反转录反应液及制备cDNA的方法技术

本发明专利技术提出了一种反转录反应液及其一种制备cDNA的方法。本发明专利技术所提出的反转录反应液和利用该反转录反应液制备cDNA的方法，具有操作简便、反应快速、反应效果好、可重复性高的优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物
，具体的，本专利技术涉及一种反转录反应液及一种制备cDNA的方法。
技术介绍
基因表达与调控的分析与检测是现代分子生物学和医学研究领域中的重要课题。近年来随着基因表达调控分析检测技术的发展，相关的检测技术也越来越多，比如：原位杂交、Northern杂交、RNA酶保护实验、基因芯片分析、实时定量PCR分析以及反转录PCR分析(RT-PCR)等。其中的RT-PCR分析由于操作简单，检测mRNA水平灵敏，被认为是检测基因表达的主要手段之一。RT-PCR是一种将反转录(ReverseTranscription；RT)反应和PCR(PolymeraseChainReaction)反应组合在一起的检测技术。其中的RT(反转录)反应是RT-PCR技术的关键，它是以mRNA为模板，在反转录酶的作用下合成与模板mRNA互补的DNA即cDNA的过程。cDNA的合成和克隆技术已经成为当今分子生物学研究的重要手段。合成cDNA第一链的方法离不开依赖RNA的DNA聚合酶(反转录酶本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种反转录反应液，其特征在于，所述反转录反应液包括：0.1～0.3摩尔/升三羟甲基氨基甲烷；30～50毫摩尔/升硫酸铵；6毫摩尔/升～10毫摩尔/升氯化镁；0.2～0.4摩尔/升氯化钠；2～4毫摩尔/升二硫苏糖醇；100～300毫摩尔/升海藻糖；质量体积百分数为0.001％～0.005％的明胶；1～3毫摩尔/升的乙二醇双四乙酸；脱氧核苷三磷酸各1～3毫摩尔/升；5～20微摩尔/升的Oligo‑dT15引物；10～30微摩尔/升的随机引物；25～75个单位/微升的鼠白血病病毒反转录酶；1.5～2.1个单位/微升的RNA酶抑制剂；0.5体积％～1体积％甘油；以及余量的水。

【技术特征摘要】
1.一种反转录反应液，其特征在于，所述反转录反应液包括：
0.1～0.3摩尔/升三羟甲基氨基甲烷；
30～50毫摩尔/升硫酸铵；
6毫摩尔/升～10毫摩尔/升氯化镁；
0.2～0.4摩尔/升氯化钠；
2～4毫摩尔/升二硫苏糖醇；
100～300毫摩尔/升海藻糖；
质量体积百分数为0.001％～0.005％的明胶；
1～3毫摩尔/升的乙二醇双四乙酸；
脱氧核苷三磷酸各1～3毫摩尔/升；
5～20微摩尔/升的Oligo-dT15引物；
10～30微摩尔/升的随机引物；
25～75个单位/微升的鼠白血病病毒反转录酶；
1.5～2.1个单位/微升的RNA酶抑制剂；
0.5体积％～1体积％甘油；以及
余量的水。
2.根据权利要求1所述的反转录反应液，其特征在于，所述反转录反应液的pH为8.0～
8.8，优选的pH为8.3。
3.根据权利要求1所述的反转录反应液，其特征在于，所述氯化钠的用量是0.3毫摩
尔/升，所述硫酸铵的用量是40毫摩尔/升，所述二硫苏糖醇的用量是3毫摩尔/升，所述乙
二醇双四乙酸的...

【专利技术属性】
技术研发人员：张双宇，刘玉方，李晓晨，孙克非，
申请(专利权)人：天根生化科技北京有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11