用于检测产超广谱β‑内酰胺酶三种细菌耐药基因的LAMP引物组合及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种用于检测耐超广谱β‑内酰胺类的三种细菌耐药基因LAMP引物组合及其应用。本发明专利技术提供的引物组合，由序列1至序列18所示的18条引物组成。本发明专利技术提供的引物组合可应用于检测是否含有耐药基因CTX‑M‑1、CTX‑M‑9和GES，可应用于检测待测样本中是否含有耐药基因CTX‑M‑1和/或CTX‑M‑9和/或GES‑1。本发明专利技术提供的引物组合鉴定用于检测耐超广谱β‑内酰胺类的三种细菌耐药基因，具有高特异性和高灵敏度，可以实现简便、快速、准确检测。本发明专利技术具有重大的推广价值。

【技术实现步骤摘要】
用于检测产超广谱β-内酰胺酶三种细菌耐药基因的LAMP引物组合及其应用
本专利技术涉及生物
中，用于检测产超广谱β-内酰胺酶三种细菌耐药基因的LAMP引物组合及其应用。
技术介绍
抗菌药物是临床应用最广泛的一类药物，但近年感染性疾病的病死率迅速提升，究其原因在于抗生素滥用，耐药菌带来的用药困难。我国是抗生素滥用情况最为严重的国家之一，然而随着抗生素使用量的加大，细菌耐药情况也越发严重。抗生素种类繁多，作用机制多样，其中β-内酰胺类抗生素是指其化学结构中含有β-内酰胺环的一大类，包括青霉素类、头孢菌素类、β-内酰胺酶抑制剂、单环内酰胺类、碳青霉烯类等，可通过结合在青霉素结合蛋白(PBPs)上，从而破坏细菌细胞壁合成已达到抑菌灭菌的目的。细菌产生耐药性的原因很多，主要分为产生灭活酶、抗菌药物作用靶位改变、改变细菌外膜通透性、影响主动泵出系统、影响细菌被膜的形成及交叉耐药性等六方面。部分细菌可产生β-内酰胺酶，即细菌产生的能水解β-内酰胺类抗菌药物的灭活酶，它是细菌对β-内酰胺类抗菌药物耐药的主要机制。根据《产超广谱β-内酰胺酶细菌感染防治专家共识》中所述，其中超广谱β-内酰胺酶(Extended-Sperctrumβ-Lactamases,ESBLs)是一类主要由大肠埃希氏菌、肺炎克雷伯菌等肠杆菌科细菌由于体内相关耐药基因的存在，而产生的一类耐药形式。即细菌在持续的各种β-内酰胺类抗菌药物的选择压力下，被诱导产生的及不断变异的β-内酰胺酶，它扩展了其耐受头孢他啶、头孢噻肟、头孢吡肟等第3代及第4带头孢菌素，以及氨曲南等单环β-内酰胺类抗菌药物的能力。目前关于对细菌耐药性的检测主要有以下几种方法：细菌耐药表型的检测(包括耐药筛选试验、折点敏感试验及药敏试验的仪器化和自动化等)，β-内酰胺酶检测，特殊耐药菌检测和耐药基因检测等。其中最为直观的检测方法是以体外培养的药物检测，但仍存在培养时间长等缺陷。随着耐药机理的研究逐步深入，分子生物学方法检测细菌耐药逐渐被临床接受。常见检测细菌耐药基因的方法主要有：聚合酶链式反应(PCR)、PCR-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)、PCR-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)、生物芯片技术(genechip)、自动DNA测序(DNAsequencing)等。传统的基因鉴定方法为PCR法和DNA测序法，其中传统的PCR法检测周期较长，通常需要3-4个小时；SangerDNA测序法对引物特异性要求较高，且价格较昂贵，后期数据分析较复杂，不适合临床推广使用。近年新发展起来的核酸等温扩增技术，无论是在反应时间还是仪器要求方面，都比PCR技术更有优势。在这些众多等温扩增技术中，又以环介导等温扩增(LAMP)的应用最为成熟、最为广泛，其高灵敏度、高特异性、快速的扩增得到了市场的检验和认可。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种用于检测产ESBL酶的三种耐药基因LAMP引物组合及其应用。本专利技术首先提供了一种引物组合，为如下(a1)或(a2)或(a3)：(a1)由引物组Ⅰ、引物组Ⅱ和引物组Ⅲ组成；(a2)由所述引物组Ⅰ、所述引物组Ⅱ和所述引物组Ⅲ中的任意两个组成；(a3)所述引物组Ⅰ、所述引物组Ⅱ或所述引物组Ⅲ；所述引物组Ⅰ由引物Ⅰ-F3、引物Ⅰ-B3、引物Ⅰ-FIP、引物Ⅰ-BIP、引物Ⅰ-LF和引物Ⅰ-LB组成；所述引物Ⅰ-F3为如下(b1)或(b2)；(b1)序列表的序列1所示的单链DNA分子；(b2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅰ-B3为如下(b3)或(b4)；(b3)序列表的序列2所示的单链DNA分子；(b4)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅰ-FIP为如下(b5)或(b6)；(b5)序列表的序列3所示的单链DNA分子；(b6)将序列3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅰ-BIP为如下(b7)或(b8)；(b7)序列表的序列4所示的单链DNA分子；(b8)将序列4经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列4具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅰ-LF为如下(b9)或(b10)；(b9)序列表的序列5所示的单链DNA分子；(b10)将序列5经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列5具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅰ-LB为如下(b11)或(b12)；(b11)序列表的序列6所示的单链DNA分子；(b12)将序列6经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列6具有相同功能的DNA分子。所述引物组Ⅱ由引物Ⅱ-F3、引物Ⅱ-B3、引物Ⅱ-FIP、引物Ⅱ-BIP、引物Ⅱ-LF和引物Ⅱ-LB组成；所述引物Ⅱ-F3为如下(c1)或(c2)；(c1)序列表的序列7所示的单链DNA分子；(c2)将序列7经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列7具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅱ-B3为如下(c3)或(c4)；(c3)序列表的序列8所示的单链DNA分子；(c4)将序列8经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列8具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅱ-FIP为如下(c5)或(c6)；(c5)序列表的序列9所示的单链DNA分子；(c6)将序列9经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列9具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅱ-BIP为如下(c7)或(c8)；(c7)序列表的序列10所示的单链DNA分子；(c8)将序列10经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列10具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅱ-LF为如下(c9)或(c10)；(c9)序列表的序列11所示的单链DNA分子；(c10)将序列11经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列11具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅱ-LB为如下(c11)或(c12)；(c11)序列表的序列12所示的单链DNA分子；(c12)将序列12经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列12具有相同功能的DNA分子。