本发明专利技术确定了1’-乙酰氧基胡椒酚乙酸酯及其衍生物具有抑制人体免疫缺陷病毒HIV-1耐药病毒复制的新作用。1’-乙酰氧基胡椒酚乙酸酯及其衍生物在低浓度下能有效抑制HIV-1融合抑制剂及蛋白酶抑制剂所产生的HIV-1耐药病毒的复制，而对宿主细胞不显示细胞毒性。因此1’-乙酰氧基胡椒酚乙酸酯及其衍生物对治疗产生耐药性的艾滋病患者具有潜在的应用前景。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及新的药物应用领域。涉及一种抑制Hiv-1耐药病毒复制的新方法。
技术介绍
目前艾滋病治疗主要使用的药物可分为核苷类逆转录酶抑制剂，非核苷类逆转录酶抑制剂，蛋白酶抑制剂，融合抑制剂。这些药物的作用机理分别是作用于HIV-1复制的不同阶段，其长期使用可使艾滋病病毒产生耐药性。例如HIV-1融合抑制剂T20，已有报道体外可诱导T20耐药变株，突变株对T20敏感性下降5 684倍，临床也分离到T20耐药变株，对T20敏感性下降4 422倍。对临床常用的蛋白酶抑制药如奈非那韦，沙奎那韦，洛匹那韦等，若长期使用也会产生耐药性而使药物的敏感性下降。为了减少耐药突变所占的比率，使药物更有效地抑制HIV-1的复制，阻止新突变的产生，按照艾滋病病毒的复制阶段，研制新靶点的药物是克服艾滋病药物耐药性的一种方法。Rev蛋白质是HIV-1病毒复制所必需的蛋白质，该蛋白质需要从细胞核输出到细胞质而发挥其蛋白质的作用。这一输出依赖Rev蛋白质的核外输出信号和受体蛋白质即染色体区域维持物(CRMl)相结合，因此阻止Rev蛋白质的核外输出信号和受体蛋白质CRMl相结合是一种新的战略被用于抑制HIV-1复制。因为抑制Rev蛋白质的功能和目前艾滋病治疗使用的药物的作用机理不同，因此Rev蛋白质的功能抑制剂预期可以有抗HIV-1耐药病毒感染的新作用。I’-乙酰氧基胡椒酚乙 酸酯被发现能阻止Rev蛋白质的核外输出信号和受体蛋白质CRMl相结合而抑制了 HIV-1病毒的复制。因为抑制Rev蛋白质的作用和目前临床艾滋病治疗使用的药物的作用靶点不同，本专利技术证明了 I’ -乙酰氧基胡椒酚乙酸酯及其衍生物能有效抑制HIV-1耐药病毒的复制。
技术实现思路
目前使用的抗艾滋病药物分为核苷类逆转录酶抑制剂，非核苷类逆转录酶抑制齐U，蛋白酶抑制剂，融合抑制剂，因为不能彻底根除体内的HIV-1病毒，需要长时间服用这些药物，因此HIV-1病毒易引起高的突变率而对各种艾滋病药物产生耐药性。因为I’ -乙酰氧基胡椒酚乙酸酯及其衍生物抑制HIV-1病毒复制的靶点是抑制HIV-1的Rev蛋白质在病毒复制时应起的作用，和目前艾滋病药物的靶点不同，因此选用该类化合物对HIV-1耐药病毒株如HIV-1融合抑制剂及蛋白酶抑制剂的耐药病毒株进行了抗耐药病毒活性的筛选实验。I’ -乙酰氧基胡椒酚乙酸酯及其衍生物实验样品的制备I’-乙酰氧基胡椒酚乙酸酯，其立体结构可以是I’S型，即I’(S)-乙酰氧基胡椒酚乙酸酯，也可以是I’ R型，即I’(R)-乙酰氧基胡椒酚乙酸酯，也可以是二者混和物。本实验所用样品为I’ (S)-乙酰氧基胡椒酚乙酸酯。I’ (S)-乙酰氧基胡椒酚乙酸酯实验样品的制备，可以从天然植物中提取分离精制而制备，也可以通过化学合成法制备。本实验所用样品是从天然植物大高良姜的根茎中提取分离精制而制备。其制备方法为取大高良姜干燥的根茎，切碎，用甲醇提取，合并提取液，减压浓缩，甲醇提取物通过硅胶层析柱用正己烷与乙酸乙酯混合液作为溶媒进行梯度洗脱分离，收集正己烷与乙酸乙酯混合液(10 I)洗脱物，减压浓缩。浓缩的洗脱物用制备型碳18反相高效液相色谱柱进一步进行样品精制，流动相用甲醇水(4 I)。精制所得化合物根据比旋光度，核磁共振及质谱的分析数据确定其化学结构为I’(S)-乙酰氧基胡椒酚乙酸酯化合物。测定该化合物的数据为[a ]d20-40. 5° (c1. O,乙醇)。1H NMR(⑶Cl3)δ 7. 35 (2H, d, J = 8. 5Hz) ,7. 01 (2H, d, J = 8. 5Hz)，6. 35 (1H, d, J = 6. 4Hz)，5. 96 (1H,ddd, J= 17. 1,11. 0,6. 4Hz)，5· 32 (2H, m)，2· 30 (3H, S)，2· 15 (3Η, S)。MSm/z :235 (M+H)+。