一种轮虫总RNA和总蛋白提取方法技术

本发明专利技术涉及一种提取轮虫总RNA和总蛋白的方法。方法包括一种淡水轮虫、轮虫通用培养液、食物微藻及其培养液、微孔筛网，解剖镜、低温冰箱、细胞破碎仪、低温离心机，充气泵、PVP、PBS磷酸缓冲液和RNA提取常规试剂（包括TRIZOL，氯仿，异丙醇，DEPC水，乙醇）。轮虫为单个体克隆培养获得、人工配制液体培养基培养、食物微藻为淡水微绿球藻、PBS磷酸缓冲液pH=7.0。采用恒温、充气、持续光照方法，快速获得大量轮虫，除去微藻，富集活体轮虫进行总RNA和总蛋白的提取。该方法能方便，快速，经济的收集到大量的轮虫，用于分子生物学研究，并能有效的消除微藻的影响，适合实验室研究应用。

【技术实现步骤摘要】
—种轮虫总RNA和总蛋白提取方法
本专利技术属于水产学科生物
，具体是涉及一种提取水生浮游动物轮虫总蛋白和总RNA的方法。
技术介绍
轮虫(rotifer)是淡水生态系统主要功能群，90%以上鱼类早期开口生物饵料，也是环境污染和环境风险评价受试动物。总蛋白和总RNA的提取是进行分子生物学研究的基础。由于轮虫个体小，游动快速，难以富集足够量的活体轮虫进行分子生物学的研究。本专利技术具有所需设备简单、操作简便的特点。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种提取轮虫总RNA和总蛋白的方法。所提供方法包括轮虫通用培养液配制、饵料微藻培养液配制、活体轮虫富集技术、 微藻去除方法、总RNA释放方法、超声破碎方法。本专利技术所述轮虫总蛋白和总RNA提取方法，包括以下步骤(I)轮虫培养；(2)微藻去除将轮虫培养液装入50ml离心管中，4500rpm，4°C离心5分钟，微藻沉在离心管底部，小心倒出含有轮虫的上清，本步骤可重复2-3次直到藻类全部除去；(3)轮虫富集将300目的筛网折成漏斗状，架于烧杯上，用胶头滴管吸取去除微藻的轮虫培养液，缓慢的滴入筛网底部，滤去水分，之后用双蒸水冲洗数次，在解剖镜本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种轮虫总RNA和总蛋白提取的方法，其特征包括以下步骤：（1）轮虫培养（2）微藻去除：将轮虫培养液装入50ml离心管中，4500rpm，4℃离心5分钟，微藻沉积在离心管底部，倒出含有轮虫的上清，本步骤重复2?3次直到藻类全部除去；（3）轮虫富集：将300目的筛网折成漏斗状，架于烧杯上，用胶头滴管吸取去除微藻的轮虫培养液，滴入筛网底部，滤去水分，之后用双蒸水冲洗数次，在解剖镜下用10?100ml移液枪将轮虫吸到1.5ml离心管中；（3）冰冻：在超净台下，将轮虫转移到无RNA酶的离心管中，加1mlTRIZOL，上下颠倒数次，混匀后将离心管放入?80℃冰箱中，使其完全结冰；（4）总RNA提取：将加T...

【技术特征摘要】
1.一种轮虫总RNA和总蛋白提取的方法，其特征包括以下步骤(1)轮虫培养(2)微藻去除将轮虫培养液装入50ml离心管中，4500rpm，4°C离心5分钟，微藻沉积在离心管底部，倒出含有轮虫的上清，本步骤重复2-3次直到藻类全部除去；(3)轮虫富集将300目的筛网折成漏斗状，架于烧杯上，用胶头滴管吸取去除微藻的轮虫培养液，滴入筛网底部，滤去水分，之后用双蒸水冲洗数次，在解剖镜下用IO-IOOml移液枪将轮虫吸到I. 5ml离心管中；(3)冰冻在超净台下，将轮虫转移到无RNA酶的离心管中，加lmlTRIZOL，上下颠倒数次，混匀后将离心管放入_80°C冰箱中，使其完全结冰；(4)总RNA提取将加TRIZOL的提取液室温融化，12000转4°C离心5min;吸取上...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨家新，杨江华，
申请(专利权)人：南京师范大学，
类型：发明
国别省市：