一种用作免疫抑制剂的植物sRNA提取物制造技术

本申请涉及一种用作免疫抑制剂的植物sRNA提取物。

A plant sRNA extract used as an immunosuppressant

The present invention relates to a plant sRNA extract used as an immunosuppressant.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】一种用作免疫抑制剂的植物sRNA提取物本专利技术涉及一种用作免疫抑制剂的植物sRNA提取物。本专利技术还涉及一种用作免疫抑制剂的包含2种或多种植物sRNA提取物的组合物。本专利技术涉及一种用作抗炎剂的植物sRNA提取物。本专利技术还涉及一种用作抗炎剂的包含2种或多种植物sRNA提取物的组合物。多种真核生物(包括植物、动物和真菌)已进化出若干RNA沉默途径以保护其细胞和基因组免受侵入性核酸(诸如，病毒或转座子)的入侵，并且在发育或对外部刺激的应答中调控基因表达(综述，参见Baulcombe(2005)TrendsBiochem.Sci.30:290-293；Meins等，(2005)Annu.Rev.CellDev.Biol.21:297-318)。非编码RNA(ncRNA)是由DNA转录但不翻译成蛋白的功能性RNA分子。在通常情况下，ncRNA的功能能在转录水平和转录后水平上调控基因表达。短ncRNA(<30nt)包括microRNA(miRNA)、短干扰RNA(siRNA)和piwi相互作用RNA(piRNA)(Sharma等，(2013),MolBiotechnol55,63:77)。已知在大多数生物体中microRNA以序列特异性的方式干扰基因表达(尽管在植物和动物中是不同的)。主要通过研究miRNA与核DNA上的调控区的结合来研究miRNA在给定细胞类型中的作用以对这种调控进行研究(GomesAQ等，(2013)Int.J.Mol.Sci,14,16010-16039)。在过去十年中，大量的科学文献强调了sRNA类别特别是miRNA在免疫功能中所起的作用(综述，参见BiY.等；MicroRNAs:novelregulatorsduringtheimmuneresponse.JCellPhysiol.2009Mar；218(3):467-72；O'ConnellR.M.等；PhysiologicalandpathologicalrolesformicroRNAsintheimmunesystem.NatRevImmunol.2010Feb；10(2):111-22)。已提出内源性miRNA作为在癌症和其他疾病治疗中的治疗剂或靶标(CalinG.A和CroceCM；MicroRNAsignaturesinhumancancers.NatRevCancer.2006Nov；6(11):857-66)。这种治疗应用的主要限制步骤是标准siRNA双链体是哺乳动物先天免疫系统的高效激活剂(Robbins等，siRNAandinnateimmunity,Oligonucleotides2009；19(2):89-102)并且因此显示出不希望出现的副作用(如，诱导促炎性过程)(JudgeAD等；Sequence-dependentstimulationofthemammalianinnateimmuneresponsebysyntheticsiRNA.NatBiotechnol2005；23(4):457-62；Sioud,Inductionofinflammatorycytokinesandinterferonresponsesbydouble-strandedandsingle-stranedsiRNAissequence-dependentandrequiresendosomallocalization.JMolBiol,2005；348(5):1079-90)。这本身并不令人惊讶，因为事实上多种病毒都是由双链RNA构成的并且在进化过程中哺乳动物宿主发展了Toll样受体(TLR)介导的应答以使得病毒处于免疫控制下(Kawai和Akira；Immunerecognitionofviralinfection.NatureImmunology2006；7:131-137)。