从Γ-乙酰氧基胡椒酚乙酸酯抑制HIV-1的Rev蛋白质的作用机理考虑，在Γ -乙酰氧基胡椒酚乙酸酯的2或/和3位有吸电子基如二氧化氮(NO2)，氰基(CN)，氟(F)，氯(Cl)，溴(Br)等取代，这类I’ -乙酰氧基胡椒酚乙酸酯衍生化合物可以加强它们和Rev蛋白质的核外输出信号的受体蛋白质CRMl相结合，更有效地竞争Rev蛋白质的核外输出信号和受体蛋白质CRMl的结合，从而能加强抑制HIV-1的Rev蛋白质的作用而抑制HIV-1耐药病毒的复制。本专利技术用化学合成制备的2，3-二氟-Γ-乙酰氧基胡椒酚乙酸酯进行了抑制HIV-1耐药病毒复制活性的测定。2，3_ 二氟-1’ -乙酰氧基胡椒酚乙酸酯的制备取2，3_ 二氟-4-羟基苯甲醛500mg,加30ml四氢呋喃，在冰浴下向此溶液加入1. OM乙烯镁溴化物8mL，反应4小时，加氯化氨饱和水溶液中止反应。反应物用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯萃取液减压浓缩，浓缩物用硅胶柱分离，用正己烷与乙酸乙酯混合液作为溶媒进行洗脱，收集正己烷乙酸乙酯(3 I)洗脱物，减压浓缩。得到的浓缩物经干燥后，在冰浴下加20mL吡啶和2mL乙酰氯，室温下反应5小时，加饱和食盐水溶液中止反应。用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯萃取液减压浓缩，浓缩物用硅胶柱分离，用正己烷与乙酸乙酯混合液作为溶媒进行洗脱，收集正己烷乙酸乙酯(5 I)洗脱物，减压浓缩。浓缩物经核磁共振及质谱数据确定其化学结构为2，3-二氟-1’ -乙酰氧基胡椒酚乙酸酯。测定该化合物的数据为 NMR(⑶Cl3) δ 7. 10(lH，d，J=8. 5Hz)，6· 96(lH ，d，J = 8. 5Ηζ)，6· 35(lH，d，J = 6. 4Hz)，5· 96 (1Η, ddd, J = 17. 1，11. O,6. 4Ηζ)，5. 29 (2Η, m)，2. 33 (3Η, s)，2. 22 (3Η, s)。MS m/z :271 (Μ+Η)+。Γ -乙酰氧基胡椒酚乙酸酯及其衍生物对抑制HIV-1耐药病毒复制活性的测定HIV-1耐药病毒株本专利技术用于实验的HIV-1耐药病毒株为融合抑制剂Τ20耐药株 pNL4_3gp41 (36G)V38A, n42d ;pNL4_3gp41 (36G)V38F, n42S ;pNL4_3gp41(36G)V38A, N42T 及蛋白酶抑制剂耐药株HIV-1RF/V82F/184V。抑制HIV-1耐药病毒复制活性的测定药物对抗HIV-1耐药性活性的作用，一般可以根据HIV-1抗原(p24)表达水平，HIV-1诱导合胞体形成，逆转录酶活性等指标来评价。本专利技术用HIV-lp24抗原ELISA方法检测了不同浓度的I’ -乙酰氧基胡椒酚乙酸酯及其衍生物对Ri虫合抑制剂 T20 耐药株 pNL4_3gp41(36G)V38A, N42D ；pNL4_3gp41(36G)v38E, N42s ;pNL4_3gp41(36G)V38AjΜ2τ及蛋白酶抑制剂耐药株HIV-1RF/V82F/184V在急性感染C8166细胞中复制的抑制作用。为评价I’ -乙酰氧基胡椒酚乙酸酯及其衍生物抗HIV-1耐药性活性的细胞毒性作用，本专利技术米用 MTT (3_[4，5-dimethylthiazol-2-yl]-2, 5-diphenyltetr本文档来自技高网...
【技术保护点】
1′?乙酰氧基胡椒酚乙酸酯及其衍生物用于治疗HIV?1耐药病毒的感染。
【技术特征摘要】
1.1'-こ酰氧基胡椒酚こ酸酷及其衍生物用于治疗HIV-1耐药病毒的感染。2.根据权利要求1所述的HIV-1耐药病毒感染包括任何HIV-1耐药病毒。3.根据权利要求1所述的I'-こ酰氧基胡椒酚こ酸酯其立体结构可以是I'-S型，即 I' -(S)-こ酰氧基胡椒酌 こ酸酯[I' - (S) -Acetoxychavicol acetate]。4.根据权利要求1所述的I'-こ酰氧基胡椒酚こ酸酯其立体结构可以是I'-R型，即 I' -(R)-こ酰氧基胡椒酌■こ酸酯[I' - (R) -Acetoxychavicol acetate]。5.根据权利要求1所述的I'-こ酰氧基胡椒酚こ酸酯其立体结构可以是I'-RS型。即 I' - (RS)-こ酸氧基胡椒酌 こ酸酯[I' - (...
【专利技术属性】
技术研发人员：叶英，
申请(专利权)人：叶英，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。