【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及基因工程领域。具体而言,本专利技术涉及用于在细胞基因组中进行多核 苷酸的位点特异性整合、删除、倒位、交换和易位的组合物和方法。本专利技术也涉及酶、多核苷酸、多肽和载体构建物。
技术介绍
许多噬菌体和整合型质粒编码位点特异性重组系统,这使得能够将它们的基因组稳定地整合入它们宿主的基因组中,并将它们的基因组从宿主基因组切除。在这些系统中,对于重组反应的最小要求是重组酶和两个重组位点,其中重组酶催化重组事件(Sadowski(1986)J. Bacteriol. 165:341-347 ;Sadowski(1993)FASEB J.7:760-767)。对于噬菌体整合系统而言,这些是指附着(att)位点,来自噬菌体DNA的attP元件以及在细菌基因组中存在的attB元件。这两个附着位点可能共有少至几个碱基对的序列同一性。重组酶蛋白与两个att位点结合,并催化DNA链的保守性和互换性交换,这导致环状噬菌体或质粒DNA整合入宿主DNA。也可能需要其他噬菌体或宿主因子,诸如DNA结合蛋白IHF、整合宿主因子,以获得有效率的反应(Friedman(1988)Ce ...
【技术保护点】
在真核细胞中获得位点特异性重组的方法,所述方法包括:提供包含第一重组位点和第二重组位点的分离的真核细胞;将所述第一和第二重组位点与原核重组酶多肽接触,从而在所述重组位点之间产生重组,其中所述重组酶多肽能够介导所述第一和第二重组位点之间的重组,所述第一重组位点是噬菌体基因组重组附着位点(attP)或细菌基因组重组附着位点(attB),所述第二重组位点是attB或attP,所述重组酶选自化脓性链球菌(Streptococcus?pyogenes)噬菌体重组酶或枯草芽孢杆菌(Bacillus?subtilis)噬菌体重组酶,条件是当第一重组附着位点是attB时,所述第二重组附着位 ...
【技术特征摘要】
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