特别是，双链RNA被TLR3识别(Alexopolou等；Recognitionofdouble-strandedRNAandactivationofNF-kappaBbyToll-likereceptor3.Nature2001；413:732-738)并且单链RNA被TLR7和TLR8识别(Hornung等；RNArecognitionviaTLR7andTLR8.HandbExpPharmacol2008；183:71-86)。因此我们能归纳出内源性miRNA通过调控基因表达作为免疫应答的调节剂，而外源性的小RNA(sRNA)被免疫细胞识别为潜在有害的主要激发炎性应答。最近的研究发现sRNA包含在“胞外体”(即由脂质和蛋白组成的细胞外囊泡)内，其在哺乳动物中的细胞之间和器官之间交换(综述，参见vanderGrein和Nolte-‘t-Hoen；“SmallTalk”intheinnateimmunesystemviaRNA-containingextracellularvesicles.FrontImm2014；5:542；Robbins和Morelli；Regulationofimmuneresponsesbyextracellularvesicles.NatRevImmunol.2014；14(3):195-208)。胞外体由免疫和非免疫细胞产生并且通过介导免疫刺激或免疫抑制以及通过驱动炎性、自身免疫性和感染性疾病的病理在免疫调控中起重要作用。由于多种sRNA能够调控基因表达，所以其通过胞外体的细胞内转移可能导致胞外体靶向细胞功能的长期改变。最近已通过深度测序对人免疫细胞来源胞外体的长度小于100个核苷酸的sRNA内容物进行了鉴定，并且发现其由可能具有基因调控功能的(Kapranov等，RNAmapsrevealnewRNAclassesandapossiblefunctionforpervasivetranscription.Science2007,316(5830):1484–8；Persson等；Thenon-codingRNAofthemultidrugresistance-linkedvaultpartcleencodesmultipleregulatorysmallRNAs.NatCellBiol2009,11(10):1268–71.Haussecker等；HumantRNA-derivedsmallRNAsintheglobalregulationofRNAsilencing.RNA2010,16(4):673–95)多种小非编码RNA种类组成(Nolte-’tHoen等；DeepsequencingofRNAfromimmunecell-derivedvesiclesuncoverstheselectiveincorporationofsmallnon-codingRNAbiotypeswithpotentialregulatoryfunctions.NucleicAcidsRes2012,40(18):9272–85)。胞外体或其他RNA穿梭囊泡不仅构成了细胞内和细胞间sRNA转移机制，还提供了使其免于被RNAse降解的保护(Valadi等；Exosome-mediatedtransferofmRNAan本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用作免疫抑制剂的植物sRNA提取物。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.04.30 EP PCT/EP2014/0588881.一种用作免疫抑制剂的植物sRNA提取物。2.根据权利要求1所述的使用的植物sRNA提取物，其中所述sRNA的长度为200个核苷酸或更少，优选长度为120个核苷酸或更少，优选长度为10至120个核苷酸之间。3.根据权利要求1或2所述的使用的植物sRNA提取物，其中所述sRNA的长度为10至70、10至60、15至60、20至60或者10至50个核苷酸之间。4.根据权利要求1、2或3的任意一项所述的使用的植物sRNA提取物，其中所述sRNA是miRNA。5.根据权利要求1至4中任意一项所述的使用的植物sRNA提取物，其中所述植物sRNA提取物选自苹果sRNA提取物、蓝莓sRNA提取物、树莓sRNA提取物、卷心菜sRNA提取物、拟南芥sRNA提取物、葡萄sRNA提取物、水稻sRNA提取物，特别是野生稻sRNA提取物，玉米sRNA提取物、松树sRNA提取物、蕨类sRNA提取物和鼠尾草sRNA提取物。