一种聚合酶链反应增强方法技术

本发明专利技术涉及一种聚合酶链反应增强方法，属于生物技术领域，是采用牛凝血酶蛋白作为添加剂，应用于多种类型扩增模板和扩增环境中，以显著提高聚合酶链反应(PCR)的效率和专一性的方法。通过在PCR体系中添加适量牛凝血酶蛋白，可提高低模板浓度单链DNA模板、低模板浓度单链随机序列DNA文库、乙肝患者血清中乙肝病毒基因(HBV)、人类全基因样本中性别基因的扩增效率和抑制引物二聚体的形成。此外，在有纳米金、氧化石墨烯类抑制剂存在的条件下，加入牛凝血酶蛋白，可消除抑制剂对于PCR反应的抑制性作用。与目前最常用的蛋白类PCR添加剂牛血清蛋白(BSA)相比，牛凝血酶蛋白的用量仅是BSA常规用量的十分之一或更少。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及，属于生物

技术介绍
聚合酶链反应(PCR)是一种类似于DNA天然复制过程的体外DNA扩增的卓越方法。主要由变性-退火-延伸三个基本反应步骤构成:即①双链模板DNA经高温变性后解链成单链；②在DNA聚合酶的作用下，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合！③DNA模板-引物结合物，以脱氧核糖核苷酸(dNTP)为原料，靶序列为模板，按碱基互补配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链。PCR技术所涉及的应用研究领域极为广泛，如疾病诊断、生物多样性分析、遗传图谱构建、基因序列克隆、核酸序列测定、核酸序列体外突变，考古工作等。PCR技术也是指数富集的核酸适配体系统进化(SELEX)过程中的重要环节。利用SELEX技术可以从人工合成的随机单链核酸序列文库中筛选出能够与靶分子高特异性、高亲和性结合的核酸适配体(aptamer)。SELEX技术广泛适用于各种无机、有机小分子,肽,蛋白质,糖和抗生素,甚至复杂细胞和组织的检测。尤其，当靶分子为HIV-1表面糖蛋白(gpl20) ,MUCl-多肽(乳腺癌、胃癌等其他癌症的肿瘤标记物)，白血病细胞(CCR本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种聚合酶链反应增强方法，其特征在于，使用牛凝血酶蛋白作为添加剂。

【技术特征摘要】
1.一种聚合酶链反应增强方法，其特征在于，使用牛凝血酶蛋白作为添加剂。2.根据权利要求1所述的聚合酶链反应增强方法，其特征在于，所述牛凝血酶蛋白在反应体系中的含量为=0.0074 u g/mL彡牛凝血酶蛋白彡84y g/mL。3.根据权利要求2所述的聚合酶链反应增强方法，其特征在于，对于简单线性模板L和G的聚合酶链反应,所述牛凝血酶蛋白在反应体系中的含量为2.g/mL。4.根据权利要求2所述的聚合酶链反应增强方法，其特征在于，对于随机单链DNA文库的聚合酶链反应，所述牛凝血酶蛋白在反应体系中的含量为25 ii g/mL。5.根据权利要求2所述的聚合酶链反应增强方法，其特征在于，对于随机单链DNA文库的实时定量聚合酶链反应，所述牛凝血酶蛋白在反应体系中的含量为64 ii g/mL。6.根据权利要求2所述的聚合酶链反应增强方法，其特征在于，...

【专利技术属性】
技术研发人员：娄新徽，张颖，邹如杏，王文洁，
申请(专利权)人：首都师范大学，
类型：发明
国别省市：