一种海参体壁总DNA提取方法技术

本发明专利技术公开了一种海参体壁总DNA提取方法。它包括样品预处理、样品的裂解、样品消化液用氯仿：异戊醇抽提，含有DNA的水相加入等体积的异丙醇高盐溶液，-20℃下放置20min，12000-13000g/min离心12-15min，弃上清，取DNA沉淀；所述的异丙醇高盐溶液是由异丙醇和5mol/L?NaCl按体积比3：1混合而成；用体积分数70%乙醇水溶液的洗涤DNA沉淀，然后12000-13000g/min离心3-5min，弃上清；重复操作2-3次，将DNA沉淀干燥，再用0.1×TE溶液充分溶解保存。因此利用本发明专利技术的海参体壁总DNA提取方法能够高质量的提取到海参DNA，其DNA纯度高，避免了粘多糖、胶原蛋白和色素等影响，能满足后续PCR等分子生物学实验的要求。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物化学与分子生物学领域，具体涉及一种海参体壁总DNA提取方法。
技术介绍
海参体壁中含有丰富的胶原、黏多糖和多种微量元素，具有较高的营养价值和药用价值。在我国被认为是传统的美味和滋补品。全球可供食的海参种类约50多种，作为名贵的海产品，市场上海参通常加工为干品或冻品出售，海参经过多道工序加工成干品后，很难从外部形体上分辨出其种类。目前在市面上销售的海参产品，大多根据其颜色和产地来命名贴标，如“美国红参”、“非洲海参”等，缺乏规范的商品命名，海参市场贴标混乱。 根据海参线粒体DNA片段如COI和16S rDNA序列,可以从分子水平鉴定海参种类和开发出简便的种类鉴别方法。由于海参含有丰富的黏多糖和蛋白质，造成DNA的提取比较困难，尤其是高质量DNA的获得，DNA中多糖等杂质过多会影响后续PCR扩增等分子生物学实验，进而影响了海参种类的分子鉴定。另外，干海参经过加工处理，其核基因组DNA已降解，与核基因组DNA相比，线粒体DNA结构简单、稳定，拷贝数多，可以用于海参种类的分子鉴定。
技术实现思路
本专利技术的目的是为解决现有技术中存在的上述问题，提供一种能对海参酒精保存样品和本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种海参体壁总DNA提取方法，其特征在于，包括以下步骤：（a）样品预处理：第一步是将海参的酒精保存样品用PBS溶液置换出酒精，或将海参干品用PBS溶液浸发，将第一步处理好的样品在高盐缓冲液中剪碎样品，然后固液分离，弃液相取剪碎的固体样品作为预处理后的样品；所述的高盐缓冲液为：200mmol/L?Tris?HCl,50mmol/L?EDTA,500mmol/L?NaCl,0.2%β?巯基乙醇，余量为水，pH8.0；（b）样品的裂解：将预处理后的样品加入到裂解液中，再加入适量的蛋白酶K降解蛋白质，65℃消化30~60min，每隔5~10min混匀一次，待样品消化彻底后，12000g/min离心2~...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：夏建军，胡超群，张吕平，王艳红，
申请(专利权)人：中国科学院南海海洋研究所，
类型：发明
国别省市：