6.根据权利要求1至5中任意一项所述的使用的植物sRNA提取物，其中所述植物sRNA提取物选自苹果sRNA提取物、卷心菜sRNA提取物、草莓sRNA提取物和蕨类sRNA提取物，优选地其中所述苹果sRNA提取物是苹果皮的sRNA提取物，或者所述卷心菜sRNA提取物是卷心菜叶子或卷心菜花的，更优选地卷心菜叶子的，sRNA提取物，或者所述蕨类sRNA提取物是蕨类叶子的sRNA提取物，或者所述草莓sRNA提取物是草莓果实的sRNA提取物。7.一种组合物，所述组合物包含2种或多种植物sRNA提取物，优选地其中所述组合物包含2种或多种选自下组的植物sRNA提取物：苹果sRNA提取物、蓝莓sRNA提取物、树莓sRNA提取物、卷心菜sRNA提取物、拟南芥sRNA提取物、葡萄sRNA提取物、水稻sRNA提取物，特别是野生稻sRNA提取物，玉米sRNA提取物、松树sRNA提取物、蕨类sRNA提取物和鼠尾草sRNA提取物，更优选地其中所述组合物包含，优选地由选自下组的两种或多种sRNA提取物组成：草莓sRNA提取物，即野草莓sRNA提取物，卷心菜sRNA提取物、蕨类sRNA提取物和苹果sRNA提取物。8.根据权利要求7所述的组合物，其包含卷心菜叶sRNA提取物、蕨类叶子sRNA提取物和苹果皮sRNA提取物以及可选地草莓果实sRNA提取物，优选地由其组成。9.根据权利要求1至6中任意一项所述的使用的植物sRNA提取物或者根据权利要求8所述的组合物，其中所述sRNA包括甲基化的sRNA，更优选地在3’末端的2’OH基团处被甲基化的sRNA或miRNA。10.根据权利要求8或9所述的组合物，所述组合物用作免疫抑制剂。11.一种用于治疗和/或预防炎性疾病的方法中的，优选地根据权利要求2至6和9中的任意一项所定义的植物sRNA提取物或根据权利要求7、8或9所述的组合物，特别地其中所述炎性疾病选自下组：慢性前列腺炎、肾小球肾炎、过敏、盆腔炎性疾病、再灌注损伤、结节病、血管炎、间质性膀胱炎、正常补体血症性荨麻疹性血管炎、心包炎、肌炎、抗合成酶抗体综合征、巩膜炎、巨噬细胞活化综合征、白塞氏综合征、PAPA综合征、布洛氏综合征、痛风、成人和幼年型斯蒂尔氏炎性疾病、冷吡啉病、穆克勒-威尔斯综合征、家族性寒冷诱导自体炎性综合征、新生儿期发病的多系统炎性疾病、家族性地中海热、慢性婴儿神经皮肤关节综合征、全身型幼年特发性关节炎、高IgD综合征、施尼茨勒综合征、TNF受体相关的周期性综合征(TRAPSP)、牙龈炎、牙周炎、肝炎、肝硬化、胰腺炎、心肌炎、血管炎、胃炎、痛风、痛风性关节炎和炎性皮肤病症，所述炎性皮肤病症选自下组：银屑病、特应性皮炎、湿疹、红斑痤疮、荨麻疹和痤疮。12.根据权利要求11所述的使用的植物sRNA提取物或组合物，其中所述炎性疾病是自身免疫性疾病。13.根据权利要求12所述的使用的植物sRNA提取物或组合物，其中所述自身免疫性疾病选自下组：多发性硬化症、类风湿性关节炎、银屑病性关节炎、盘状红斑狼疮、系统性红斑狼疮(SLE)；溃疡性结肠炎；克隆氏病；良性淋巴细胞性血管炎、自身免疫性淋巴增生综合征、结节病、自身免疫性血小板减少性紫癜、特发性血小板减少性紫癜、单纯红细胞再生障碍性贫血、干燥综合征、风湿性疾病、风湿性多肌痛、混合性结缔组织病、炎性风湿病、退行性风湿病、关节外风湿病、幼年型关节炎、幼年型类风湿性关节炎、全身型幼年特发性关节炎、关节炎性尿路炎、肌肉风湿病、慢性多关节炎、反应性关节炎、赖特尔综合征、风湿热、复发性多软骨炎、雷诺氏现象、血管炎、冷球蛋白性血管炎、ANCA相关的血管炎、颞动脉炎、巨细胞性动脉炎、高安氏动脉炎、白塞氏病、抗磷脂综合征、重症肌无力、自身免疫性溶血性贫血、格林-巴利综合征、慢性免疫多发性神经病、慢性炎性脱髓鞘性多发性神经病、自身免疫性甲状腺炎、胰岛素依赖性糖尿病、I型糖尿病、艾迪生氏病、膜性肾小球肾病、多腺性自身免疫性综合征、古德帕斯彻病、自身免疫性胃炎、自身免疫性萎缩性胃炎、恶性贫血、天疱疮、寻常型天疱疮、肝硬化、原发性...

【专利技术属性】
技术研发人员：A·西·阿穆尔，R·薇奥拉，D·卡瓦列里，L·里泽托，
申请(专利权)人：埃德蒙马赫基金会，
类型：发明
国别省市：意大利,IT