高产量分离包括小靶核酸在内的靶核酸的方法技术

本发明专利技术涉及从样品分离包括小靶核酸在内的靶核酸的方法，所述方法包括至少下列步骤a)通过将所述样品经过柱来使至少一部分包括小靶核酸在内的靶核酸结合所述柱中含有的核酸结合固相，b)在靶核酸结合所述固相时对核酸结合固相进行酶和/或化学处理，c)收集所述步骤b)处理中从所述固相释放的至少一部分小靶核酸作为流出物，d)将含小靶核酸的混合有回收溶液的所述流出物接触核酸结合固相，用以将所含小靶核酸结合所述核酸结合固相，e)可选进行洗脱。本发明专利技术引起分离靶核酸中的小靶核酸产量显著增加，因为其能有效捕获和回收小靶核酸。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】本专利技术涉及从样品分离包括小靶核酸在内的靶核酸的方法，且特定提供从样品中以高产量有效分离小靶核酸的方式。研究来自各种组织、体液和生物体的1000或500核苷酸或更小范围的小核酸是引起极大兴趣的领域且将来仍会保持。小核酸特定包括但不限于小RNA如微RNA (miRNA)和小干扰RNA分子等，二者都对基因表达有显著效果。此外，对参与mRNA和rRNA加工的其他小核RNA和小核仁RNA(如snRNA和snoRNA)以及小DNA分子也感兴趣。此外，长度为1000或500核苷酸或更小的核酸通常还作为降解产物包含在特定样品中，所述样品如福尔马林固定和石蜡包埋的样品(FFPE样品)，因为各保存措施可能破坏DNA和/或RNA完整性。随着对各小核酸的兴趣不断增大，已改良标准分离过程以促进分离小核酸并特定提高小核酸产量。所述用作分离DNA或RNA标准的已知操作通常对于分离小核酸不理想，因为小核酸通常不能在分离过程中用标准方法有效捕获和洗脱。因此，用标准过程从样品中分离靶核酸一般不包括足够量的小靶核酸并从而提供可接受的产量，这是因为小核酸在核酸分离过程中不结合或丧失。因此，需要改善的技术用于有效分离小靶核本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.09.02 EP 10009130.51.一种从样品分离包括小靶核酸在内的靶核酸的方法，所述方法包括至少下列步骤: a)通过将所述样品经过柱来使至少一部分包括小靶核酸在内的靶核酸结合所述柱中含有的核酸结合固相， b)在所述靶核酸结合所述固相时对核酸结合固相进行酶和/或化学处理， c)收集所述步骤b)处理中从所述固相释放的至少一部分小靶核酸作为流出物， d)将含小靶核酸的混合有回收溶液的所述流出物接触核酸结合固相，用以将所含小靶核酸结合所述核酸结合固相， e)可选进行洗脱。2.按权利要求1所述的方法，其特征在于，用于步骤a)的所述核酸结合固相是膜。3.按权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤c)中回收溶液通过所述柱且收集含小靶核酸和所述回收溶液的流出物并用于步骤d)，优选用于使流出物所含的小靶核酸重结合步骤a)所用的核酸结合固相。4.一种从样品分离包括小靶核酸在内的靶核酸的方法，所述方法包括至少下列步骤: a)通过将所述样品经过核酸结合膜来使至少一部分包括小靶核酸在内的靶核酸结合所述膜， b)在所述靶核酸 结合所述膜时对膜进行涉及水溶液的处理， c)使回收溶液通过所述膜并收集含小靶核酸的流出物， d)使所述流出物通过步骤a)的膜以将所含小靶核酸重结合所述膜， e)可选从所述膜洗脱包括小核酸在内的靶核酸。5.按权利要求1-4中一项或多项所述的方法，其特征在于，所述酶和/或化学处理在步骤b)中进行，包含使用水溶液且选自核酸酶消化步骤、蛋白消化步骤、脂酶消化步骤和靶核酸修饰步骤。6.按权利要求1-5中一项或多项所述的方法，其特征在于，所述步骤b)中进行的处理涉及引起至少部分靶核酸，尤其是小靶核酸从所述核酸结合固相释放的条件。7.按权利要求1-6中一项或多项所述的方法,其特征在于,所述回收溶液具有一种或多种下列特征: a)提供适于使小核酸结合步骤d)所用的核酸结合固相的条件； b)就结合小核酸而言，提供比步骤a)所用的结合条件更强的结合条件； c)提供适于使小RNA结合步骤d)所用的核酸结合固相的条件； d)提供适于使小DNA结合步骤d)所用的核酸结合固相的条件； e)包含至少一种离...

【专利技术属性】
技术研发人员：V·霍兰德，G·克里斯托夫，M·施卢姆贝格尔，
申请(专利权)人：恰根有限公司，
类型：
国别省市：