清白蛋白OVA、人血清白蛋白HSA之一种。3.根据权利要求1所述莱克多巴胺人工抗原的合成方法,其特征在于:化合物I莱克多巴胺半抗原,其分子结构式如式I所示:4.根据权利要求1所述莱克多巴胺人工抗原的合成方法,其特征在于:化合物II莱克多巴胺人工抗原,其分子结构式如式II所示:5.用权利要求1所述方法合成的莱克多巴胺人工抗原的应用,其特征在于制备莱克多巴胺抗体,所述抗体为多克隆抗体和/或单克隆抗体。6.用权利要求1所述方法合成的莱克多巴胺人工抗原的应用,其特征在于检测食品中莱克多巴胺残留。全文摘要,属于生物化工
本专利技术包括如下步骤将章鱼胺和乙酰丙酸乙酯混合在甲醇溶液中,在三乙胺催化下,通过氰基硼氢化钠还原,反应得到中间产物,将中间产物在碱性条件下水解,得到含活性羧基的分子,该分子与莱克多巴胺分子的同源性大于70%,可作为莱克多巴胺的半抗原,将半抗原再与载体蛋白进行偶联,得到莱克多巴胺人工抗原。实验结果表明,用本专利技术的抗原免疫动物产生的抗体特异性高、灵敏度高,得到的抗血清效价可达64000,检测限为0.1ng/mL,半抑制浓度IC50为1ng/mL。本专利技术的抗原或抗体可用于建立酶联免疫吸附分析方法和胶体金试纸快速检测法,用于快速检测食品中的莱克多巴胺残留,应用前景广阔。文档编号C07K14/795GK103193883SQ201310106888公开日2013年7月10日 申请日期2013年3月28日 优先权日2013年3月28日专利技术者胥传来, 刘丽强, 王利兵, 匡华, 徐利广, 马伟, 胡拥明 申请人:江南大学本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种特异性莱克多巴胺人工抗原的合成方法,其特征在于以章鱼胺和乙酰丙酸乙酯为原料合成莱克多巴胺半抗原即化合物I,化合物I通过1?乙基?3?(3?二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺EDC与N?羟基琥珀酰亚胺NHS活化、或者通过三正丁胺与氯甲酸异丁酯活化,再与载体蛋白进行偶联制得莱克多巴胺人工抗原即化合物Ⅱ,合成路线如反应式所示:步骤为:(1)莱克多巴胺半抗原的制备:将章鱼胺和乙酰丙酸乙酯按摩尔比1:1混合,在甲醇溶液中,每1mmol章鱼胺用0.5mL三乙胺催化下,室温条件下,通过氰基硼氢化钠还原,每1mmol章鱼胺用1.1mmol氰基硼氢化钠还原反应12h得到中间产物;将中间产物在碱性条件水解,得到含活性羧基的分子,作为莱克多巴胺半抗原,即化合物I;(2)莱克多巴胺人工抗原的制备:(A)将化合物I用N,N?二甲基甲酰胺DMF溶解,化合物I与N?羟基琥珀酰亚胺NHS,1?乙基?3?(3?二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺EDC的摩尔比为1:1.5:2,在4℃避光搅拌反应1h,再在室温反应12h,得活化的莱克多巴胺半抗原溶液;取牛血清白蛋白,化合物I与牛血清白蛋白的摩尔比为80:1,将牛血清白蛋白用0.1M?pH9.6碳酸盐缓冲液溶解,其中溶解后的牛血清白蛋白浓度大于3mg/mL,且碳酸盐缓冲液与N,N?二甲基甲酰胺DMF的体积比例为5:1;将活化的莱克多巴胺半抗原溶液慢速滴加到牛血清白蛋白溶液中,室温下反应24h,用PBS缓冲液透析2天,期间更换PBS缓冲液4次,即得到莱克多巴胺人工抗原,即化合物Ⅱ;或(B)将化合物I用N,N?二甲基甲酰胺DMF溶解,化合物I与三正丁胺, 氯甲酸异丁酯的摩尔比为1:1.2:1.2,0℃反应1h,得活化的莱克多巴胺半抗原溶液;取牛血清白蛋白,化合物I与牛血清白蛋白的摩尔比为80:1,将牛血清白蛋白用0.1M?pH9.6碳酸盐缓冲液溶解,0℃预冷30min,其中溶解后的牛血清白蛋白浓度大于3mg/mL,且碳酸盐缓冲液与N,N?二甲基甲酰胺(DMF)的体积比例为5:1;在0℃条件下,将活化的莱克多巴胺半抗原溶液慢速滴加到牛血清白蛋白溶液中,0℃条件下反应1h,然后室温反应24h,用PBS缓冲液透析2天,期间更换PBS缓冲液4次,即得到莱克多巴胺人工抗原,即化合物Ⅱ。FDA00002978119700011.jpg...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:胥传来刘丽强王利兵匡华徐利广马伟胡拥明
申请(专利权)人:江南大学
类型:发明
国别省市:

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