一种植物RNA的提取工艺制造技术

一种植物RNA的提取工艺属于化工技术领域，更具体地说，是涉及一种植物RNA的提取工艺。本发明专利技术提供了一种操作简单、反应条件温和的植物RNA的提取工艺。本发明专利技术采用如下技术方案，工艺步骤为：RNA提取缓冲液的成分有：异硫氰酸胍2～4mol/L、柠檬酸钠(pH7.0)25～35mmol/L、十二烷基肌氨酸钠0.5～1.0％(W/V)、β-巯基乙醇2～4％(V/V)；取预冷的提取缓冲液加入到离心管中，置于冰上；取霸王叶片、根系在装有过量液氮的研钵中充分研磨，用预冷的药匙将霸王叶片、根系粉末转入离心管中，剧烈震荡10min，冰上静置5min；加入醋酸钠、水饱和酚、体积比为20∶1～24∶1的氯仿和异戊醇混合溶液，摇匀，离心20min；加入70～80％的乙醇，洗涤RNA沉淀，室温下干燥10min，即得成品。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于化工
，更具体地说，是涉及一种植物RNA的提取工艺。
技术介绍
由于植物细胞壁厚实且成分复杂，细胞内富含单宁、萜烯、色素和酚等次生代谢物及蛋白质和多糖等大分子，这些不但影响RNA提取效率，而且干扰其后的逆转录和酶切。另外，RNA极易受到内源或外源RNA酶的影响而降解以及受到蛋白质和DNA等的污染而降低 RNA的质量，因此从植物中提取RNA较难。生长在干旱荒漠区的强旱生植物霸王，其体内次生代谢物含量高，然而，现阶段， 还未有厂家从霸王中进行RNA的提取。
技术实现思路
本专利技术就是针对上述问题，提供了一种操作简单、反应条件温和的植物RNA的提取工艺。为了实现本专利技术的上述目的，本专利技术采用如下技术方案，工艺步骤为RNA提取缓冲液的成分有异硫氰酸胍2 4mol/L、柠檬酸钠(pH 7. O) 25 35mmol/L、十二烷基肌氨酸钠O. 5 1. 0% (W/V)、β -巯基乙醇2 4% (V/V)；取预冷的提取缓冲液加入到离心管中，置于冰上；取霸王叶片、根系在装有过量液氮的研钵中充分研磨，用预冷的药匙将霸王叶片、根系粉末转入离心管中，剧烈震荡lOmin， 冰上静置5min ;加入醋酸钠、水饱和酚、体积比为20 :1 24 :1的氯仿和异戊醇混合溶液 ，摇匀，离心20min ;吸取上清液转入另一个离心管中，加入预冷的异丙醇，在-10 _20°C 下沉淀1. 5h ;离心，弃上清液，倒置空干，加入70 80%的乙醇，悬浮沉淀；离心，弃上清液，加入70 80%的乙醇,洗漆RNA沉淀,室温下干燥IOmin,即得成品。本专利技术的有益效果1.本专利技术操作简单、耗时短；2.本专利技术提取的RNA受多糖、多酚和蛋白质等污染的程度小，纯度高；3.本专利技术提取的RNA完整、纯净，无降解；4.本专利技术的产量为257. 6 μ g/g。具体实施例方式本专利技术的工艺步骤为RNA提取缓冲液的成分有异硫氰酸胍2 4mol/L、柠檬酸钠(pH 7. O) 25 35mmol/L、十二烷基肌氨酸钠O. 5 1. 0% (W/V)、β -巯基乙醇2 4% (V/V)；取预冷的提取缓冲液加入到离心管中，置于冰上；取霸王叶片、根系在装有过量液氮的研钵中充分研磨，用预冷的药匙将霸王叶片、根系粉末转入离心管中，剧烈震荡lOmin， 冰上静置5min ;加入醋酸钠、水饱和酚、体积比为20 :1 24 :1的氯仿和异戊醇混合溶液，摇匀，离心20min ;吸取上清液转入另一个离心管中，加入预冷的异丙醇，在-10 _20°C 下沉淀1. 5h ;离心，弃上清液，倒置空干，加入70 80%的乙醇，悬浮沉淀；离心，弃上清液，加入70 80%的乙醇,洗漆RNA沉淀,室温下干燥IOmin,即得成品。实施例1 :RNA提取缓冲液的成分有异硫氰酸胍4mol/L、柠檬酸钠(pH 7. O) 35mmol/L、十二烷基肌氨酸钠O. 5% (W/V)、β-巯基乙醇2% (V/V)；取预冷的提取缓冲液加入到离心管中，置于冰上；取霸王叶片、根系在装有过量液氮的研钵中充分研磨，用预冷的药匙将霸王叶片、根系粉末转入离心管中，剧烈震荡lOmin， 冰上静置5min ;加入醋酸钠、水饱和酚、体积比为20 :1 24 :1的氯仿和异戊醇混合溶液，摇匀，离心20min ;吸取上清液转入另一个离心管中，加入预冷的异丙醇，在-10 _20°C 下沉淀1. 5h ;离心，弃上清液，倒置空干，加入70 80%的乙醇，悬浮沉淀；离心，弃上清液，加入70 80%的乙醇,洗漆RNA沉淀,室温下干燥IOmin,即得成品。实施例2:RNA提取缓冲液的成分有异硫氰酸胍2mol/L、柠檬酸钠(pH 7. O) 25mmol/L、十二烷基肌氨酸钠1. 0% (W/V)、β -巯基乙醇4% (V/V)；取预冷的提取缓冲 液加入到离心管中，置于冰上；取霸王叶片、根系在装有过量液氮的研钵中充分研磨，用预冷的药匙将霸王叶片、根系粉末转入离心管中，剧烈震荡lOmin， 冰上静置5min ;加入醋酸钠、水饱和酚、体积比为20 :1 24 :1的氯仿和异戊醇混合溶液，摇匀，离心20min ;吸取上清液转入另一个离心管中，加入预冷的异丙醇，在-10 _20°C 下沉淀1. 5h ;离心，弃上清液，倒置空干，加入70 80%的乙醇，悬浮沉淀；离心，弃上清液，加入70 80%的乙醇,洗漆RNA沉淀,室温下干燥IOmin,即得成品。实施例3 RNA提取缓冲液的成分有异硫氰酸胍3mol/L、柠檬酸钠(pH 7. O) 25mmol/L、十二烷基肌氨酸钠O. 75% (W/V)、β-巯基乙醇2% (V/V)；取预冷的提取缓冲液加入到离心管中，置于冰上；取霸王叶片、根系在装有过量液氮的研钵中充分研磨，用预冷的药匙将霸王叶片、根系粉末转入离心管中，剧烈震荡lOmin， 冰上静置5min ;加入醋酸钠、水饱和酚、体积比为20 :1 24 :1的氯仿和异戊醇混合溶液，摇匀，离心20min ;吸取上清液转入另一个离心管中，加入预冷的异丙醇，在-10 _20°C 下沉淀1. 5h ;离心，弃上清液，倒置空干，加入70 80%的乙醇，悬浮沉淀；离心，弃上清液，加入70 80%的乙醇,洗漆RNA沉淀,室温下干燥IOmin,即得成品。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种植物RNA的提取工艺，其特征在于，本专利技术采用如下技术方案，工艺步骤为：RNA提取缓冲液的成分有：异硫氰酸胍2～4mol/L、柠檬酸钠(pH?7.0)25～35mmol/L、十二烷基肌氨酸钠0.5～1.0％(W/V)、β?巯基乙醇2～4％(V/V)；取预冷的提取缓冲液加入到离心管中，置于冰上；取霸王叶片、根系在装有过量液氮的研钵中充分研磨，用预冷的药匙将霸王叶片、根系粉末转入离心管中，剧烈震荡10min，冰上静置5min；加入醋酸钠、水饱和酚、体积比为20∶1～24∶1的氯仿和异戊醇混合溶液，摇匀，离心20min；吸取上清液转入另一个离心管中，加入预冷的异丙醇，在?10～?20℃下沉淀1.5h；离心，弃上清液，倒置空干，加入70～80％的乙醇，悬浮沉淀；离心，弃上清液，加入70～80％的乙醇，洗涤RNA沉淀，室温下干燥10min，即得成品。

