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编辑家蚕基因组TALE重复区的高效组装方法及其骨架载体技术

技术编号:8761134 阅读:252 留言:0更新日期:2013-06-06 22:52
本发明专利技术公开了编辑家蚕基因组TALE重复区的高效组装方法,具体为:先将含X个碱基的随机序列顺序编号,然后按编号分成Y个组,每组含有1-4个碱基;然后设计扩增TALE重复单元的引物对,该引物对含有无缝连接相邻TALE重复单元的II型限制性内切酶识别位点和特异接头,再利用设计的引物对分别以4种RVD重复单元为模板进行PCR扩增,得PCR产物库;将碱基数为X的靶序列按相同方法进行编号并分组,然后从PCR产物库中取与靶序列编号相同的并识别相应碱基的PCR产物,将同组的PCR产物混合后进行GoldenGate连接,然后将连接产物再进行GoldenGate连接,得含X个重复单元的TALE重复区;利用本发明专利技术的方法,不需要合成大量的DNA,成本低,能用于制备编辑家蚕基因组的TALE重复区。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
编辑家蚕基因组TALE重复区的高效组装方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)将含X个碱基的随机序列顺序编号,然后按编号顺序分成Y个组,每组含有1?4个碱基;其中X大于或等于10;(2)设计扩增TALE重复单元的引物对,所述引物对含有无缝连接相邻TALE重复单元的II型限制性内切酶识别位点和特异接头,然后利用设计的引物对分别以4种TALE重复单元为模板进行PCR扩增,得PCR产物库;(3)将碱基数为X的靶序列按步骤(1)的方法进行编号并分组,然后从PCR产物库中取与所述靶序列编号相同的并识别相应碱基的PCR产物,将同组PCR产物混合后进行GoldenGate连接,然后将各组的连接产物再进行Gol...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:夏庆友王峰徐汉福马三垣王元成袁林赵萍向仲怀
申请(专利权)人:西南大学
类型:发明
国别省市:

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