一种从重组蛋白制品中提取残留DNA的磁珠法制造技术

本发明专利技术属于分子生物学技术领域，具体涉及一种从重组蛋白制品中提取残留DNA的磁珠法。本发明专利技术公开了一种从重组蛋白制品中提取残留DNA的磁珠法，其包括样品制备、酶切、DNA结合、DNA清洗和DNA洗脱的步骤，其特征在于所述酶切步骤：蛋白酶K与重组蛋白制品中蛋白质的质量比率至少为1：6，37℃孵育不少于10h；所述DNA洗脱步骤，70℃水浴不少于10min。与常规方法相比，本发明专利技术方法能将DNA回收率提高50％以上的，即使是痕量DNA(＜1pg)，其回收率也能超过70％，并能稳定在70％-130％之间，符合相关法规要求。该方法适用于重组蛋白制品制备过程的中间体和原液中残留DNA的提取，可用于监测纯化工艺去除外源DNA的能力，满足原液残留DNA批检验的要求，为重组蛋白制品中残留DNA的提取提供了有效的方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于分子生物学
，具体涉及一种从重组蛋白制品中提取残留DNA的磁珠法。
技术介绍
随着生物医药技术的发展，越来越多的哺乳动物细胞用于生产重组蛋白质，比如单克隆抗体、细胞因子、激素、生长因子、其它还有某些酶类、凝血因子等。涉及到的治疗领域也越来越广泛，包括内分泌、心脑血管、外科、血液病、抗肿瘤等等。重组蛋白制品的用量随着临床治疗效果的需求也越来越大，由微克级上升到了毫克甚至克级。需长期重复用药的生物产品也越来越多。这使得我们技术审评部门不得不更加重视由于DNA残留所带来的安全性担忧。自从上世纪80年代末，利用杂交瘤技术和重组DNA技术生产的鼠源性单克隆抗体在各国被批准使用，管理当局就已经认识到这类产品的安全性问题。理论上，存在于生物制品中的微量的外源DNA杂质，都有可能传递与肿瘤或病毒相关的基因，并导致癌变或其它病理变化。当残留的DNA与制品一同注射到人体后，含有致癌基因的细胞DNA就可能诱发肿瘤的产生；如果含有某些可以整合的病毒的DNA，这种DNA还可以进入宿主细胞，表达后感染受体，导致一系列的不良后果。鉴于外源DNA对机体所具有的潜在危害，各国药品监督管理机构对生本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从重组蛋白制品中提取残留DNA的磁珠法，其包括样品制备、酶切、DNA结合、DNA清洗和DNA洗脱的步骤，其特征在于所述酶切步骤：蛋白酶K与重组蛋白制品中蛋白质的质量比率至少为1∶6，37℃孵育不少于10h；所述DNA洗脱步骤，70℃水浴不少于10min。

【技术特征摘要】
1.一种从重组蛋白制品中提取残留DNA的磁珠法，其包括样品制备、酶切、DNA结合、 DNA清洗和DNA洗脱的步骤，其特征在于所述酶切步骤蛋白酶K与重组蛋白制品中蛋白质的质量比率至少为1: 6，37°C孵育不少于IOh ;所述DNA洗脱步骤，70°C水浴不少于lOmin。2.如权利要求1所述的磁珠法，其特征在于所述重组蛋白制品为单克隆抗体、细胞因子、激素、生长因子、酶类、或凝血因子中之一。3.如权利要求1所述的磁珠法，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱红枚，王少雄，王洪芳，吕品，
申请(专利权)人：嘉和生物药业有限公司，
类型：发明
国别省市：