【技术特征摘要】
1.一种植物RNA的提取工艺，其特征在于，本发明采用如下技术方案，工艺步骤为 RNA提取缓冲液的成分有异硫氰酸胍2 4mol/L、柠檬酸钠(pH 7. O) 25 35mmol/L、十二烷基肌氨酸钠O. 5 1. 0% (W/V)、β -巯基乙醇2 4% (V/V)； 取预冷的提取缓冲液加入到离心管中，置于冰上；取霸王叶片、根系在装有过量液氮的研钵中充分研磨，用预冷的药匙将霸王叶片、根系粉末转入离心管中，剧烈震荡IOminjKi静置5min;加入醋酸钠、水饱和酚、体积比为20 :1 24 :1的氯仿和异戊醇混合溶液，摇匀，离心20min ;吸取上清液转入另一个离心管中，加入预冷的异丙醇，在-10 _20°C下沉淀1. 5h ;离心，弃上清液，倒置空干，加入70 80%的乙醇，悬浮沉淀；离心，弃上清液，加入70 80%的乙醇,洗漆RNA沉淀,室温下干燥IOmin,即得成品。2.根据权利要求1所述的一种植物RNA的提取工艺，其特征在于，工艺步骤为 RNA提取缓冲液的成分有异硫氰酸胍4mol/L、柠檬酸钠(pH 7. O) 35mmol/L、十二烷基肌氨酸钠O. 5% (W/V)、β -巯基乙醇2% (V/V)； 取预冷的提取缓冲液加入到离心管中，置于冰上；取霸王叶片、根系在装有过量液氮的研钵中充分研磨，用预冷的药匙将霸王叶片、根系粉末转入离心管中，剧烈震荡IOminjKi静置5min;加入醋酸钠、水饱和酚、体积比为20 :1 24 :1的氯仿和异戊醇混合溶液，摇匀，离心20min ;吸取上清液转入另一个离心管中，加入预冷的异丙醇，在-10 _20°C下沉淀1. 5h ;离心，弃上清液，倒置空干，加入70 80%的乙醇，悬浮沉淀；离心，弃上清液，加入70 80...

【专利技术属性】
技术研发人员：苏兆明，
申请(专利权)人：苏兆明，
类型：发明
国别省市：