病毒性出血性败血症病毒的RT-PCR检测试剂盒及其制备方法技术

病毒性出血性败血症病毒的RT-PCR检测试剂盒及其制备方法，涉及一种RT-PCR检测试剂盒。所述病毒性出血性败血症病毒的RT-PCR检测试剂盒设有盒体、操作说明书和检测试剂；操作说明书和检测试剂设在盒体内，所述检测试剂包括裂解液、吸附液、洗涤液、DEPC处理水、反转录反应液、VHSV-PCR反应液、阳性对照和阴性对照。制备盒体；配制检测试剂；将操作说明书、裂解液、吸附液、洗涤液、DEPC处理水、反转录反应液、VHSV-PCR反应液、阳性对照和阴性对照置入盒体内，即得病毒性出血性败血症病毒的RT-PCR检测试剂盒。试剂齐全，操作简单。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种RT-PCR检测试剂盒，尤其是涉及病毒性出血性败血症病毒(Viral hemorrhagic septicemia virus, VHSV)的 RT-PCR 检测试剂盒及其制备方法。
技术介绍
病毒性出血性败血症(Viral hemorrhagic septicemia, VHS)是感染鲑类、蹲鱼、大菱鲆、鲈鱼、漠斑牙鲆、褐鳟、茴鱼等多种鱼类的一种致死性传染性疾病。该病导致鱼皮肤、肾脏和肝脏出血，死亡率约为90%。VHS的病原是病毒性出血性败血症病毒(VHSV)，属于弹状病毒科Novirhabdovirus属。VHSV基因组为一段单链负链RNA，其长度约12kp，线性基因组编码5个蛋白，包括:核衣壳蛋白(N蛋白)，两个结构蛋白(P和M蛋白)，糖蛋白(G蛋白)、RNA聚合酶(L蛋白)和一个非结构蛋白(NV蛋白)，顺序为3’ -Leader-N-P-M-G-NV-L-TraiIer-5’。VHSV病毒粒子长约180nm，宽约70nm。在国际动物卫生组织和我国进境动物一、二类传染病名录中均被列为必报疫病。国际组织通常采用一些限制措施，从而避免染病鱼类流动到其他地区和国家本文档来自技高网...

【技术保护点】
可特异性检测病毒性出血性败血症病毒的引物，其特征在于所述引物为：VHSN?F：其核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示；VHSN?F：其核苷酸序列如SEQ?ID?NO.2所示。

【技术特征摘要】
1.可特异性检测病毒性出血性败血症病毒的引物，其特征在于所述引物为: VHSN-F:其核苷酸序列如SEQ ID N0.1所示； VHSN-F:其核苷酸序列如SEQ ID N0.2所示。2.病毒性出血性败血症病毒的RT-PCR检测试剂盒，其特征在于设有盒体、操作说明书和检测试剂；操作说明书和检测试剂设在盒体内，所述检测试剂包括裂解液、吸附液、洗涤液、DEPC处理水、反转录反应液、VHSV-PCR反应液、阳性对照和阴性对照。3.如权利要求2所述病毒性出血性败血症病毒的RT-PCR检测试剂盒的制备方法，其特征在于包括以下步骤: 1)制备盒体； 2)配制检测试剂: 裂解液为:5mol/L盐酸胍，0.lmol/L EDTA，去离子水定容至1L，pH为8.0 ; 吸附液为:将5g玻璃粉放在25 30mL水中悬浮,然后再加入等体积的硝酸反应,最后重新加水悬浮即可； 洗洚液为:0.lmol/L氯化钠，lmmol/L EDTA, 10mmol/L Tris-HCl,去离子水定容至1L,pH为7.5，再加入等体积的无水乙醇； DEPC处理水:往超纯水中加入DEPC至终浓度为0.1%，振荡2h后，高温高压灭菌2次；反转录反应液:每6 ii L反转录反应液含有I U L50mM VHSN-R引物；1 y L dNTP混合物，每种 dNTP 浓度为 IOmM ；2 u L5 XPrimescript 缓冲液；0.25 u L RNase 抑制剂；0.25 y L 逆转录酶，购自中国大连宝生物公司；0.3iiL甘油；1.2iiL DEPC处理水； VHSV-PCR 反应液:每 18 ii L VHSV-PCR 反应液含有 I U LlOmM VHSN-F 引物；I u LlOmMVHSN-F 引物；I ii L dNTP 混合物，每种 dNTP 浓度为 2.5mM ；0.25 u L Taq DNA 聚合酶；2 ii LlO X PCR 缓冲液；1.5iiL 甘油；11.25iiL 双蒸水； 阴性对照=DEPC处理水； 阳性对照:将体外转录得到的VHSV核蛋白基因RNA片段稀释到IO4拷...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈新华，胡国海，敖敬群，母尹楠，
申请(专利权)人：国家海洋局第三海洋研究所，
类型：发明
国别省市：