所述引物组Ⅲ由引物Ⅲ-F3、引物Ⅲ-B3、引物Ⅲ-FIP、引物Ⅲ-BIP、引物Ⅲ-LF和引物Ⅲ-LB组成；所述引物Ⅲ-F3为如下(d1)或(d2)；(d1)序列表的序列13所示的单链DNA分子；(d2)将序列13经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列13具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅲ-B3为如下(d3)或(d4)；(d3)序列表的序列14所示的单链DNA分子；(d4)将序列14经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列14具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅲ-FIP为如下(d5)或(d6)；(d5)序列表的序列15所示的单链DNA分子；(d6)将序列15经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列15具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅲ-BIP为如下(d7)或(d8)；(d7)序列表的序列16所示的单链DNA分子；(d8)将序列16经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列16具本文档来自技高网...

【技术保护点】
引物组合，为如下(a1)或(a2)或(a3)：(a1)由引物组Ⅰ、引物组Ⅱ和引物组Ⅲ组成；(a2)由所述引物组Ⅰ、所述引物组Ⅱ和所述引物组Ⅲ中的任意两个组成；(a3)所述引物组Ⅰ、所述引物组Ⅱ或所述引物组Ⅲ；所述引物组Ⅰ由引物Ⅰ‑F3、引物Ⅰ‑B3、引物Ⅰ‑FIP、引物Ⅰ‑BIP、引物Ⅰ‑LF和引物Ⅰ‑LB组成；所述引物Ⅰ‑F3为如下(b1)或(b2)；(b1)序列表的序列1所示的单链DNA分子；(b2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅰ‑B3为如下(b3)或(b4)；(b3)序列表的序列2所示的单链DNA分子；(b4)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅰ‑FIP为如下(b5)或(b6)；(b5)序列表的序列3所示的单链DNA分子；(b6)将序列3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅰ‑BIP为如下(b7)或(b8)；(b7)序列表的序列4所示的单链DNA分子；(b8)将序列4经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列4具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅰ‑LF为如下(b9)或(b10)；(b9)序列表的序列5所示的单链DNA分子；(b10)将序列5经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列5具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅰ‑LB为如下(b11)或(b12)；(b11)序列表的序列6所示的单链DNA分子；(b12)将序列6经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列6具有相同功能的DNA分子；所述引物组Ⅱ由引物Ⅱ‑F3、引物Ⅱ‑B3、引物Ⅱ‑FIP、引物Ⅱ‑BIP、引物Ⅱ‑LF和引物Ⅱ‑LB组成；所述引物Ⅱ‑F3为如下(c1)或(c2)；(c1)序列表的序列7所示的单链DNA分子；(c2)将序列7经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列7具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅱ‑B3为如下(c3)或(c4)；(c3)序列表的序列8所示的单链DNA分子；(c4)将序列8经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列8具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅱ‑FIP为如下(c5)或(c6)；(c5)序列表的序列9所示的单链DNA分子；(c6)将序列9经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列9具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅱ‑BIP为如下(c7)或(c8)；(c7)序列表的序列10所示的单链DNA分子；(c8)将序列10经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列10具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅱ‑LF为如下(c9)或(c 