一种HIV-1耐药野生型基因合成方法技术

本发明专利技术提供了一种HIV-1耐药野生型基因合成方法,将长目的片段分段合成，并合成错位互补片段，通过运用多次PCR方法合成所需目的基因片段，这一方法既简单又安全，无需复杂的设备，也不需要一个高度管制的实验环境，尤其适用感染性疾病目的基因的研究。本发明专利技术的技术方案在功能基因组学等领域有着广泛的应用，比如，在突变，缺失或嵌合基因编码一个特定的蛋白质，具有很大的灵活性。

【技术实现步骤摘要】
一种HIV-1耐药野生型基因合成方法
本专利技术属于分子生物学
，具体涉及一种Hiv-I耐药野生型基因合成方法及引物。
技术介绍
基因合成是指在体外人工合成双链DNA分子的技术，与寡核苷酸合成有所不同 寡核苷酸是单链的，所能合成的最长片段仅为IOOnt左右，而基因合成则为双链DNA分子合成，所能合成的长度范围50bp-12 kb。基因合成是用人工方法合成基因的技术，是基因获取的手段之一，相对于从已有生物中获取基因来说，基因合成无需模板，因而不受基因来源限制。人类首条人工合成的基因出现在上世纪60年代基因合成是当前合成生物学的主要内容，通过基因合成，可以获得自然界中不存在的基因，为人类改造生物开辟了一个全新的方向，在可预计的将来，基因合成将在生命科学领域发挥巨大作用，在新能源、新材料、人工生命、核酸疫苗、生物医药[I] 等领域的作用已初步体现。基因合成也存在潜在的被开发成生物武器的可能，而这个可能性在几个病毒的人工合成之后变得更加突出。目前基因合成有两种途径，一是向基因合成公司订制，二是作本地基因合成。由于基因合成技术还没有一个统一的方法，基因合成的技能和经验在合成过程中具有决定本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种HIV?1耐药野生型基因合成方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）?把HIV?1耐药野生型基因,分成若干N段（n=20?40）的A碱基片段,即?A1，A2，A3，A4，A5…An,并进行人工合成，设计并人工合成与上述片段互补的N?1碱基片段，即B1，B2，B3，B4…Bn?1?；其中，任一Bn碱基片段的5’端比各耐药野生型基因片段的An碱基片段5’端后移20?25bp；Bn碱基片段的端延伸到耐药野生型基因片段的An+1碱基片段5’端20?25bp，根据上述相互匹配的两两对应互补片段设计并合成正向、反向引物；（2）将上述相互对应部分互补的碱基片段分别进行PCR扩增，即A1/B1,?A2/B2...

【技术特征摘要】
1.一种HIV-I耐药野生型基因合成方法，其特征在于，包括如下步骤 (1)把HIV-I耐药野生型基因，分成若干N段(n=20-40)的A碱基片段，即Al，A2，A3，A4，A5…An,并进行人工合成， 设计并人工合成与上述片段互补的N-I碱基片段，即B1，B2，B3，B4…Bn-I ;其中，任一Bn碱基片段的5’端比各耐药野生型基因片段的An碱基片段5’端后移20_25bp ;Bn碱基片段的端延伸到耐药野生型基因片段的An+1碱基片段5’端20-25bp， 根据上述相互匹配的两两对应互补片段设计并合成正向、反向引物； (2)将上述相互对应部分互补的碱基片段分别进行PCR扩增，即Al/Bl，A2/B2,A3/B3……An/Bn，由部分互补变为完全互补片段； (3)再将上述具有互补片段的相邻扩增产物，二次扩增； (4)以3个A碱基片段为单位分别合成167bp片段，并需要进行琼脂糖凝胶的割胶回收纯化，标记为Cl，C2, C4，C5…Cn/3，最后一个A...

【专利技术属性】
技术研发人员：李凯，张佳，季晓英，
申请(专利权)人：苏州大学，
类型：发明
国别省市：