一种等温扩增核酸片段的方法技术

本发明专利技术公开了一对引物等温扩增核酸片段的方法，使用与核酸片断3个区域互补的一对引物，在DNA聚合酶的作用下通过链替代反应等温扩增核酸片段；针对特异性靶序列，采用PrimerPremier5.0等引物设计软件，设计两对类似于巢式PCR又不具有重叠序列的引物F1、F2、R2、R1，其中，F2的互补序列F2C连在F1的5’端，或R2的互补序列R2C连在R1的5’端。一对引物与核酸片段的3个区域互补，在DNA聚合酶的作用下通过链替代反应等温扩增核酸片段。该方法可作为特异基因片段的快速扩增检测手段。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及，特别是用与靶序列三个区域互补的一对引物通过链替代反应扩增核酸片段，该方法可作为特异基因片段的快速扩增检测手段。
技术介绍
随着现代分子生物学和分子技术的发展，研究开发了许多核酸扩增技术。其中核酸环介导等温扩增技术(专利ZL 00818262.0, ZL01810370.7，ZL01812204.3，ZL02815992.6，ZL200610080379.7)，由于其具有特异性强、灵敏度高、反应速度快的特点，在核酸特异性扩增和检测领域具有取代PCR的趋势，成为生命科学领域研究的热点之一。核酸环介导等温扩增的主要原理是基于对靶序列的6个区域设计2对特异引物，利用一种链置换DNA聚合酶(Bst DNA polymerase),在65°C左右的等温条件下保温约60分钟，即可完成核酸扩增反应，存在环引物的情况下，扩增时间可进一步缩短为40分钟，同时具备不需要热循环、扩增效率更高、不需要特殊仪器等优点。然而环介导等温扩增技术需要针对核酸片段的6-8个区域设计引物，其中至少核酸片段的6个区域(F3C、F2C、F1、B1、B2C和B3C)与2对引物(实质是3对引物:F3, F1C_本文档来自技高网...

【技术保护点】
一对引物等温扩增核酸片段的方法，其特征在于：使用与核酸片断3个区域互补的一对引物，在DNA聚合酶的作用下通过链替代反应等温扩增核酸片段。

【技术特征摘要】
1.一对引物等温扩增核酸片段的方法，其特征在于:使用与核酸片断3个区域互补的一对引物，在DNA聚合酶的作用下通过链替代反应等温扩增核酸片段。2.根据权利要求1所述的一对引物等温扩增核酸片段的方法，其特征在于:针对特异性革El序列，采用PrimerPremier5.0等引物设计软件，设计两对类似于巢式PCR又不具有重叠序列的引物F1、F2、R2、R1，其中，F2的互补序列F2C连在Fl的5’端，或R2的互补序列R2C连在Rl的5，端。3.根据权利要求2所述的一对引物等温扩增核酸片段的方法，其特征在于:所述的引物设计方法，引物组合方式分别为F2C-F1、R1 ；FUR2C-R1 ;任何一种组合方式都可以实现核酸片段的等温扩...

【专利技术属性】
技术研发人员：王德国，曲海涛，张文超，张小辉，王树芬，郭山鹿，
申请(专利权)人：许昌学院，
类型：发明
国别省市：