一个高效抽提茄科类种子RNA的方法技术

本发明专利技术公开了一种高效提取茄科类种子RNA的方法，该方法在于RNA抽提操作步骤难度较低、效率较高，此发明专利技术不仅可以用来抽提番茄等茄科类植物的新鲜种子，还可以抽提其干种子，它解决了常规方法提取茄科类种子时蛋白质残留量过高和RNA降解严重的难题，本发明专利技术方法可以直接用于抽提茄科类种子的RNA，具有技术易于掌握、应用性能高的优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于分子生物学领域，具体是从茄科类植物新鲜种子或者干种子中抽提RNA的方法。
技术介绍
人类食物的70%是直接来源于植物种子，种子还是植物遗传资源的主要载体。在种子形成、萌发和幼苗建成等领域的研究中，基因动态表达、cDNA文库构建、基因克隆、体外翻译等以RNA分子为基础的分子生物学研究需要足够量和高质量的RNA，因此高效、快速的RNA提取方法成为一种关键技术。RNA分子的种类和数量具有鲜明的时间性和空间性，研究中常常必须使用特定的研究材料。植物材料中所含有的多糖、蛋白质、脂肪和一些次生代谢物会在很大程度上干扰RNA的提取质量和回收效率。而植物种子的成分较其它植物组织更为复杂，种子中含有大量的多糖、储藏蛋白、脂肪，多数还含有酚、酮、甙等次生代谢物，这给高质量RNA的提取造成了较大难度。目前种子RNA提取方法主要有纤维柱法(Pramanik SK, ReynoldsTL， Maclsaac SAj et al Rapid and efficient purification of seed messengerRNA without phenol: chloroform ext本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种高效抽提茄科类种子RNA的方法，其特征在于按如下步骤进行：取茄科类植物的新鲜种子或干种子用质量百分比浓度为10~15%的次氯酸钠消毒10~15min后，用灭菌水清洗3~4次，将种子切开，加入液氮充分研磨成粉状；取研磨后的样品80~100mg，加入灭菌的提取液和苯酚各100~120ul，充分涡旋，在冰水混合物中冰浴10~20min，离心；离心后吸取上清液，按每毫升上清液添加500~600ul三氯甲烷/异戊醇混合液的比例在上清液中加入三氯甲烷/异戊醇混合液，充分涡旋，离心收集最上层的上清液，然后按每毫升上清液添加500~600ul苯酚/三氯甲烷混合液的比例在上清液中加入苯酚/三氯甲烷混合液，再...

【技术特征摘要】
1.一种高效抽提茄科类种子RNA的方法，其特征在于按如下步骤进行: 取茄科类植物的新鲜种子或干种子用质量百分比浓度为1(T15%的次氯酸钠消毒l(Tl5min后，用灭菌水清洗3 4次，将种子切开，加入液氮充分研磨成粉状； 取研磨后的样品8(Tl00mg，加入灭菌的提取液和苯酚各10(Tl20ul，充分涡旋，在冰水混合物中冰浴l(T20min，离心； 离心后吸取上清液，按每毫升上清液添加50(T600ul三氯甲烷/异戊醇混合液的比例在上清液中加入三氯甲烷/异戊醇混合液，充分涡旋，离心收集最上层的上清液，然后按每毫升上清液添加50(T600ul苯酚/三氯甲烷混合液的比例在上清液中加入苯酚/三氯甲烷混合液，再抽提一次，离心，收集上清液； 按每毫升上清液中添加Iml异丙醇的比例在上清液中加入预冷至_20°C的...

【专利技术属性】
技术研发人员：韩芹芹，高凯，宋玉竹，张金阳，
申请(专利权)人：昆明理工大学，
类型：发明
国别省市：