【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种从哺乳动物或鸟类粪便中提取并纯化总DNA的方法。
技术介绍
近二十年，研究者广泛采用野生动物的粪便、毛发、唾液、尿液、食物残渣、卵壳、遗骸、博物馆标本等非损伤性样本获得目标物种的遗传物质，解决了许多传统采样技术难以解决的问题，促进了野生动物分子遗传学的研究。比较而言，采集野生动物的粪便具有采样方便、采样量大、不损伤动物且不受时空限制的特点，成为研究者最为青睐的采样途径。动物粪便内携带肠道脱落细胞，可用于提取目标动物的DNA。粪便成分十分复杂，还含有细菌、真菌、寄生虫、病毒及食物DNA，研究者必须通过设计特异的弓I物获取目标动物的DNA。然而，在提取粪便内目标动物的DNA时，会将酶、胆盐、胆红素、腐殖质和色素等PCR抑制物一同提取出来，这些PCR抑制物严重干扰后续的PCR反应，使得实验成本增加，试验周期拉长，甚至实验失败。这是令研究者最感棘手的问题。因此，通过粪便DNA途径进行任何动物的遗传分析时，研究者必须选择合适的粪便DNA提取方法。迄今，国内外研究者发展了多种粪便DNA提取方法，提取原理包括:(I)硫氰酸胍(GuSCN)-二氧化硅(SiO2...
【技术保护点】
一种从动物粪便中提取并纯化总DNA的方法，包括如下步骤：（1）样品前处理：为如下A）或B）：A）若待测粪便成形，则进行如下A1）或A2）：A1）若所述粪便体积大于等于1×1×1cm3，且所述粪便表面有粘液层，则取所述粘液层作为待测样品；A2）若所述粪便体积小于1×1×1cm3，或所述粪便表面没有粘液层，则将所述粪便用液氮研磨，将研磨后样品作为待测样品；B）若待测粪便不成形，则将所述粪便用液氮研磨，将研磨后样品作为待测样品；（2）从步骤（1）所得待测样品中提取待纯化总DNA：为如下（a）?（d）：（a）将所述待测样品置于pH8.0的缓冲液中，混匀后于56?60℃保温8?12m...
【技术特征摘要】
1.一种从动物粪便中提取并纯化总DNA的方法，包括如下步骤: (1)样品前处理:为如下A)或B): A)若待测粪便成形，则进行如下Al)或A2): Al)若所述粪便体积大于等于IXlX Icm3,且所述粪便表面有粘液层，则取所述粘液层作为待测样品； A2)若所述粪便体积小于IXlX Icm3,或所述粪便表面没有粘液层，则将所述粪便用液氮研磨，将研磨后样品作为待测样品； B)若待测粪便不成形，则将所述粪便用液氮研磨，将研磨后样品作为待测样品； (2)从步骤(I)所得待测样品中提取待纯化总DNA:为如下(a) - (d): (a)将所述待测样品置于pH8.0的缓冲液中，混匀后于56-60°C保温8-12min，得到样品混合液； 所述待测样品与所述pH8.0的缓冲液的配比为0.3g:lmL ； (b)将步骤(a)得到的样品混合液以500g离心5-10min，取上清液； (c)除去步骤(b) 得到的上清液中的蛋白，得到样品裂解液； Cd)对步骤(c)得到的样品裂解液进行DNA抽提和DNA沉淀，得到待纯化总DNA ； (3)对步骤(2)得到的待纯化总DNA进行纯化:为如下(I)- (II): (I)将步骤(2)得到的待纯化总DNA进行琼脂糖凝胶电泳，切下含有所述待纯化总DNA的胶块，向所述胶块中加入溶胶液，于65-75°C溶胶，得到待过柱样品液；所述胶块与溶胶液的配比为Img:3μ I ； (II)将步骤(I)得到的待过柱样品液加入到硅胶膜DNA吸附柱内，进行DNA纯化，得到纯化后的总DNA样品。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于:在步骤(2)(c)中，所述除去步骤(b)得到的上清液中的蛋白，包括如下步骤:向步骤(2) (b)得到的上清液中加入蛋白酶K和十二烷基磺酸钠，于54-58 °C裂解1-1.5h ; 所述上清液、所述蛋白酶K和所述十二烧基磺酸钠的配比为0.6mL:150 μ g:15mg。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于:在步骤(2)(d)中，所述DNA抽提采用的抽提液为苯酚-氯仿-异戊醇和/或氯仿-异戊醇；所述苯酚-氯仿-异戊醇是由苯酚、氯仿和异戊醇按照体积比25:24:1的比例混合而成的混合液；所述氯仿...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘刚，胡德夫，刘宝庆，李林海，徐超群，
申请(专利权)人：北京林业大学，
类型：发明
国别省市：
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