本发明专利技术提供了一种羧酸酯酶CES2的特异性荧光探针底物及其应用，该特异性探针底物是C-4羟基萘二甲酰亚胺的苯甲酰酯类化合物，其可用于测定生物体系中CES2的酶活。CES2酶活测定的流程如下：选择C-4羟基萘二甲酰亚胺的苯甲酰酯水解脱苯甲酰反应为探针反应，通过定量检测单位时间内其水解代谢产物的生成量来测定各生物样品、细胞、在体及整体器官中CES2酶的活性。本发明专利技术可用于不同种属、不同个体来源生物样本中CES2酶活的定量评估，以及不同来源的动物组织细胞培养液及细胞制备物中CES2酶活的定量测定，以期实现对重要药物代谢酶CES2处置药物能力的评估。此外，借助该探针反应还可用于体外快速筛选CES2的抑制剂。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术提供了一种羧酸酯酶CES2的特异性荧光探针底物及其应用，该特异性探针底物是C-4羟基萘二甲酰亚胺的苯甲酰酯类化合物，其可用于测定生物体系中CES2的酶活。CES2酶活测定的流程如下：选择C-4羟基萘二甲酰亚胺的苯甲酰酯水解脱苯甲酰反应为探针反应，通过定量检测单位时间内其水解代谢产物的生成量来测定各生物样品、细胞、在体及整体器官中CES2酶的活性。本专利技术可用于不同种属、不同个体来源生物样本中CES2酶活的定量评估，以及不同来源的动物组织细胞培养液及细胞制备物中CES2酶活的定量测定，以期实现对重要药物代谢酶CES2处置药物能力的评估。此外，借助该探针反应还可用于体外快速筛选CES2的抑制剂。【专利说明】一类人羧酸酯酶2的特异性荧光探针底物及其应用
本专利技术属医药
，具体涉及一类人羧酸酯酶2 (CES2)的特异性荧光探针底 物及其应用。
技术介绍
羧酸酯酶（Carboxylesterase，CES)是机体内重要的I相水解代谢酶，催化化合物 发生酯键断裂，暴露极性的羟基或羧基，进而被体内CYP450或UGTs等其他代谢酶继续催化 代谢，使其更有效地排出体外。多种外源性物质，如伊立替康（CPT-11 )、奥司他韦(达菲）等 酯类结构前体药物以及结构中含有酯键的其他化合物均需要经羧酸酯酶催化途径进行活 化或代谢消除。 人体内介导药物代谢的羧酸酯酶目前主要有2个家族：CES1和CES2,其中CES1 又可继续被分为CESlb和CESlc两种亚型。CES1和CES2具有不同的组织分布特异性及 底物选择性，肝脏中主要表达CES1，同时表达少来CES2,而小肠中则以CES2亚型为主， 只有少量的CES1分布（Life Sci. 2007, 81 (11) :924-932)。近年来还发现多种肿瘤细胞 高表达CES2,可借助此特征设计CES2水解的抗肿瘤前体药物实现选择性杀伤肿瘤细胞 的效果（Clin Cancer Res.2002,8(8):2605-2611)。由于多数口服前药或酯类药物分子 需先经过肠道才能被吸收进入血液循环，因此肠道CES2酶对酯类药物的代谢被认为是 酯类化合物首过代谢的主要组成部分，CES2酶活的差异对于前体药物的生物利用度具 有较重要的影响。此外，有些经静脉给药的前体药物，如伊立替康，会经过胆汁排泄分泌 到肠道中，继而被肠道中的CES2催化水解释放活性代谢产物，可能会在局部产生毒副作 用。可通过筛选CES2的高效抑制剂将其应用于减缓伊立替康导致的迟发型腹泻（Cancer Res. 2000,60 (17):4725-4728;Mol Cancer Ther.2004,3 (8):903-909)。 本专利技术中提供了一类C-4羟基萘二甲酰亚胺的酯类衍生化合物及其作为CES2酶 探针底物的应用，其经羧酸酯酶CES2水解后可生成荧光发射波谱不同于原型的水解产物。 该酶促反应具有选择性高、代谢产物易检测、酶活及抑制活性评价快速省时等特点。
技术实现思路
本专利技术提供了一类羧酸酯酶CES2的特异性荧光探针底物及其应用，该类特异性 探针底物是C-4羟基萘二甲酰亚胺的酯类衍生物，其结构见式（1 )，其原型和水解产物的荧 光发射波长具有明显差异，且产物更易检测。利用该探针反应可对多种生物体系中CES2的 分布和功能进行定量评价。 【权利要求】1. 一类人羧酸酯酶2 (Carboxylesterase2, CES2)的特异性突光探针底物，其特征 在于：该特异性探针底物是C-4羟基萘二甲酰亚胺的苯甲酰酯类化合物，其结构通式见式 (1)，其中 R 为-H 或-CH3、-CF3、-C2H5、-C 3H6 等烷基或-〇CH3、-〇C2H5 中的一种，或-Br、-Cl、-F 等卤素取代基中的一种；2. -种权利要求1所述特异性荧光探针底物在定量测定重组表达CES2单酶、人或动物 组织制备液、各类组织细胞等生物体系中CES2酶活中的应用，其特征在于：采用权利要求1 所述式（1)化合物作为CES2亚酶的特异性底物，通过定量检测单位时间内的底物消除量或 水解产物的生成量来定量测定上述生物体系中CES2的活性。3. 按照权利要求2所述的应用，其特征在于：在磷酸缓冲液中，底物浓度介于1/10? l〇Km之间；孵育体系pH介于5. 5?10. 5之间；反应温度介于20?60°C之间。4. 按照权利要求2所述的应用，其特征在于：上述反应体系中的产物生成率或底物转 化率介于1%?20%之间。5. 按照权利要求2所述的应用，其特征在于：底物及其水解产物均具有荧光属性，可 采用荧光检测器实现产物及底物的快速、灵敏检测；荧光检测条件为：激发波长450nm，在 530?650nm进行荧光发射谱的检测。6. 按照权利要求2所述的应用，其特征还在于：该特异性探针底物及相应CES2活性检 测过程不会受生物体系基质及杂质的干扰，可用于各种重组CES2、人或动物组织制备液、或 各类组织细胞中CES2酶活的定量测定。7. 按照权利要求2所述的应用，其特征还在于：该方法还可用于人羧酸酯酶CES2抑制 剂的快速筛选及抑制能力的定量评价。【文档编号】C12Q1/44GK104120164SQ201310150681【公开日】2014年10月29日 申请日期:2013年4月26日 优先权日:2013年4月26日 【专利技术者】杨凌, 刘兆明, 葛广波, 邹超, 王平, 杜逊甫 申请人:中国科学院大连化学物理研究所本文档来自技高网...
【技术保护点】
一类人羧酸酯酶2（Carboxylesterase2，CES2）的特异性荧光探针底物，其特征在于：该特异性探针底物是C‑4羟基萘二甲酰亚胺的苯甲酰酯类化合物，其结构通式见式（1），其中R为‑H或‑CH3、‑CF3、‑C2H5、‑C3H6等烷基或‑OCH3、‑OC2H5中的一种，或‑Br、‑Cl、‑F等卤素取代基中的一种；
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：杨凌，刘兆明，葛广波，邹超，王平，杜逊甫，
申请(专利权)人：中国科学院大连化学物理研究所，
类型：发明
国别省市：辽宁;21
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