基因捕获载体及建立全基因组突变胚胎干细胞库的方法技术

本发明专利技术属于生物技术领域，涉及一种可进行全基因组基因捕获的捕获载体组，并利用该捕获载体组建立突变胚胎干细胞库的方法。本发明专利技术中涉及的四个捕获载体可分别捕获细胞中正常表达基因、诱变和捕获正常细胞中不表达基因和胚胎致死基因，从而可以对全基因组基因进行捕获和基因突变，建立覆盖全基因组单基因突变的胚胎干细胞库。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，涉及一组捕获载体，并利用捕获载体进行全基因组的基因捕 获，建立全基因组突变胚胎干细胞库的方法。
技术介绍
三十年来，随着遗传技术的不断发展，采用实验室小鼠对基因功能进行深入研究得到广 泛的应用，这些研究使我们对人类健康与疾病有了更深了解。然而这些生物和遗传技术发展 仍然没有被充分地运用到生物和医学研究上，以取得在这些领域的突破性进展。关键问题是 要提高小鼠基因功能研究规模与速度，并制定一套标准以对这些研究结果有一个标准化的解 释，把那些与医学最为相关的药物靶标(基因)及时地鉴定出来。 一个很容易进行规模性小 鼠基因功能研究的遗传技术就是基因捕获。采用这种方法可将一个合成的DNA片段随机地 插入小鼠基因组中的内源基因中以干扰基因的正常转录，从而达到敲除该基因的目的。因此， 构建大规模的突变体基因文库(最好是完全失活)需要设计特殊载体，以便于筛选出由于载体 嵌入所引发的突变体。同时还要求设计出载体使它们不仅仅局限于检测出那些在胚胎干细胞 内表达的基因，同时也能检测出那些在胚胎干细胞内不表达的基因或胚胎致死基因的突变体。大多情况下， 一个基因捕获载体构造包括剪本文档来自技高网...

【技术保护点】
一组用于全基因组基因捕获的捕获载体组，其特征在于四个载体从５’到３’的结构顺序分别为：　Ｔｒｐ１：ＬＴＲ－ＳＡ－βｇｅｏ－ｐＡ－ＬＴＲ；　Ｔｒｐ２：ＬＴＲ－ＳＡ－ＬａｃＺ－ｐＡ－ＰＧＫｐ－Ｎｅｏ－ＳＤ－ＬＴＲ；　Ｔｒｐ３： ＬＴＲ－ＳＡ－ＬａｃＺ－ｐＡ－ＰＧＫｐ－Ｎｅｏ－ＬｏｘＰ－ＩＲＥＳ－ＬｏｘＰ－ＳＤ－ＬＴＲ；　Ｔｒｐ４：ＬＴＲ－ｆｒｔ－Ｆ３－ＬｏｘＰ－Ｌｏｘ５１１－ＳＡ－βｇｅｏ－ｐＡ－ＬｏｘＰ－Ｌｏｘ５１１－ｆｒｔ－Ｆ３－ＬＴＲ；　其中ＬＴ Ｒ是长末端重复序列；ＳＡ是剪接受体；ＳＤ是剪接供体；Ｎｅｏ是新霉素抗性基因；βｇｅｏ是β－...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：马越，朱启超，武洲，钟伶桃，李明，
申请(专利权)人：天津彰科科技有限公司，
类型：发明
国别省市：12[中国|天津]