【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种用于评价动物肠道微生物群落多样性的微生物基因组DNA间接提取方法。
技术介绍
动物肠道内存在着大量的微生物菌群，这些微生物对机体的营养、免疫、生长发育等方面有着巨大的影响。它们的分离和鉴定对于研究肠道菌群功能及与机体的相互关系非常重要。传统方法主要是把肠道微生物通过选择性培养基分离培养后，再进行纯菌的分类 鉴定。该技术不仅费时、费力，只能检测可培养微生物，而对肠道中大量未知的不可培养微生物无能为力。随着近年来现代生物技术的快速发展，大量分子生物学技术应用于肠道微生态学研究中，从动物肠道中提取基因组DNA是非常有用的方法，可用于检测不可培养的微生物，反映肠道微生物之间及微生物与宿主间的真实相互关系，使我们能够对肠道微生物有更完整的评价，也可以用来揭示肠道微生物生态系统中的基因的多样性及其随肠道环境的变化。这就要求从动物粪便样品中抽提和纯化肠道微生物基因组DNA。通过对样品中微生物基因组DNA的研究从而间接了解其中微生物的分布和组成情况。而建立高效、准确的微生物基因组DNA间接提取方法也成为了肠道微生物分子生态学研究的一个技术关键所在。基因组DNA...
【技术保护点】
一种用于评价动物肠道微生物群落多样性的微生物基因组DNA间接提取方法，其特征在于，包括以下步骤：1）向0.1?10g动物粪便样品中加入0.1?10mL预冷的无菌水混匀后，漩涡震荡5?20分钟，然后加入0.1?10mL匀浆缓冲液A，漩涡震荡5?20分钟，室温40?400g离心，收集上清液转移至另一离心瓶中；2）向上述步骤1）得到的沉淀物中加入0.2?20mL预冷的匀浆缓冲液B洗涤重悬，漩涡震荡5?20分钟，室温50?400g离心，取上清液与步骤1）所得上清液合并；3）将上述步骤2）得到的上清液室温下6000?15000rpm离心10?60分钟以回收菌体细胞；4）向上述步骤3）...
【技术特征摘要】
1.一种用于评价动物肠道微生物群落多样性的微生物基因组DNA间接提取方法，其特征在于，包括以下步骤 1)向O.I-IOg动物粪便样品中加入O. I-IOmL预冷的无菌水混匀后，漩涡震荡5_20分钟，然后加入O. I-IOmL匀浆缓冲液A，漩涡震荡5-20分钟，室温40_400g离心，收集上清液转移至另一离心瓶中； 2)向上述步骤I)得到的沉淀物中加入O.2-20mL预冷的匀浆缓冲液B洗涤重悬，漩涡震荡5-20分钟，室温50-400g离心，取上清液与步骤I)所得上清液合并； 3)将上述步骤2)得到的上清液室温下6000-15000rpm离心10-60分钟以回收菌体细胞； 4)向上述步骤3)回收得到的菌体细胞中加入I-IOOml的洗涤液C，洗涤2_10分钟，室温下6000-15000rpm离心10-60分钟以沉淀菌体细胞，其中洗涤液C为lg/L的焦磷酸钠； 5)向上述步骤4)得到的沉淀后的菌体细胞中加入20-200ul50mg/ml的溶菌酶和10-50ul 20mg/ml的蛋白酶K，20_40°C水浴10-40分钟，然后加入50-500 μ I细胞裂解液D，轻轻颠倒混勻1-10分钟，6000-15000rpm离心5_10分钟,沉淀碎片； 6)将上述步骤5)离心得到的上清转移到一个干净的离心管中，加入100-1500μ I蛋白去除液E到管中，用手轻轻颠倒混匀，室温放置5-10分钟，8000-15000rpm离心3_10分钟以沉淀蛋白质； 7)将上述步骤6)得到的上清转移到一个干净的离心管中，加入2-5倍体积DNA联接液F到离心管中,用手颠倒1-5分钟混匀； 8)将上述步骤7)得到混合液加入一个含结合柱的收集管中，室温放置1-5分钟，3000-10000rpm离心1_3分钟，倒掉收集管中的废液，将结合柱重新放入离心管中，再次加入上清液离心，直至所有上清液离心完毕； 9)将上述步骤8)含结合柱的的收集管放置在一个新的离心管中，加入300-700μ I洗涤液G到结合柱中，10000-13000rpm离心，...
【专利技术属性】
技术研发人员：王金斌，唐雪明，李文，祝子坪，李鹏，刘华，白蓝，蒋玮，何建华，陈大超，赵凯，
申请(专利权)人：上海市农业科学院，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。