10)；(c9)序列表的序列11所示的单链DNA分子；(c10)将序列11经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列11具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅱ‑LB为如下(c11)或(c12)；(c11)序列表的序列12所示的单链DNA分子；(c12)将序列12经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列12具有相同功能的DNA分子；所述引物组Ⅲ由引物Ⅲ‑F3、引物Ⅲ‑B3、引物Ⅲ‑FIP、引物Ⅲ‑BIP、引物Ⅲ‑LF和引物Ⅲ‑LB组成；所述引物Ⅲ‑F3为如下(d1)或(d2)；(d1)序列表的序列13所示的单链DNA分子；(d2)将序列13经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列13具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅲ‑B3为如下(d3)或(d4)；(d3)序列表的序列14所示的单链DNA分子；(d4)将序列14经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列14具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅲ‑FIP为如下(d5)或(d6)；(d5)序列表的序列15所示的单链DNA分子；(d6)将序列15经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列15具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅲ‑BIP为如下(d7)或(d8)；(d7)序列表的序列16所示的单链DNA分子；(d8)将序列16经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列16具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅲ‑LF为如下(d9)或(d10)；(d9)序列表的序列17所示的单链DNA分子；(d10)将序列17经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列17具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅲ‑LB为如下(d11)或(d12)；(d11)序列表的序列18所示的单链DNA分子；(d12)将序列18经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列18具有相同功能的DNA分子。...

【技术特征摘要】
1.引物组合，为如下(a1)或(a2)或(a3)：(a1)由引物组Ⅰ、引物组Ⅱ和引物组Ⅲ组成；(a2)由所述引物组Ⅰ、所述引物组Ⅱ和所述引物组Ⅲ中的任意两个组成；(a3)所述引物组Ⅰ、所述引物组Ⅱ或所述引物组Ⅲ；所述引物组Ⅰ由引物Ⅰ-F3、引物Ⅰ-B3、引物Ⅰ-FIP、引物Ⅰ-BIP、引物Ⅰ-LF和引物Ⅰ-LB组成；所述引物Ⅰ-F3为如下(b1)或(b2)；(b1)序列表的序列1所示的单链DNA分子；(b2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅰ-B3为如下(b3)或(b4)；(b3)序列表的序列2所示的单链DNA分子；(b4)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅰ-FIP为如下(b5)或(b6)；(b5)序列表的序列3所示的单链DNA分子；(b6)将序列3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅰ-BIP为如下(b7)或(b8)；(b7)序列表的序列4所示的单链DNA分子；(b8)将序列4经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列4具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅰ-LF为如下(b9)或(b10)；(b9)序列表的序列5所示的单链DNA分子；(b10)将序列5经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列5具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅰ-LB为如下(b11)或(b12)；(b11)序列表的序列6所示的单链DNA分子；(b12)将序列6经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列6具有相同功能的DNA分子；所述引物组Ⅱ由引物Ⅱ-F3、引物Ⅱ-B3、引物Ⅱ-FIP、引物Ⅱ-BIP、引物Ⅱ-LF和引物Ⅱ-LB组成；所述引物Ⅱ-F3为如下(c1)或(c2)；(c1)序列表的序列7所示的单链DNA分子；(c2)将序列7经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列7具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅱ-B3为如下(c3)或(c4)；(c3)序列表的序列8所示的单链DNA分子；(c4)将序列8经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列8具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅱ-FIP为如下(c5)或(c6)；(c5)序列表的序列9所示的单链DNA分子；(c6)将序列9经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列9具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅱ-BIP为如下(c7)或(c8)；(c7)序列表的序列10所示的单链DNA分子；(c8)将序列10经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列10具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅱ-LF为如下(c9)或(c10)；(c9)序列表的序列11所示的单链DNA分子；(c10)将序列11经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列11具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅱ-LB为如下(c11)或(c12)；(c11)序列表的序列12所示的单链DNA分子；(c12)将序列12经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列12具有相同功能的DNA分子；所述引物组Ⅲ由引物Ⅲ-F3、引物Ⅲ-B3、引物Ⅲ-FIP、引物Ⅲ-BIP、引物Ⅲ-LF和引物Ⅲ-LB组成；所述引物Ⅲ-F3为如下(d1)或(d2)；(d1)序列表的序列13所示的单链DNA分子；(d2)将序列13经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列13具有相同功能的DNA分子；所述引物Ⅲ-B3为如下(d3)或(d4)；(d3)序列表的序列14所示的单链DNA分子；(d4)将序列14经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和...

【专利技术属性】
技术研发人员：张岩，刘莹莹，王颢婷，邢婉丽，程京，
申请(专利权)人：博奥生物集团有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11