【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种适用于全基因组测序的婴幼儿唾液内基因组DNA的提取方法。
技术介绍
在分子生物学技术的研究中，关键在于DNA的提取。常规的分子生物学操作如PCR、酶切、杂交，对DNA的质量要求不高，一般分子生物学实验指导书上的常规方法如浓盐法、酸碱抽提法等即可满足其要求。随着全基因组随机测序方法的成熟，计算机拼装算法的发展，基因组时代已经到来，从基因组学角度实现传统医学、保健等方面的转化，将有望使基于基因组测试的个体化诊疗、健康保健方案成为可能。目前基于基因组测序技术的遗传疾病诊断、个体化治疗、遗传天赋基因检测以及基因营养学检测等已开始为广大群众所接受。全基因组测序对DNA的样品具有高纯度、大片段的要求，不同于一般PCR样品的要求。对于全基因组测序的基因组文库构建，DNA的需求量较大，长度至少大于23kb，而且质量要求较高，应尽量避免多糖、蛋白质的残留，否则影响库的构建及后续测序工作。因此，一次性获取高质高量的DNA就相当必要。基因组DNA，传统上是从血液中提取的。这种采血的方法对被收集者造成伤害，带来痛苦，被绝大多数人所厌恶甚至拒绝；尤其是对婴幼儿而言，不恰...
【技术保护点】
一种适用于全基因组测序的婴幼儿唾液内基因组DNA的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：?(1)向0.5?1ml婴幼儿唾液样品中加入500ul提取缓冲溶液，反复吹打混匀后，8000×g离心5分钟，弃去上清，此步骤重复一次；?(2)向步骤(1)得到的沉淀中加入500ul裂解液，彻底悬浮沉淀并充分混匀后，室温放置30分钟，期间来回颠倒离心管数次；?(3)向步骤(2)得到的混合液中，加入RNA酶的水溶液10μL，37℃下静置10min；?(4)向步骤(3)得到的上清液中，加入等体积苯氛?氯仿混合溶液，充分混匀，混合液4℃，12000×g离心5分钟，上清液移入干净离心管内；?(5)向...
【技术特征摘要】
1.一种适用于全基因组测序的婴幼儿唾液内基因组DNA的提取方法，其特征在于，包括以下步骤(1)向O.5-lml婴幼儿唾液样品中加入500ul提取缓冲溶液，反复吹打混匀后，8000Xg 离心5分钟，弃去上清，此步骤重复一次；(2)向步骤(I)得到的沉淀中加入500ul裂解液，彻底悬浮沉淀并充分混匀后，室温放置30分钟，期间来回颠倒离心管数次；(3)向步骤⑵得到的混合液中，加入RNA酶的水溶液10μL，37°C下静置IOmin ；(4)向步骤(3)得到的上清液中，加入等体积苯氛-氯仿混合溶液，充分混匀，混合液 4°C，12000 Xg离心5分钟，上清液移入干净离心管内；(5)向步骤(4)得到的上清液中加入等体积苯氛-氯仿-异戊醇混合溶液，充分混匀后，4°C，12000 Xg离心5分钟，上清液移入干净离心管内；(6)向步骤(5)得到的上清液中加入等体积氯仿-异戊醇混合溶液，充分混匀后，4°C， 12000 Xg离心5分钟，上清液移入干净离心管内；(7)向步骤(6)得到的上清液中加入O.6倍体积的冰浴异丙醇溶液及O.1倍的醋酸钠溶液，-20°C静置60分钟后，4°C，12000 Xg离心10分钟，弃上清；(8)向步骤(7)得到的沉淀物中加入O.5mL 70%乙醇清洗沉淀物，4°C，12000Xg离心 5分钟，弃上清，此步骤重复一次；(9)步骤(8)得到的沉淀物自然风干，加入20yL无菌超纯水回溶，电泳检测，-20°C保存待用。2.根据权利要求1所述的一种适用于全基因组测序的婴幼儿唾液内基因组DNA的提取方法，其特征在于，所述的婴幼儿唾液样品为5岁以下儿童的唾液、泪液、鼻涕。3.根据权利要求1所述的一种适用于全基因组测序的婴幼儿唾液内基因组DNA的提取方法...
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。