【技术实现步骤摘要】
本申请涉及生物技术的，尤其涉及一种通用型磁珠法rna自动化提取试剂盒。
技术介绍
1、转录组学研究一直是生命科学的研究热点，涉及植物、动物、细胞、血液、细菌和真菌等样本类型。基于二代测序的转录组学分析也逐渐成为科学研究的热点，可以针对特定动植物组织、细菌、细胞等的某一发育阶段或状态下，研究包括mrna和非编码rna等的表达变化。
2、在进行建库测序的上游，需要针对这些样本类型进行总rna提取。高质量核酸的提取是保证数据准确的关键步骤，特别是涉及一些较难提取的样本，比如多糖多酚植物样本、油脂丰富的组织样本、难裂解的革兰氏阳性细菌和真菌样本以及一些富含腐殖酸的淤泥样本。
3、因此，需要开发一种通用型强且对复杂样本提取效果较好的磁珠法rna自动化提取试剂盒，以节省人工成本，同时提高核酸的提取率。
技术实现思路
1、本申请旨在至少在一定程度上解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本申请提供一种通用型磁珠法rna自动化提取试剂盒。该试剂盒可以提取植物、动物、细胞、血液、细菌和真菌等样本类型，通用性强。利用本申请的试剂盒提取到的总rna完整性好，得率高，od260/280和od260/230纯度好，能够满足二代测序转录组rna的需求。
2、第一方面，本申请提供一种通用型磁珠法rna自动化提取试剂盒，采用如下技术方案：
3、一种通用型磁珠法rna自动化提取试剂盒，所述试剂盒包括以下组分：通用型裂解液、结合增强剂、磁珠悬浮液、去蛋白液、洗脱液、第一
4、其中，所述通用型裂解液包括盐成分体系、表面活性剂体系、缓冲体系、还原剂体系以及复合蛋白酶体系；
5、所述盐成分体系包括3.5-6m异硫氰酸胍、3-6m尿素、1-2m盐酸胍中的一种或多种；所述表面活性剂体系包括质量浓度为0.5-2％的十六烷基三甲基溴化铵、质量浓度为0.5-1％的聚氧乙烯单叔辛基苯基醚、质量浓度为0.5-1％的脱氧胆酸钠以及质量浓度为5-10％的3-[(3-胆酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸内盐中的一种或多种；
6、所述复合蛋白酶体系包括蛋白酶k、碱性木瓜蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶、溶菌酶、溶壁酶、脂肪酶中的一种或多种的等重量混合酶，浓度为0.4-1mg/ml；
7、其中，所述结合增强剂包括1-2m licl、1-2m nacl、0.2-0.5m ph 4.0-7.0naac、体积百分比5-10％乙二醇、体积百分比5-10％的乙醇以及质量浓度为0.5-2％的十二烷基硫酸钠。
8、利用本申请提供的试剂盒提取各类型样本rna时，先将样本进行前处理，再加入通用型裂解液进行样本的裂解，释放出rna。之后加入结合增强剂、磁珠悬浮液，在适当盐离子、ph值的结合增强液的条件下，将rna结合到经过修饰的磁珠上。继续加入去蛋白液、第一漂洗液和第二漂洗液，进一步去除杂质。最后加入洗脱液，通过改变盐离子浓度及ph值范围，将rna从磁珠上洗脱下来，从而实现对各类型样本rna的提取。
9、本申请提供的试剂盒可以提取植物、动物、细胞、血液、细菌和真菌等样本类型，通用性强。利用本申请的试剂盒提取到的总rna完整性好，得率高，od260/280和od260/230纯度好，能够满足二代测序转录组rna的需求。
10、可选地，所述通用型裂解液中，所述缓冲体系包括ph7.0-9.0、50-100mm的三羟甲基氨基甲烷或ph 5.0-7.0、50-100mm的柠檬酸钠。
11、可选地，所述通用型裂解液中，所述还原剂体系包括20-100mm二硫苏糖醇或体积百分比0.5-1％的巯基乙醇。
12、可选地，所述磁珠悬浮液所用的磁珠为硅羟基磁珠。
13、可选地，所述去蛋白液包括1-2m异硫氰酸钠、50-100mm ph 5.0-7.0的柠檬酸钠、体积百分比20-30％的无水乙醇以及质量浓度为0.5-2％的tween-20。
14、可选地，所述第一漂洗液包括2-3m licl、0.5-2m nacl以及质量浓度为10-30％的聚乙二醇6000。
15、可选地，所述第二漂洗液为80％乙醇。
16、可选地，所述洗脱液为水。
17、综上所述，本申请包括以下至少一种有益技术效果：
18、本申请提供的试剂盒可以提取植物、动物、细胞、血液、细菌和真菌等样本类型，通用性强。利用本申请的试剂盒提取到的总rna完整性好，得率高，od260/280和od260/230纯度好，能够满足二代测序转录组rna的需求。
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1.一种通用型磁珠法RNA自动化提取试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括以下组分：通用型裂解液、结合增强剂、磁珠悬浮液、去蛋白液、洗脱液、第一漂洗液和第二漂洗液；
2. 根据权利要求1所述的通用型磁珠法RNA自动化提取试剂盒，其特征在于，所述通用型裂解液中，所述缓冲体系包括pH7.0-9.0、50-100mM的三羟甲基氨基甲烷或pH 5.0-7.0、50-100mM的柠檬酸钠。
3.根据权利要求1所述的通用型磁珠法RNA自动化提取试剂盒，其特征在于，所述通用型裂解液中，所述还原剂体系包括20-100mM二硫苏糖醇或体积百分比0.5-1%的巯基乙醇。
4.根据权利要求1所述的通用型磁珠法RNA自动化提取试剂盒，其特征在于，所述磁珠悬浮液所用的磁珠为硅羟基磁珠。
5. 根据权利要求1所述的通用型磁珠法RNA自动化提取试剂盒，其特征在于，所述去蛋白液包括1-2M异硫氰酸钠、50-100mM pH 5.0-7.0的柠檬酸钠、体积百分比20-30%的无水乙醇以及质量浓度为0.5-2%的Tween-20。
6. 根据权利要求1所述的通
7.根据权利要求1所述的通用型磁珠法RNA自动化提取试剂盒，其特征在于，所述第二漂洗液为80%乙醇。
8.根据权利要求1所述的通用型磁珠法RNA自动化提取试剂盒，其特征在于，所述洗脱液为水。
...【技术特征摘要】
1.一种通用型磁珠法rna自动化提取试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括以下组分：通用型裂解液、结合增强剂、磁珠悬浮液、去蛋白液、洗脱液、第一漂洗液和第二漂洗液；
2. 根据权利要求1所述的通用型磁珠法rna自动化提取试剂盒，其特征在于，所述通用型裂解液中，所述缓冲体系包括ph7.0-9.0、50-100mm的三羟甲基氨基甲烷或ph 5.0-7.0、50-100mm的柠檬酸钠。
3.根据权利要求1所述的通用型磁珠法rna自动化提取试剂盒，其特征在于，所述通用型裂解液中，所述还原剂体系包括20-100mm二硫苏糖醇或体积百分比0.5-1%的巯基乙醇。
4.根据权利要求1所述的通用型磁珠法rna自动化提取试剂盒，其特征在于，所述磁珠悬浮液所用的...
【专利技术属性】
技术研发人员：邹爱兰，高玉洁，李英博，吴凡，魏诏，刘玉方，李晓晨，孙克非，
申请(专利权)人：天根生化科技北京有限公司，
类型：发明
国别省市：
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