一种提取水稻DNA的方法技术

本发明专利技术利用96深孔板以及混合研磨仪进行快速高效的水稻叶片或种子DNA的提取方法，涉及生物学领域，是一种快速有效的植物DNA的提取方法，提取全程无需单枪操作，全为排枪作业，且不需写编号，实现快速高通量的提取方法。可用于水稻分子育种、纯度鉴定、种子真实性检测、基因克隆等。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及到DNA的一种提取方法，尤其涉及到一种水稻叶片和谷粒等植物品种的DNA提取的方法。
技术介绍
SSR标记具有快速、准确，信息含量高、呈共显性遗传、易于分析和重复可靠等特点。因此，自1989年该技术产生以来，己被广泛应用于水稻基因定位和QTL分析，水稻品种 DNA指纹图谱构建、群体遗传多样性分析、分子标记辅助育种、杂交组合真实性和纯度鉴定、 转基因品种检测等方面。DNA提取是PCR分析的前提。目前以水稻叶片或种子为研究材料进行DNA提取的过程主要是采用2ml离心管，在每个单管中进行研磨、离心、转管、单枪加样等。提取步骤多，时间长，且每次转管都需要写编号，不适合DNA样品的大量快速制备。
技术实现思路
为了解决现有技术不适合DNA样品的大量快速制备的缺陷，本专利技术提供一种快速、简便高通量提取水稻D NA的方法。为了实现上述的技术目的，本专利技术的技术方案是提出一种提取水稻DNA的方法。在本专利技术中，涉及到的植物材料优选为水稻的幼苗或种子或成株的叶片。本专利技术采用的步骤包括a)、采用96孔深孔板对植物材料进行取样；b)、在深孔板的每个孔中加入I粒小钢珠，放入液氮中冻2-3分钟；C)、安装96深孔板适配器；d)、采用混合研磨仪对在96深孔板内的植物材料进行研磨、粉碎；e)、利用8枪头的排枪对深孔板内的植物材料进行萃取；f)、萃取后的DNA进行室温干燥；g)、干燥后的DNA加入灭菌双蒸水溶解；h)、利用RM520进行PCR，并在琼脂糖电泳上进行检测。本专利技术的一种优选方案是，所述萃取使用的萃取液的顺序依次为I单位的I.5XCTAB (十六烷基三甲基溴化铵)，I单位的氯仿/异戊醇(24:1)混合溶液，2/3单位异丙醇，并通过聚合酶链式反应(PCR)试验。本专利技术的优选实施方案是，植物材料为种植成8株X 12行的水稻幼苗或水稻的种子或水稻成株的叶片。本专利技术的一种优选方案是，所述的研磨、粉碎的振荡频率为25-30HZ/S，所预计的时间为I. 5min。在本专利技术提到的96孔深孔板不仅限于96孔深孔板，也可以为48孔深孔板，24 孔深孔板，192孔深孔板，具体根据实际的需要选取。本专利技术提到的利用8枪头的排枪不仅限于8枪头的排枪，也可以为16枪头的排枪，或4枪头的排枪，可根据实验人员的实际需要选取。本专利技术的技术效果是与一般植物DNA提取技术相比，有以下几个优点1)无需写每份材料的编号；2)无需使用单枪，提取DNA过程全程使用排枪；3)可通量提取，一次操作即为96份样；4)简化了提取步骤，省时高效。附图说明图I为96孔板批量提取和一般单管提取的DNA电泳效果对比图具体实施例方式SSR(Si mple Sequence Repeats)标记是近年来发展起来的一种以特异引物PCR为基础的分子标记技术，也称为微卫星DNA(Micr0SatelliteDNA),是一类由几个核苷酸(一般为I飞个)为重复单位组成的长达几十个核苷酸的串联重复序列.由于每个SSR两 侧的序列一般是相对保守的单拷贝序列。 用分子标记RM520对旱恢3号与B5材料的后代群体进行检测，用96孔深孔板进行取样(田间材料选择种植成8株X 12行)，在深孔板将材料取样方向以及田间编号备注好。取约5cm左右的叶片卷着放入I. Iml深孔板中的离心管中，深孔板株行编号与田间编号对应；将样带回实验室进行研磨，即在深孔板每个带叶片孔中加入I粒小钢珠，放入液氮中冻2-3分钟,安装96深孔板适配器对称装于混合研磨仪(Mixer Mill Type, Model:MM301)，然后进行粉碎，以每秒25-30的频率振荡I. 5min，磨成粉样；用排枪在96深孔板每个样管中加入I. 5 X CTABC I. 5 X CTAB要56°C预热)DNA提取缓冲液300 ul，56°C水浴30min，中间摇匀3-4次让DNA充分裂解；用排枪加入等量氯仿/异戊醇(24:1) (300ul)，室温下振荡20分钟，3500rpm离心lOmin，将上清液(吸取IOOul)转入PCR板中；加入2/3体积(67ul)的异丙醇(_20°C预冷)，排枪上下吸混几次，盖好PCR板盖，轻缓颠倒混匀后_20°C放置Ih以上或过夜，进行DNA沉淀，在将平板放于离心机上3500rpm离心lOmin，排枪洗掉上清液，沉淀的DNA室温干燥，加入200ul灭菌双蒸水溶解DNA，每次取2ul直接进行PCR。利用RM520进行PCR，并在琼脂糖电泳上进行检测。发现用96深孔板板提取DNA方法与2ml单离心管的提取方法的DNA检测效果一致。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种提取水稻DNA的方法，其步骤包括：a)、采用96孔深孔板对植物材料进行取样；b)、在深孔板的每个孔中加入1粒小钢珠，放入液氮中冻2?3分钟；c)、安装96深孔板适配器；d)、采用混合研磨仪对在96深孔板内的植物材料进行研磨、粉碎;e)、利用8枪头的排枪对深孔板内的植物材料进行萃取;f)、萃取后的DNA进行室温干燥；g)、干燥后的DNA加入灭菌双蒸水溶解;h)、利用RM520进行PCR，并在琼脂糖电泳上进行检测。

【技术特征摘要】
1.一种提取水稻DNA的方法，其步骤包括 a)、采用96孔深孔板对植物材料进行取样； b)、在深孔板的每个孔中加入I粒小钢珠，放入液氮中冻2-3分钟； C)、安装96深孔板适配器； d)、采用混合研磨仪对在96深孔板内的植物材料进行研磨、粉碎； e)、利用8枪头的排枪对深孔板内的植物材料进行萃取； f)、萃取后的DNA进行室温干燥； g)、干燥后的DNA加入灭菌双蒸水溶解； h)、利用RM520进行PCR，并在琼脂糖电泳上进行检测。...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘国兰，刘毅，王飞名，王加红，张安宁，余新桥，罗利军，
申请(专利权)人：上海市农业生物基因中心，
类型：发明
国别省市：