一种针对膨胀污泥中Type0092型丝状菌群聚合酶链式反应方法，涉及污水生物处理领域。反应体系：2倍浓度的Taq PreMix试剂12.5μl；DNA模板0.5-1μl；正向引物U27f(10μm/L)0.5-1μl；反向引物U1492r(浓度为10μm/L)0.5-1μl；加灭菌水到总体积25μl。程序：①1个循环：温度为94℃时间为2-5min。②35个循环：依次为变性温度94℃，时间20-45s；复性温度53-55℃，时间30-45s；延伸温度72℃，时间1-2min。③1个循环：温度72℃，时间5-8min。将扩增产物在1.5％的琼脂糖凝胶电泳中跑胶，得到分离良好的DNA亮条带。本发明专利技术快速准确地对Type0092型丝状菌群进行PCR反应扩增，进行鉴定分析，为后续分析提供基础。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及污水生物处理领域，提供一种针对膨胀污泥中Type 0092型丝状菌群 的聚合酶链式反应方法，可以快速准确地对Type 0092型丝状菌群进行PCR反应扩增，对污 泥中Type 0092型丝状菌群进行鉴定分析，同时为后续该菌种定量分析提供基础。
技术介绍
污泥膨胀一直以来是制约活性污泥法污水处理厂运行的常见问题，大量文献表 明：大多数污泥膨胀问题是由丝状微生物过度增殖引起的。然而，在污水处理中引起污泥膨 胀的丝状菌种类繁多，其中Type 0092型丝状菌群是引起各污水处理工艺污泥膨胀常见菌 种之一。因此考察活性污泥中Type 0092型丝状菌群及与其相互作用菌种的群落结构特性 以抑制其过度生长具有重要意义。 然而，目前国内外由于分析技术的限制，对于各种丝状菌的鉴定与分析方法也不 尽相同，常用的丝状菌鉴定方法有：① Eikelboom丝状菌鉴定方法主要是通过对丝状菌进 行革兰氏和纳氏染色，通过对丝状菌形态结构分析来对其进行分类。然而以丝状细菌形 态学为基础的分类方法，存在着不足之处：一些丝状细菌如浮游球衣菌、Typel701和Type 0092能够根据生存环境的不同而改变其形态特征；另外，一些丝状细菌虽然在形态上相 似，但它们的生理特征和在分类学上的类别却显著不同。②丝状菌的荧光原位杂交（FISH) 方法是将相应的丝状菌DNA (或RNA)探针用特殊的核苷酸分子标记，然后将探针直接杂交 到染色体或DNA纤维切片上，再用与荧光素分子偶联的单克隆抗体与探针分子特异性结合 来进行丝状菌鉴定与分析。然而此方法无法进行后续特定菌种的准确定量及相关菌群发育 树分析。 因此，目前缺乏针对特定优势丝状菌如Type 0092型丝状菌群的PCR分析方法，对 特定优势丝状菌进行PCR扩增分析，后续进行相关菌群发育树及绝对定量分析。
技术实现思路
针对上述研宄的不足之处，本专利技术提供针对Type 0092型丝状菌群聚合酶链式反 应方法，可以快速准确地对Type 0092型丝状菌群进行PCR反应扩增，对污泥中Type 0092 型丝状菌群进行准确鉴定分析，同时为后续该菌种绝对定量分析及相关菌群发育树的研宄 打下基础。 一种针对膨胀污泥中Type 0092型丝状菌群的引物，其核苷酸序列为： 正向：5' -GAGTTTGATCMTGGCTCAG-3' 反向：5' -GGYTACCTTGTTACGACTT-3'。 -种针对膨胀污泥中Type 0092型丝状菌群聚合酶链式反应方法，其特征在于： (I)Type 0092型丝状菌群聚合酶链式反应方法的反应体系： 2 倍浓度的 Taq PreMix 试剂 12. 5 μ 1 ; DNA 模板 0· 5-1 μ I ; 正向引物U27f 0. 5-1 μ I ;正向引物序列为： 5 ' -GAGTTTGATCMTGGCTCAG-3 '，浓度为 10 μ m/L ; 反向引物U1492r 0. 5-1 μ I ;反向引物序列为： 5 ' -GGYTACCTTGTTACGACTT-3 '，浓度为 10 μ m/L ; 加灭菌水到总体积25 μ 1。 (2) Type 0092型丝状菌群聚合酶链式反应的反应程序： ①1个循环：温度为94°C时间为2-5min。 ②35个循环：依次为变性温度94 °C，时间20-45s ;复性温度53-55 °C，时间 30-45s ;延伸温度 72°C，时间 l_2min。 ③1个循环：温度72°C，时间5-8min。 一种针对膨胀污泥中Type 0092型丝状菌群的PCR的试剂盒，包括所述引物。 针对膨胀污泥中Type 0092型丝状菌群聚合酶链式反应（PCR)方法，特征在于： (I)Type 0092型丝状菌群聚合酶链式反应方法的反应体系： 2 倍浓度的 Taq PreMix 试剂 12. 5 μ 1 ; DNA 模板 0· 5-1 μ 1 ; 正向引物 U27f(序列为5' -GAGTTTGATCMTGGCTCAG-3'，浓度 10ym/L)0.5-lyl ; 反向引物 U1492r (序列 5' -GGYTACCTTGTTACGACTT-3'，浓度 10ym/L)(X5-lyl ; 加灭菌水到总体积25 μ 1。 (2) Type 0092型丝状菌群聚合酶链式反应的反应程序： ①1个循环：温度为94°C时间为2-5min。 ②35个循环：依次为变性温度94 °C，时间20-45s ;复性温度53-55 °C，时间 30-45s ;延伸温度 72°C，时间 l_2min。 ③1个循环：温度72°C，时间5-8min。 (3)在保证以上反应体系和反应程序的基础上，进行Type 0092型丝状菌群聚合 酶链式反应（PCR)反应，并将扩增产物在1.5%的琼脂糖凝胶电泳中跑胶，得到分离良好的 DNA亮条带。 进一步，本专利技术膨胀污泥中Type 0092型丝状菌群聚合酶链式反应（PCR)方法： (1)准备200 μ 1离心管，依次加入2倍浓度的Taq PreMix试剂12. 5 μ I ;DNA模 板 0· 5-1 μ 1 ;正向引物 U27f (10 μ m/L) 0· 5-1 μ 1 ;反向引物 U1492r (10 μ m/L) 0· 5-1 μ 1 ;加 灭菌水到总体积25 μ I ;同时用灭菌水代替DNA模板进行阴性对照试验。 (2)将装有阴性对照及样品的200 μ I PCR反应离心管做好标记，放入TE CHNE TC-512 型 PCR 仪。 (3)设定反应程序：①1个循环：温度为94°C时间为2-5min。②35个循环：依次为 变性温度94°C，时间20-45s ;复性温度53-55°C，时间30-45s ;延伸温度72°C，时间l_2min。 ③1个循环：温度72°C，时间5-8min。 与现有技术相比，本专利技术具有以下优点： (1)本专利技术提供的Type 0092型丝状菌群聚合酶链式反应（PCR)方法的反应体系 和反应当前第1页1 2 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种针对膨胀污泥中Type 0092型丝状菌群的引物，其核苷酸序列为：正向：5’‑GAGTTTGATCMTGGCTCAG‑3’反向：5’‑GGYTACCTTGTTACGACTT‑3’。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：焦二龙，高春娣，田烨，王惟肖，樊士信，李任飞，彭永臻，
申请(专利权)人：北京工业大学，
类型：发明
国别省市：北京;11
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。